無(wú)菌體液細菌培養的新方法探討

【摘要】  目的：探討無(wú)菌體液培養的最佳方法。方法：對278份無(wú)菌體液標本用雙相液體培養基法和直接接種法培養分離細菌。結果：雙相液體培養基檢測278份標本，40份培養出細菌，陽(yáng)性率為14.4％，直接接種法培養19份標本培養出細菌，陽(yáng)性率為6.8％，經(jīng)SPSS 11.5軟件處理，χ2檢驗，P<0.01,差異有非常顯著(zhù)性。結論：用雙相液體培養基法培養無(wú)菌體液標本，可明顯提高細菌檢出率，是較好的方法。

【關(guān)鍵詞】  無(wú)菌體液；細菌培養；雙相液體培養基

    無(wú)菌體液(胸腹水、關(guān)節液、膽汁、膿液等)標本細菌培養是診斷各種細菌感染的一種重要方法。直接接種法(傳統方法)細菌培養陽(yáng)性率低,往往易造成誤診,為改變上述現狀,作者經(jīng)過(guò)兩年的研究,終于發(fā)現一種新的細菌培養方法，即能做到床邊接種又能增菌分離，現報告如下。

　　1  材料和方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  標本來(lái)源 

　　278份標本為我院住院患者標本，其中胸腔積液52份，腹水51份，腦脊液49份，腹透液53份，膽汁37份，膿液36份。

　　1.1.2  培養基 

　　雙相液體培養基(上海奧普生物醫藥有限公司提供)。

　　1.2  方法

　　1.2.1  標本采集

　　1.2.1.1  雙相液體培養基接種法 

　　臨床醫生床邊采樣(立即接種)，無(wú)菌操作采集無(wú)菌體液標本≥3 ml,注入雙相液體培養瓶?jì)? 充分混勻,并覆蓋整個(gè)固相培養基,立即送實(shí)驗室，置35℃孵育箱培養。

　　1.2.1.2  直接接種法 

　　用接種環(huán)直接接種血平板、巧克力平板和麥康凱平板，置35℃孵育箱培養。

　　1.2.2  結果判斷 

　　次日將培養瓶取出,觀(guān)察液體是否混濁,固相是否有菌落和菌苔生長(cháng),若無(wú)菌生長(cháng)或混濁,繼續培養。如有菌生長(cháng),立即涂片染色鏡檢、鑒定和藥敏實(shí)驗，48 h無(wú)菌生長(cháng),報告未見(jiàn)細菌生長(cháng)。

　　1.2.3  鑒定 

　　涂片、染色分屬后，采用珠海黑馬生物鑒定板進(jìn)行鑒定、藥敏［1，2］。

　　2  結果

　　2.1  兩種方法檢測分離出的細菌標本數 

　　用雙相液體培養基檢測278份標本，40份培養出細菌，陽(yáng)性率為14.4％。胸腔積液標本陽(yáng)性8份，陽(yáng)性率15.4%,腹水標本陽(yáng)性8份，陽(yáng)性率15.7%,腦脊液標本陽(yáng)性5份，陽(yáng)性率10.2%,腹透液標本陽(yáng)性8份，陽(yáng)性率15.1%，膽汁標本陽(yáng)性6份，陽(yáng)性率16.2%,膿液標本陽(yáng)性5份，陽(yáng)性率13.9%；而用直接法培養，僅有19份標本培養出細菌，陽(yáng)性率為6.8％。各標本培養出的陽(yáng)性標本數分別是：胸腔積液5份，腹水4份，腦脊液2份，腹透液3份，膽汁3份，腦脊液2份；陽(yáng)性率分別是：9.6%、7.8%、4.1%、5.7%、8.1%、5.6%。經(jīng)統計學(xué)軟件SPSS 11.5處理，χ2檢驗，P＜0.01,結果差異有非常顯著(zhù)性。

　　2.2  兩種方法檢出時(shí)間及陽(yáng)性率 

　　用雙相液體培養基培養檢出40株細菌，18 h～24 h檢出38株（95％），24 h～48 h檢出2株（5％）；直接法培養檢出19株細菌，18 h～24 h檢出16株（84%），24 h～48 h檢出3株（16%），各菌屬細菌檢出時(shí)間情況見(jiàn)表1。表1  雙相液體培養基和直接法各菌屬細菌檢出時(shí)間份(略)

2.3  雙相液體培養基內檢出細菌種類(lèi) 

　　278份標本在雙相液體培養基內檢出40株細菌，腸桿菌屬15株（37.5％），葡萄球菌屬8株（20.0％），腸、鏈球菌屬6株（15.0％），非發(fā)酵菌6株(15.0%)，真菌5株（12.5％），各菌屬檢出情況見(jiàn)表2。表2  雙相液體培養基檢出的細菌種類(lèi)份(略)

　　3  討論

    雙相液體培養基是由固相和液相組成。固相是一塊透明的瓊脂面，固定在瓶?jì)缺诘囊粋�，含多種營(yíng)養物質(zhì)，能觀(guān)察到菌落和菌苔，直接作鑒定和藥敏。液相肉湯也含有豐富的營(yíng)養成分，如多種生長(cháng)因子、氨基酸、血紅素、維生素B6等，除常見(jiàn)菌生長(cháng)良好外，苛養菌也生長(cháng)較好。

    本研究從278份體液標本中分離出40株細菌，其陽(yáng)性率為14.4％，而直接接種法278份標本只分離出19株細菌，陽(yáng)性率為6.8％，經(jīng)χ2檢驗（P<0.01)，差異有非常顯著(zhù)性。雙相液體培養基陽(yáng)性率比直接接種法高1倍多。該培養基陽(yáng)性檢出率高的主要原因有：做到標本及時(shí)接種（床邊接種），而直接接種（傳統方法）從采樣到接種耗時(shí)較長(cháng)，尤其不能及時(shí)接種時(shí)，易造成某些細菌死亡，影響培養結果。標本接種量大，約3 ml，而直接接種法標本量少，約10 μl。雙相液體培養基固相可以分離細菌，液相具有增菌作用，其營(yíng)養成分豐富，適宜大部分細菌快速生長(cháng)。每天8時(shí)、11時(shí)、15時(shí)、18時(shí)四次充分混勻，及時(shí)接種，有利于細菌快速生長(cháng)，提高檢出率。

    表1顯示：該培養基陽(yáng)性檢出時(shí)間，24 h內檢出陽(yáng)性數占95％，24 h～48 h內檢出陽(yáng)性數5％，于直接接種法陽(yáng)性檢出基本一致，與儀器血培養儀作體液標本培養相比檢出時(shí)間快一倍［3］。因為儀器陽(yáng)性報警后，需要轉種分離分純18 h～24 h后才長(cháng)出細菌。

    278份標本在雙相液體培養基內檢出40株21種細菌，尤其是檢出苛養菌，還培養出既往用直接接種法很少培養出的少見(jiàn)菌，說(shuō)明培養基適合多種細菌生長(cháng)。從表2檢出細菌構成比的情況看，前三位是腸桿菌科細菌（37.5％）、葡萄球菌屬（20.0％）、非發(fā)酵菌（15.0％），與文獻報道一致［4，5］。

    此法從采樣到培養操作簡(jiǎn)單，由醫生直接接種，標本送實(shí)驗室，不需轉種平板，直接放入孵育箱培養，固相長(cháng)出菌后可作鑒定藥敏，48 h未見(jiàn)細菌生長(cháng)可發(fā)陰性報告。

綜上所述，雙相液體培養基能做到體液標本及時(shí)接種，操作簡(jiǎn)單，節省時(shí)間，陽(yáng)性檢出率高，結果快速準確，雙相液體培養基檢測法是快速診斷患者細菌感染的一種較好的方法。

 

 作者：王升，張紅升 《實(shí)用醫技雜志》

【參考文獻】

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　�。�3］張智潔,孫繼梅,劉勇.應用VITAL-200全自動(dòng)血培養儀.進(jìn)行血液及無(wú)菌體液培養的臨床評價(jià)［J］.中華醫院感染學(xué)雜志,2002,12(1):77��78.

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［5］王湛.使用雙相血培養瓶進(jìn)行臨床血液及無(wú)菌體液培養結果分析［J］.河北醫藥,2001,23(1):51��52.