復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)用對嗜麥芽寡養單胞菌體外抗菌活性的研究

【摘要】  目的 評價(jià)復方磺胺甲口惡唑分別與替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦兩種β�矁弱０访敢种苿┞�(lián)合應用對于臨床分離30株嗜麥芽寡養單胞菌的體外聯(lián)合抗菌效應。方法 采用棋盤(pán)法設計，微量肉湯稀釋法測定不同濃度組合的2組抗菌藥物對30株嗜麥芽寡養單胞菌的最低抑菌濃度，并計算聯(lián)合抑菌指數(FIC)，判斷聯(lián)合效應。結果 復方磺胺甲口惡唑對嗜麥芽寡養單胞菌的MIC為2/38，與替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應用后，其MIC50顯著(zhù)降低至0.5/9.5，FIC指數分布范圍主要在0～1。結論 復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦兩種β�矁弱０�/酶抑制劑聯(lián)合應用后，對嗜麥芽寡養單胞菌表現為協(xié)同作用和相加作用，并以協(xié)同作用為主。

【關(guān)鍵詞】  嗜麥芽寡養單胞菌復方磺胺甲口惡唑 替卡西林/克拉維酸 頭孢哌酮/舒巴坦 聯(lián)合藥敏

    In vitro antibacterial activity of compound sulfamethoxazole combined

      ABSTRACT  Objective  To evaluate the antibiotic effects of SMZ/TMP combined with TIPC/CA, CPZ/SB respectively against 30 Stenotrophomonas maltophilia.  Methods  The protocol was designed by checkerboard method and the MIC of two groups antibiotics against 30 Stenotrophomonas maltophilia was determined by dilution method and the FIC index was calculated according to MIC results.  Results  The in vitro antibacterial activity of MICs of combinations were lower than those of 3 drugs tested alone. The range of the FIC index was mainly between 0～1.  Conclusion  The FIC index indicated that synergism and additi�瞯ity of SMZ/TMP combined with TIPC/CA, CPZ/SB respectively against 30 Stenotrophomonas maltophilia.

    KEY WORDS  Stenotrophomonas maltophilia;  Compound sulfamothoxazole;  Ticarcillin/clavulanic acid;  Cefoperazone/sulbactam;  FIC

     嗜麥芽寡養單胞菌(Stenotrophomonas malto�瞤hilia)是需氧、非發(fā)酵的革蘭陰性桿菌，該菌廣泛分布于自然界，為主要的條件致病菌和院內感染的病原菌之一，多發(fā)生于老年人且長(cháng)期使用廣譜抗生素和進(jìn)行侵入性治療患者的呼吸道標本中。此菌對常用的抗生素有較高的耐藥性，且對亞胺培南天然耐藥，臨床治療非常困難，病死率較高。復方磺胺甲口惡唑、替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦敏感性雖然相對好些，但其耐藥性仍在20%以上［1］，這三種藥物臨床上單獨使用時(shí)療效不理想，而采用聯(lián)合用藥可提高療效。本文擬探討復方磺胺甲口惡唑分別與替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應用的體外抗菌活性，為臨床聯(lián)合用藥，減少耐藥菌株提供實(shí)驗依據。

    1  材料和方法

　　1.1  菌株

    30株嗜麥芽寡養單胞菌來(lái)源于臨床標本，其中痰28株，膽汁引流物2株，經(jīng)VITEK重新鑒定確認。質(zhì)控菌為銅綠假單胞菌ATCC27853。

    1.2  培養基

    水解酪蛋白(MH)液體培養基(中國藥品生物制品檢定所)。

    1.3  抗菌藥物

    復方磺胺甲口惡唑［甲氧芐啶∶磺胺甲基異口惡唑(1∶19)］(天津金章科技發(fā)展有限公司配制)，替卡西林/克拉維酸，中美史克公司(批號166746，純度94%，含替卡西林3g，克拉維酸0.2g)，頭孢哌酮/舒巴坦，Pfizer制藥有限公司(批號55839229，純度93%，頭孢哌酮/舒巴坦為2∶1)。

    1.4  儀器

    比濁儀(法國B(niǎo)io�睲erieux公司產(chǎn)品)；連續微量加樣器和八道微量加樣器均為美國Eppendorf公司產(chǎn)品)；96孔平板(天津金章科技發(fā)展有限公司)。

    2  方法和結果

    2.1  菌懸液配制

    從已分純并過(guò)夜新鮮培養的細菌平板上挑取4～5個(gè)菌落，接種于MH肉湯中增菌6h，菌液用3ml肉湯以比濁儀校正濁度至1.5×108CFU/ml，再以MH肉湯稀釋至1.5×105CFU/ml。

    2.2  抗菌藥物儲備液配制

    替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦用pH6.0的PBS緩沖液配成最終濃度為1920μg/ml的抗生素儲備液。

2.3  方法

    用微量肉湯稀釋法測3種抗生素對30株嗜麥芽寡養單胞菌的最低抑菌濃度(MIC)，判斷標準按美國CLSI/NCCLS(2005年)標準。微量液體平板棋盤(pán)法：每種藥物最高濃度為其MIC的2倍，倍比稀釋到其MIC的1/16，分別沿無(wú)菌微孔板橫軸、縱軸加不同濃度的兩種藥物的MH肉湯50μl，再將1.5×105CFU/ml菌液100μl加入孔中，37℃過(guò)夜培養，觀(guān)察結果，記錄單獨應用2藥的最低抑菌濃度MIC甲藥單用和MIC乙藥單用，并選擇最佳組合效應時(shí)兩藥聯(lián)合應用時(shí)各自的MIC甲藥聯(lián)用和MIC乙藥聯(lián)用，以計算FIC指數。

    2.4  FIC指數計算與判讀標準

    FIC指數=MIC甲藥聯(lián)合MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)合MIC乙藥單用

    FIC指數≤0.5為協(xié)同作用，＞0.5～1為相加作用，＞1～2為無(wú)關(guān)作用，＞2拮抗作用。

    3  結果

    3.1  MIC值

    復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦單用與聯(lián)合應用對嗜麥芽寡養單胞菌的MIC結果見(jiàn)Tab.1。從Tab.1可見(jiàn)，SMZ/TMP分別與TIPC/CA或CPZ/SB聯(lián)用后，MIC均顯著(zhù)低于單獨應用，表明抑菌作用增強。

    3.2  藥物濃度�怖鄯e抑菌率

    復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦單用與聯(lián)合應用濃度�怖鄯e抑菌百分率曲線(xiàn)見(jiàn)Fig.1及Fig.2。

    3.3  FIC

    復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應用的FIC指數分布見(jiàn)Tab.2。復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸聯(lián)合應用，FIC范圍主要在0～1以協(xié)同和相加為主；與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應用，FIC范圍主要在0.5～1以相加為主。

    4  討論

    嗜麥芽寡養單胞菌是全球關(guān)注的8種多重耐藥菌株之一。由于其外膜通透性低，可誘導型β�矁弱０访窵1、L2的存在、主動(dòng)外排系統及變異迅速等多種耐藥機制，對多數抗生素天然耐藥，治療相當困難。復方磺胺甲口惡唑對嗜麥芽寡養單胞菌的敏感性較高，但該藥為抑菌劑，單用易產(chǎn)生耐藥性。最近的研究表明，其耐藥性有明顯增加趨勢［2］，并與Ⅰ型整合子的存在有關(guān)［3］。成，已廣泛應用�；前吩鲂�劑可與二氫葉酸還原酶(DHFR)相互作用，而磺胺甲口惡唑則與二氫喋啶氨苯甲酸(dihydropteroate)合成酶(DHPS)相互作用，使細菌DNA合成受阻，抑制細菌的生長(cháng)。1972年首先報告了革蘭陰性細菌中由質(zhì)粒介導的Tmpr耐藥性。這是對磺胺增效劑不再敏感的DHFR所引起的。此種新的DHFR與染色體DHFR無(wú)關(guān)，其來(lái)源和多數革蘭陰性菌中獲得性DHFR的來(lái)源均不清楚。目前在革蘭陰性兼性厭氧桿菌中已發(fā)現了16種不同型別的耐藥性DHFR。其中許多與轉座子或DNA序列組件有關(guān)。

    近年來(lái)，細菌耐藥性的逐年上升和耐藥性快速傳遞已經(jīng)成為臨床感染性疾病治療的難題。文獻報道Ⅰ型整合子和磺胺耐藥基因的存在是導致磺胺耐藥的主要原因［4］。整合子是細菌基因組中可移動(dòng)性遺傳物質(zhì)，Ⅰ型整合子可以整合一個(gè)或多個(gè)耐藥基因盒，從而形成多重耐藥，它介導的耐藥機制傳播的快，能增加磺胺的MIC［4］，表明復方磺胺甲口惡唑的應用會(huì )受到一定限制。所以單用藥物往往不能有效控制感染，從而使聯(lián)合用藥成為必然。Zelenitsky等［5］報道對于嗜麥芽寡養單胞菌感染，單獨應用時(shí)復方磺胺甲口惡唑的敏感性最高，抗菌藥物合理聯(lián)合應用后對嗜麥芽寡養單胞菌的抑菌作用顯著(zhù)優(yōu)于單一的抗生素應用。

本實(shí)驗表明，復方磺胺甲口惡唑與替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應用，可優(yōu)于單藥使用，體外抗菌活性明顯增加，各自的MIC值均顯著(zhù)降低，聯(lián)合應用后比單獨應用濃度�怖鄯e抑菌百分率曲線(xiàn)明顯左移，效應增強，以協(xié)同和相加作用為主，復方磺胺甲口惡唑和替卡西林/克拉維酸聯(lián)合應用協(xié)同和相加作用占80%，復方磺胺甲口惡唑與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應用協(xié)同和相加作用占83.3%，其機制可能為兩類(lèi)藥物作用于細菌的不同靶位。因此，在治療嗜麥芽寡養單胞菌感染中建議將替卡西林/克拉維酸或頭孢哌酮/舒巴坦與復方磺胺甲口惡唑聯(lián)合應用以提高療效，減少耐藥株產(chǎn)生。

作者：鄧笑偉 劉長(cháng)庭 《中國抗生素雜志》