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【摘要】 目的:建立抗菌中藥對臨床常見(jiàn)病原性細菌抑菌作用的檢測方法。方法:選擇6種常用抗菌中藥（黃連、苦參、連翹、大黃、生地、知母)，分別采用水提法制備至質(zhì)量濃度1mg/L。應用液體稀釋法測定上述中藥對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度(MIC)。結果:建立了中藥抑菌作用的檢測方法。黃連、大黃與連翹抑制細菌的作用較強，MIC值均≤0.05mg/L，其中黃連對金黃色葡萄球菌的抑菌作用最強（MIC值為0.00625mg/L）。結論:應用本方法可以進(jìn)行中藥抑菌作用的檢測�？咕兴帉λ囼灳N表現不同的抑菌作用。
【關(guān)鍵詞】 中草藥；微生物敏感性試驗；抗菌藥；細菌
【ABSTRACT】 Objective:To establish a method to detect the antibacterial activity of traditional chinese medicine against pathegenic bacteria.Methods:Six varieties of traditional chinese medicine(Coptis etc)were selected and extracted with pure water to make concentrated with 1mg/L.Three different common pathogenic bacteria were used to determine the minimal inhibitory concentration(MIC)in vitro with liquid dilution method to the selected medicine.Results:The methods were established to detect the antibacterial activity of traditional chinese medicine.Three herbs had inhibition effects on the strains of test,among which Coptis Chinesis had the strongest effect and MIC was
【KEY WORDS】 Chinese Herb,Microbial Sensitivity Tests,AntiBacterial Agents,Bacteria
中藥幾千年來(lái)為中國人民的健康做出了重大貢獻，在現代預防和控制細菌性感染疾病中也發(fā)揮了積極作用。應用中藥進(jìn)行抗感染治療具有副作用小，藥物來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉等優(yōu)勢［1，2］。在清熱解毒抗菌類(lèi)中藥中開(kāi)發(fā)抗菌藥物具有良好的應用前景。長(cháng)期以來(lái)，對于抗菌中藥作用機理的較少認識限制了其在臨床中的應用。目前，尚無(wú)統一規范的中藥抗菌作用評價(jià)方法。為此，本研究擬應用抗生素最小抑菌濃度檢測方法，檢測6種常用抗菌中藥（大黃、苦參、連翹、黃連、生地、知母）對三種常見(jiàn)病原性細菌（金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌）的抑菌作用，建立一種可以規范的中藥抗菌作用檢測方法。
1 材料與方法
1.1 菌株的選擇
選擇三種不同病原性細菌的標準株：包括金黃色葡萄球菌ATCC29213，銅綠假單胞菌ATCC27853，大腸埃希菌ATCC29523作為受試菌株，以上菌株全部購自中國藥品生物制品檢定所。
1.2 中藥的選擇
選擇常用的清熱解毒類(lèi)中藥（大黃、苦參、連翹、黃連、生地、知母)作為本次研究所用藥物。全部藥物購自河北北方學(xué)院中醫門(mén)診部。
1.3 中藥的提取
分別將上述中藥置于
1.4 細菌的培養與稀釋
將選定的實(shí)驗菌株，接種普通瓊脂培養基
1.5 MIC的測定
按美國臨床實(shí)驗室標準化委員會(huì )（NCCLS）推薦的液體稀釋法測定實(shí)驗菌株的MIC值，通過(guò)瓊脂平板抑菌法觀(guān)察上述不同抗菌中藥的MIC結果。具體應用2倍稀釋法對藥物進(jìn)行稀釋?zhuān)♂屢簽?SPAN lang=EN-US>Mueller－Hinton液體培養基，每種中草藥的劑量分別為0.100、0.050、0.025、0.0125、0.00625mg/L，在每個(gè)試管中加入1.5×108CFU/L的細菌10μL，
2 結果
中藥大黃、黃連和連翹對三種受試菌株都具有較強的體外抗菌活性，MIC值≤0.050mg/L，其中黃連對金黃色葡萄球菌的抑菌作用最強，MIC值為0.025mg/L。而知母、生地和苦參的抑菌作用相對較弱，MIC值＞0.100mg/L，不同中藥對不同細菌表現出不同的抗菌特性。見(jiàn)表1。2008年6月薛建江等：6種常用抗菌中藥對3株常見(jiàn)病原性細菌的抑菌作用檢測第3期2008年6月河北北方學(xué)院學(xué)報（醫學(xué)版）第3期表1 6種常用抗菌中藥對3株受試菌的MIC結果
3 討論
抗生素的應用使人類(lèi)許多嚴重的細菌感染性疾病得到有效控制。然而，由于抗生素的不合理使用導致了大量耐藥性細菌的出現，降低了現有抗生素的應用效率，耐藥性細菌感染嚴重地威脅著(zhù)人類(lèi)的健康。研究和開(kāi)發(fā)抗菌中藥對解決耐藥菌株的產(chǎn)生和抗生素短缺問(wèn)題具有重要意義，通過(guò)研究我們也看到，傳統中藥對常見(jiàn)病原細菌具有一定的抑制作用。
傳統的中藥抑菌實(shí)驗方法存在著(zhù)一些弊端，主要是培養基的使用不統一，菌液制備不標準，接種量也很難控制。因此，將抗生素敏感試驗方法引入中藥抑菌實(shí)驗之中，改變了上述不足，可以將培養基、菌液濃度以及接種量進(jìn)行標準化。從而有助于該方法的推廣使用。
在實(shí)驗中為了避免由于中藥煎液的顏色影響對結果的觀(guān)察，我們在不影響實(shí)驗條件與結果的前提下對MIC檢測方法進(jìn)行了改進(jìn)。采用瓊脂平板方法來(lái)觀(guān)察細菌在中藥作用后是否生長(cháng)。即將不同濃度中藥與受試細菌作用后再分別轉種普通平板培養基，通過(guò)在培養基上的生長(cháng)情況來(lái)進(jìn)行最小抑菌濃度的判定。實(shí)驗結果表明我們的研究方法可行。
本研究結果顯示，黃連、大黃與連翹抑菌作用較強。而另外三種藥物的體外抑菌作用則較弱。不同中藥對不同細菌表現不同的抑菌作用，我們的研究結果與有關(guān)報道一致［4］。
在所檢測藥物中黃連對金黃色葡萄球菌的抑菌作用最強，目前，金黃色葡萄球菌耐藥性問(wèn)題是臨床治療中面臨的一大難題。大量研究報道也指出，黃連對耐甲氧西林的葡萄球菌具有一定的抑菌作用［5，6］，如果能夠進(jìn)一步對黃連的抑菌機理進(jìn)行闡述，將有助于在金葡菌感染中嘗試應用中藥進(jìn)行治療。從而解決金黃色葡萄球菌的多重耐藥問(wèn)題。
在傳統中藥中進(jìn)行抗菌藥物的發(fā)掘，將有助于發(fā)揮傳統中藥在臨床抗感染中的應用，本研究所建立的中藥抗菌作用檢測方法為中藥抗菌作用的進(jìn)一步研究奠定了基礎。
作者：薛建江 喬海霞 劉進(jìn)軍 季建軍 張玉妥 邱景富 《河北北方學(xué)院學(xué)報（醫學(xué)版）》
【參考文獻】
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2 王嵩.中草藥抗細菌感染的研究[J]．北京中醫雜志,2002,21（4）:249251
3 陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)[M]. 北京:人民衛生出版社,1993.67
4 華娟，周明康，周瓊珍,等.五十種傳統清熱解毒藥的抑菌實(shí)驗[J]．中藥材,1995,18（5）:255258
5 余園媛，王伯初，彭亮,等.黃連的藥理研究進(jìn)展[J]．重慶大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,29（2）:107111
6 崔學(xué)軍.黃連及其有效成分的藥理研究進(jìn)展[J]．中國藥師,2006,9（5）:469470
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