泰州地區醫院常見(jiàn)致病菌的幾種消毒劑耐藥性分析

【摘要】  　　目的 調查泰州地區各醫院主要致病菌的消毒劑耐藥情況。 方法 在泰州地區5所醫院的各類(lèi)環(huán)境、高�？剖�、使用中消毒劑進(jìn)行采樣，在樣品中分離和鑒定4種常見(jiàn)致病菌（金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，大腸桿菌，綠膿桿菌），選擇分離得到的菌株，在常用高中低效消毒劑內分別選取一種（84、碘伏、醋酸氯已定），測定消毒劑對菌株的最低抑菌濃度（MIC）、最低殺菌濃度（MBC），與標準菌株比較，確定耐藥菌株，并統計分析。 結果 分離4種致病菌共62株，包括金黃色葡萄球菌10株，表皮葡萄球菌14株，銅綠假單胞菌28株，大腸埃希菌10株。金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌對碘伏、醋酸氯已定未發(fā)現抗藥性產(chǎn)生；表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌對84未發(fā)現抗藥性產(chǎn)生；分離出6株金黃色葡萄球菌對84已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性（耐藥率60%）。 結論 醫院消毒劑使用不合理，尤其是高效消毒劑濫用，已致使醫院菌株對常用消毒劑產(chǎn)生抗藥性。

 

【關(guān)鍵詞】  消毒劑 金黃色葡萄球菌 耐藥性

 

　　消毒滅菌是控制醫院感染的重要方法，隨著(zhù)消毒劑的應用，細菌對消毒劑逐漸產(chǎn)生耐藥性是不可避免的。消毒劑抗藥性在全球呈上升趨勢，而相關(guān)研究在國內尚處于起步階段。本文在醫院常用消毒劑使用和常見(jiàn)病原體分布調查的基礎上對常見(jiàn)致病菌耐藥情況進(jìn)行研究分析，旨在為為衛生行政部門(mén)制訂安全、合理、有效的消毒劑使用規范提供參考，預防和減少耐藥性細菌的產(chǎn)生。

 

　　1  材料與方法

 

　　1.1  標準菌株  革蘭陽(yáng)性球菌以金黃色葡萄球菌ATCC6538為標準菌株，革蘭陰性桿菌以大腸桿菌8 099為標準菌株。取第10代營(yíng)養瓊脂24h培養物，制成 5×108cfu/ml 金黃色葡萄菌、大腸桿菌懸液。

 

　　1.2  主要試劑和儀器  0.5%碘伏和0.5%醋酸氯已定購自興化市醫療用品公司;“84”消毒液(原液有效含氯量為4%,試驗時(shí)用無(wú)菌蒸餾水稀釋200倍)為江蘇愛(ài)特福公司產(chǎn)品; ATB自動(dòng)細菌鑒定儀和生化鑒定試劑條為法國生物梅里埃產(chǎn)品。

 

　　1.3  致病菌分離和鑒定  參照國家標準GB/T 18204-2000［1］和《伯杰氏細菌手冊》［2］的相關(guān)條目處理樣品、分離和鑒定4種致病菌，大量樣品用ATB自動(dòng)細菌鑒定儀鑒定。

 

　　1.4  實(shí)驗方法［3］

 

　　1.4.1  有效含量測定  有效碘、有效氯、醋酸氯已定含量的測定按《消毒技術(shù)規范》2002版的有關(guān)方法進(jìn)行檢測。

 

　　1.4.2  中和劑選擇試驗  采用中和劑鑒定試驗分別對每種消毒劑的中和劑進(jìn)行選擇，最終確定0.5%碘伏用1.0%硫代硫酸鈉、0.5%醋酸氯已定用5.0%吐溫80、84消毒液用1.0%硫代硫酸鈉。

 

　　1.4.3  細菌繁殖體懸液的制備  取凍干菌種管，超凈臺內打開(kāi)，以吸管加入適量營(yíng)養肉湯，輕柔吹吸數次，使菌種融化分散。取含5.0 ml營(yíng)養肉湯培養基試管，滴入少許菌種懸液，置37℃培養24h。用接種環(huán)取第1代培養的菌懸液，劃線(xiàn)接種于營(yíng)養瓊脂平板上，于37℃ 培養24h。挑取上述第2代培養物中典型菌落，接種于營(yíng)養瓊脂斜面，于37℃ 培養24h，即為第3代培養物。取菌種第6代的營(yíng)養瓊脂斜面新鮮培養物，用吸管吸取5.0ml稀釋液加入斜面試管內，反復吹吸，洗下菌苔。隨后，用吸管將洗液移至另一無(wú)菌試管中，在手掌上振敲 80 次，以使細菌懸浮均勻。初步制成的菌懸液，先用細菌濃度比濁測定法粗測其含菌濃度，然后以含1%蛋白胨的PBS稀釋至5×108cfu/ml。試驗中應將試驗用菌懸液進(jìn)行活菌培養計數，其作用濃度應為5×105cfu/ml～5×106cfu/ml。細菌繁殖體懸液暫存在 4℃冰箱內備用，不得過(guò)夜。

 

　　1.4.4  最小抑菌濃度試驗(MIC)  采用試管系列稀釋法。在雙倍營(yíng)養肉湯5ml中加入0.1ml菌懸液，再加入經(jīng)過(guò)倍比稀釋的不同濃度消毒劑5ml，接種時(shí)，應由低濃度向高濃度依次接種，留2支不加消毒劑，作為陽(yáng)性對照，取2支含營(yíng)養肉湯的試管，作為陰性對照。所有樣本經(jīng)37℃培養48h，觀(guān)察試管肉湯的變化，以抑制細菌生長(cháng)的最低濃度為MIC值。試驗重復3次，以其平均值確定醫院常見(jiàn)菌株和標準菌株的MIC值。

 

　　1.4.5  最小殺菌濃度試驗(MBC)  采用試管系列稀釋法，并用中和劑中止殘留消毒劑的作用。在雙倍營(yíng)養肉湯5ml中加入0.1ml菌懸液，再加入經(jīng)過(guò)倍比稀釋的不同濃度消毒劑5ml，同樣設陽(yáng)性和陰性對照，作用4h后用中和劑1.5ml中止殘留消毒劑的作用；10min后，經(jīng)37℃培養48h，觀(guān)察試管肉湯的變化，無(wú)細菌生長(cháng)的最低濃度即為MBC值。試驗重復3次，以其平均值確定醫院常見(jiàn)菌株和標準菌株的MBC值。

 

　　2  結果

 

　　2.1  致病菌分離鑒定  在醫院各類(lèi)環(huán)境中共分離微生物90株，其中有金黃色葡萄球菌10株，表皮葡萄球菌14株，綠膿桿菌28株，大腸埃希菌10株。

 

　　2.2  3種消毒劑對金黃色葡萄球菌的抑菌、殺菌結果  結果顯示，碘伏、醋酸氯已定對7株金黃色葡萄球菌MIC一致，分別為312.5mg/L、5.0mg/L，小于或等于標準菌株的MIC；對7株金黃色葡萄球菌MBC一致，分別為625mg/L、500mg/L，等于標準菌株的MBC。另外，分離出一株金黃色葡萄球菌MIC值為800mg/L,MBC值為800mg/L，大于標準菌株的MIC、MBC值。見(jiàn)表1。

 

　　表1  3種消毒劑對10株金黃色葡萄球菌MIC、MBC試驗結果（略）

 

　　注：試驗溫度為20～22℃，試驗重復3次，質(zhì)控樣品結果無(wú)異常，此表中未列出。

 

　　2.3  3種消毒劑對表皮葡萄球菌的抑菌、殺菌結果  實(shí)驗發(fā)現表皮葡萄球菌對84、碘伏、醋酸氯已定的MIC分別在200mg/L、312.5mg/L、5.0mg/L，小于或等于標準菌株的MIC。MBC分別在400mg/L、625mg/L、500mg/L，小于或等于標準菌株的MBC。

 

　　2.4  3種消毒劑對大腸埃希菌MIC、MBC試驗結果  消毒劑對各菌株的MIC、MBC結果如下：同一消毒劑對不同菌株的MIC、MBC值均相同，84、碘伏、醋酸氯已定分別在400mg/L、312.5mg/L、3.2mg/L，與標準菌株的MIC相同。MBC分別在800mg/L、625mg/L、12.5mg/L，與標準菌株的MBC相同。

 

　　2.5  3種消毒劑對綠膿桿菌的抑菌、殺菌結果  在本試驗條件下，測得84、碘伏、醋酸氯已定對綠膿桿菌的MIC分別為200mg/L、312.5mg/L、3.2mg/L，小于或等于標準菌株的MIC。MBC分別為800mg/L、625mg/L、12.5mg/L, 小于或等于標準菌株的MBC。

 

　　3  討論

   

　　醫院感染面臨的挑戰主要來(lái)自三個(gè)方面，即病原體、人類(lèi)本身以及周?chē)�環(huán)境,消毒滅菌是控制醫院感染的重要途徑。通過(guò)消毒和滅菌工作，可殺滅或消除醫院環(huán)境中、醫療用品及日常生活用品上的病原體，切斷傳播途徑，消除環(huán)境儲源，防止醫院感染發(fā)生。但在上世紀60年代，國外陸續發(fā)現許多菌株對消毒劑產(chǎn)生抗性，最早的是季胺鹽類(lèi)（QAC），隨之是雙胍類(lèi)如洗必太，近年來(lái)又發(fā)現對酚類(lèi)、醇類(lèi)、碘類(lèi)的抗性。隨著(zhù)細菌對消毒劑抗性的產(chǎn)生，其殺菌效能日見(jiàn)低下，不得不一再更新。

   

　　本次實(shí)驗選擇醫院分離的4種常見(jiàn)致病菌，在常用高中低效消毒劑內分別選取一種，通過(guò)最小抑菌濃度試驗和最小殺菌濃度試驗檢測致病菌對常用消毒劑的抗藥性。結果顯示分離出的10株金黃色葡萄球菌中有６株對84已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性。但未對其他消毒劑產(chǎn)生抗藥性。從金黃色葡萄球菌對84的單一耐藥性提示，細菌對某種消毒劑產(chǎn)生耐藥性并不一定對其他類(lèi)型消毒劑同時(shí)產(chǎn)生耐藥性，從醋酸氯已定對革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的MIC、MBC值不同，提示消毒劑醋酸氯已定對革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌有不同的抑菌機制。細菌對消毒劑產(chǎn)生抗藥性的原因具有多樣性，因此消毒劑適量合理的配伍使用會(huì )減少耐藥的產(chǎn)生和提高效率。

   

　　本研究建立在對本市各大醫院消毒劑使用情況和醫院常見(jiàn)病原體分布情況調查的基礎上，覆蓋面較廣，基本代表本市實(shí)際情況。但實(shí)際篩選出的耐藥菌株樣本量較少，菌種只限于金黃色葡萄球菌，沒(méi)有能進(jìn)一步完善耐藥質(zhì)粒譜，沒(méi)有能完成質(zhì)粒序列的測定。

 

作者：楊海玉    作者單位：泰州市疾病預防控制中心微生物檢驗科,江蘇 泰州 225300.

【參考文獻】

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