四種中藥對10株大腸埃希菌產(chǎn)酶臨床株體外抗菌的實(shí)驗觀(guān)察

摘要 目的: 觀(guān)察所選4種中藥的水提取物對產(chǎn)超廣譜β－內酰胺酶( ESBLs) 大腸埃希菌臨床株體外抑制作用 方法:采用MH瓊脂平板稀釋法, 測定中藥對測試菌的最低抑菌濃度(M IC) 結果: 五味子對產(chǎn)酶大腸埃希菌臨床株的抗菌作用最好，黃連次之結論: 五味子 黃連對產(chǎn)酶臨床株有抑制作用，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新中藥抗菌藥物提供了前期的依據。

關(guān)鍵詞    中藥  大腸埃希菌臨床株  β－內酰胺酶 

　  大腸埃希菌是臨床標本中最常分離的致病菌,由于其產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶( ESBLs) 的比率越來(lái)越高,使臨床治療選藥困難而倍受關(guān)注【1】。中藥抗菌有著(zhù)悠久的歷史并具有多數抗生素所不具備的優(yōu)點(diǎn)。因此我們選擇了四種中藥對大腸埃希菌產(chǎn)酶臨床株進(jìn)行體外抗菌試驗,現報道如下。

1 　材料和方法

1. 1 　實(shí)驗材料

1. 1.1　實(shí)驗菌株　由陜西中醫學(xué)院附屬醫院微生物室提供, 并經(jīng)上海復星微生物鑒定及藥敏分析系統鑒定 

1.1.2　質(zhì)控菌株: 用大腸埃希菌ATCC25922，肺炎克雷伯菌ATCC70063 進(jìn)行質(zhì)量控制監測。

1.1.3 　藥品和培養基　藥敏紙片和MH 瓊脂購自法國梅里埃公司。中藥 購置陜西百姓樂(lè )醫藥連鎖公司。配制按說(shuō)明書(shū)及全國臨床檢驗操作規程進(jìn)行。

1.2實(shí)驗方法

1.2.1中藥水煎劑制備　取上述4 味中草藥,分別稱(chēng)重,切細磨碎,加10 倍量水, 浸泡1 h, 用微火加熱煮沸30 min (注意添加蒸餾水),過(guò)濾。藥渣再加同量的水,加熱100 ℃30 min ,過(guò)濾,將兩次濾液合并, 蒸發(fā)得濃縮液濃度為1kg/1L,滅菌后備用。    

1.2.2菌懸液的制備（直接菌落法）：　挑取培養18～24 h 的純菌, 用無(wú)菌生理鹽水調試至0. 5 麥氏比濁單位, 其含菌量為1. 5×108CFU/ m l， 再1∶10稀釋, 使其含菌量為1. 5×107CFU/ m l菌懸液,備用。

1.2.3ESBLs 的檢測 在MH 瓊脂上分別貼上頭孢他啶、頭孢他啶/ 克拉維酸及頭孢噻肟、頭孢噻肟/ 克拉維酸紙片。置于37 ℃,16 h 后觀(guān)察結果,任何一組紙片加克拉維酸比不加克拉維酸的抑菌環(huán)直徑大于5 mm 的為陽(yáng)性, 否則為陰性。用大腸桿菌A TCC 25922 、肺炎克雷伯菌A TCC 700603 分別做陰性、陽(yáng)性質(zhì)控對照。

1.2.4藥物最低抑菌濃度（MIC) 測定　采用NCCLS (美國國家臨床實(shí)驗室標準委員會(huì )) 推薦的瓊脂二倍稀釋法, 將M－H 瓊脂培養基配成含生藥量500  250   125   62.5   31.25  15.63  7.81  3.91  1. 95mg/ ml共9個(gè)藥物濃度。第9和10為對照。用1微升移液器點(diǎn)種, 每點(diǎn)含菌104個(gè), 35 ℃培養18～24 h , 次日觀(guān)察結果。

2 結果  4種中藥中對10 株臨床菌株的抑菌作用見(jiàn)下表

表1 　中藥抗菌試驗

表2 四種中藥對10株產(chǎn)ESBLs 大腸埃希菌的MIC 的測定結果（mg/ml）

3 討論

      近年來(lái),由于抗生素的不合理應用,使細菌的耐藥性增強,多重耐藥菌株不斷增加,在醫院的各類(lèi)感染中,革蘭陰性細菌仍是主要的感染菌,而其中又以大腸埃希菌為多[2 ] 。目前針對非產(chǎn)酶大腸的中藥研究較為普遍,但對產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌臨床菌株的中藥方面研究卻鮮有報道,本研究為開(kāi)發(fā)中藥抗菌藥物提供廣闊的應用前景以及實(shí)踐依據。

從表2 中可見(jiàn)黃連對9株實(shí)驗菌的MIC為62.5mg/ml，五味子對8株實(shí)驗菌的MIC為31.25mg/ml，可見(jiàn)五味子對產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌臨床株抗菌作用優(yōu)于黃連,黃柏和黃芩。而五味子屬于收澀藥,因此中藥對于產(chǎn)ESBL s 大腸埃希菌臨床株的抗菌活性和中藥的主要功能并不一致。

      中藥中不含酰胺鍵,ESBL s 對其就沒(méi)有水解作用。加上中藥的成分復雜,用藥后與動(dòng)物機體有多種作用機制,除了直接抗菌作用外, 還具有增強機體免疫功能, 誘導自身抗菌活性等作用。一般在臨床不易形成耐藥。本次實(shí)驗預示了五味子和黃連可能具有廣泛的臨床應用前景。但是上述實(shí)驗僅僅是體外藥物敏感試驗, 只是將藥物與致病菌直接接觸,  也僅能反映藥物的體外抗菌活性。由于沒(méi)有機體的參與, 并不能完全說(shuō)明藥物在體內的作用,因此我們還將繼續通過(guò)建立動(dòng)物模型,設定客觀(guān)的觀(guān)察評價(jià)標準, 進(jìn)行研究和探討。

 

參考文獻

1張　敏，張迎春.產(chǎn)β-內酰胺酶菌株感染臨床治療選藥研究[J].臨床薈萃,2005，20（10）：576－577

2 古東東等. 臨床標本細菌分離及細菌耐藥性監測[J ] . 中華醫院感染學(xué)雜志,2003 ,13 (1) :67～70.