病毒感染的實(shí)驗室診斷（4）

四、特異性抗體的檢測特異性抗體的檢測

 

病毒感染后通常誘發(fā)針對病毒一種或多種抗原免疫應答，特異性抗體效價(jià)升高或lgM抗體出現有輔助臨床診斷的價(jià)值。

 

(一)補體結合試驗(CF) CF分二個(gè)階段：1.抗原與抗體(一個(gè)為已知，一個(gè)為待檢)混合，加入定量補體，若抗原與抗體相對應，則補體被消耗；2.在上述混合物中加入溶血素致敏的綿羊紅細胞，若補本已與抗原抗體復合物完全結合，沒(méi)有剩補體存在，那么綿羊紅細胞不會(huì )溶血，結果為陽(yáng)性，說(shuō)明待檢標本中有特異性存在，出現陽(yáng)性結果時(shí)血清標本最高稀釋度為抗體的效價(jià)。反之為陰性結果。由于補體結合抗體產(chǎn)生早，消失快，適于診斷病毒近期感染。(表80-5)。

 

*此例的抗體效價(jià)升高4倍，有診斷意義。

 

(二)中和試驗(NT) 在活體或活細胞內測定病毒被特異性抗體中和、而失去致病力的試驗。試驗時(shí)：①須先測出病毒的半數致死量(LD50)或半數感染量(ID50)；②隨即取活病毒與被試血清按不同比例混合，放置1～2小時(shí)讓其充分中和；③將病毒與血清混合液注入各組動(dòng)物、雞胚或組織細胞培養管內培養；④根據動(dòng)物、雞胚死亡數或細胞病變的管數，計算出百分比(%)，然后再計算這些試驗對象中的半數免于死亡或免于致病所需要的最少量血清(或最大量的病毒)，就是該血清的中和抗體效價(jià)(稱(chēng)為50%終點(diǎn)的中和效價(jià))。診斷病毒性疾病時(shí)，須取病人雙份血清同時(shí)做對比試驗，病后血清的中和抗體效價(jià)也必須超過(guò)病初血清4倍以上，才能確診(表23-6)。用此法鑒定病毒時(shí)，須將病毒分別與免疫血清及血清正常血清(對照)混合做對比試驗，免疫血清比正常血清多中和50～100倍劑量的病毒，才能斷定是該病毒。、

 

表80-6 病人雙份血清的病毒中和試驗結果(組織細胞培養的中和試驗)

 

說(shuō)明：

①TCID50=組織培養半數感染劑量。

②每種稀釋度接種4支組織細胞培養管；0=未出現細胞致病作用；+=出現細胞致病作用。

③此例的病后血清中和抗體效價(jià)比病初血清增高8倍，有診斷意義。

 

病毒中和抗體的特異性高，持續時(shí)間久，以往受顯性或隱性感染后，血中可長(cháng)期存在中和抗體，所以適用于流行病學(xué)調查或人群免疫水平研究，但因試驗方法繁雜，耗用動(dòng)物、雞胚或細胞培養較多，故一般不作常規使用。

 

(三)血凝抑制試驗(Hemagglutination inhibition test,HIT)某些病毒(流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腦炎病毒等)能凝集紅細胞，而抗體與這些病毒結合后卻能阻止它們的凝集，若雙份血清有≥4倍以上滴度增高，也可用于診斷這類(lèi)病毒感染。本法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟、特異性高，常用于流行病學(xué)調查等。

 

(四)lgM捕捉ELISA 特異性lgM出現于病毒感染的早期或病毒感染的活動(dòng)期，因此可從急性期病人單份血清中檢出特異性lgM，這是病毒感染實(shí)驗室早期診斷的可靠方法。實(shí)驗中先用u鏈血清包被微培板孔，用以捕捉血清標本中的lgM類(lèi)抗體，再加入特異性病毒抗原及酶標抗體以證實(shí)特異性lgM的存在�，F已廣泛用于病毒病的早期診斷。在先天性感染中，lgM檢測有特殊意義，因lgM不能通過(guò)胎盤(pán)，新生兒血清中發(fā)現抗病毒lgM提示為宮內感染。