中華蘆薈活性物質(zhì)提取及其抑菌性能研究

【摘要】  目的研究中華蘆薈葉皮提取物的抑菌性能。方法用含蘆薈提取物的平板培養供試菌株，確定最小抑菌濃度；采用濾紙片法研究了蘆會(huì )提取物與蔗糖、食鹽的協(xié)同抑菌性能。結果供試菌株在含蘆薈提取物的平板上生長(cháng)受到抑制；蘆薈提取物與蔗糖（或食鹽）的共同抑菌效果比它們單獨作用強。結論蘆薈的提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)朊假絲酵母、釀酒酵母米曲霉和木霉有抑制作用；蘆薈提取物與蔗糖、食鹽存在協(xié)同抑菌作用。

【關(guān)鍵詞】  中華蘆薈；提取物； 抑菌性能； 蒽醌化合物

　　　Abstract:ObjectiveTo study on the antimicrobial effect of the extracts from the leaf skin of China aloe.Methods The minimal inhibitory concentration was determined by cultivating them in culture medium containing extracts, and the synergistic effect was studied by paper filtering method.Results The strains were restrained in culture medium containing extracts, and the combined antibacterial action of the extracts with saccharose (or salt) was stronger than those alone. Conclusion The extracts had antimicrobial effect to Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus otyzae and Trichoderma sp. The extracts, saccharose and salt have synergistic antimicrobial effect.

　　Key wordsChina Aloe;   Extracts;   Antimicrobial effect;   Synergistic

   

　　蘆薈（Aloe）屬百合科多年生綠肉質(zhì)植物，是大自然賜予人類(lèi)的仙丹草［1］；中華蘆薈Aloe vera L. var China，原產(chǎn)于中國，于1817年由W.Anderson傳至庫拉索(Cura-cao)［2］。蘆薈所具有的醫療、美容、保健、食用等多種功能早被世人所公認［3］；蘆薈作為藥用，最早載于《開(kāi)寶本草》［4］，素有“萬(wàn)應良藥”“家庭醫生”等美稱(chēng)［5］。蘆薈含160多種化學(xué)成分［6］，其中活性成分主要有兩大類(lèi)：一類(lèi)是蒽醌類(lèi)化合物，另一類(lèi)是多糖類(lèi)物質(zhì)［5］。蘆薈具有抗菌殺菌作用［7］，蒽醌類(lèi)化合物是蘆薈中主要的抗菌物質(zhì)［8］；蘆薈的殺菌作用與抗生素的功能相同，但比抗生素更勝一籌的是不產(chǎn)生細菌的耐藥性，并能清除細菌感染時(shí)釋放的有害代謝物以及細菌被殺死后菌體留下的內毒素［9］。蘆薈至少有360多種，而真正具有藥用價(jià)值的只有屈指可數的4種，中華蘆薈便在其中［10］。國際上有關(guān)蘆薈藥用價(jià)值的研究已較為深入，而我國的蘆薈產(chǎn)品大多屬于初級產(chǎn)品，科技含量不高，特殊療效的蘆薈藥品還很少見(jiàn)，深度開(kāi)發(fā)蘆薈的藥用價(jià)值，以便廣泛運用于醫療、食品及美容等領(lǐng)域，具有重要的社會(huì )意義和經(jīng)濟價(jià)值。本實(shí)驗從中華蘆薈中提取了抑菌活性物質(zhì)，并對其抑菌性能進(jìn)行了研究，旨在為中華蘆薈藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)利用提供借鑒。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  蘆薈中華蘆薈（Aloe vera L. var. China），購于撫州市花卉市場(chǎng)。

　　1.1.2  供試菌種大腸桿菌（Escherichia coli）；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；產(chǎn)朊假絲酵母（Candida utilis）；釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）；米曲霉(Aspergillus otyzae)；木霉(Trichoderma sp.)：由東華理工學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗室提供。

　　1.1.3  培養基細菌，牛肉膏蛋白胨培養基；酵母菌、霉菌，豆芽汁培養基。

　　1.2   方法

　　1.2.1  蘆薈活性成分的提取取蘆薈葉200 g，清洗干凈，將葉表皮與葉肉凝膠分開(kāi)，并將葉皮剪碎，用2倍量的甲醇在室溫下浸提24 h , 過(guò)濾離心后，減壓濃縮上清液，真空干燥，保存備用。

　　1.2.2  蘆薈提取物溶液的配制采用醋酸鎂-甲醇比色法［11］測定提取物中蒽醌化合物的濃度，并用無(wú)菌水配制成一系列濃度的抗菌液備用。

　　1.2.3  供試菌懸液的制備將供試菌種進(jìn)行斜面活化后，分別用接種環(huán)挑取少量菌體，用無(wú)菌生理鹽水稀釋?zhuān)�振蕩幾分種，調整菌濃度約為106 cfu/mt。

　　1.2.4  抑菌實(shí)驗最小抑菌濃度（MIC）的確定：將2 ml含不同濃度蒽醌化合物的抗菌液和20 ml培養基混合均勻后倒平皿；每平皿涂0.2 ml供試菌懸液后，在適宜溫度下培養（細菌37℃培養24 h，霉菌28℃培養48 h，酵母菌30℃培養24  h），以不長(cháng)菌的最低濃度為最小抑菌濃度。

   

　　協(xié)同抑菌作用：采用濾紙片法對蘆薈提取物與蔗糖、食鹽的協(xié)同抑菌性能進(jìn)行研究，即①選用吸水性強的濾紙，用打孔器制成直徑為7.5 mm的圓形濾紙片，滅菌后烘干備用；②吸取供試菌懸液各0.2 ml，分別涂平板；③將濾紙片浸泡在含蒽醌化合物0.05   mg/ml的25%蔗糖溶液中20 min后，放在各種含菌平皿上；以含蒽醌化合物0.05 mg/ml抗菌液和25%蔗糖溶液分別做對照。然后將平皿在適宜溫度下培養（細菌37℃培養24 h，霉菌28℃培養48 h，酵母菌30℃培養24 h），用千分尺測抑菌圈直徑（每個(gè)濾紙片測3次取平均值）。

   

　　同樣的方法用于蘆薈提取物與10%的食鹽溶液的協(xié)同抑菌實(shí)驗。

　　2  結果

　　2.1  蒽醌化合物最小抑菌濃度（MIC）的確定含不同濃度蒽醌化合物的抗菌液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)朊假絲酵母、釀酒酵母、米曲霉和木霉的抑菌效果見(jiàn)表1。

   

　　由表1可以看出蒽醌化合物對木霉的MIC為0.05 mg/ml，對大腸桿菌、米曲霉的MIC為0.06 mg/ml，對金色葡萄球菌、產(chǎn)朊假絲酵母的MIC為0.07 mg/ml，而對釀酒酵母的MIC為0.08 mg/ml。由差異可以得知，蒽醌化合物的抑菌能力由強到弱依次為：木霉－大腸桿菌和米曲霉-金色葡萄球菌和產(chǎn)朊假絲酵母－釀酒酵母。

表1  不同濃度蒽醌化合物的抑菌效果（略）

　　“+”表示有菌落生長(cháng)，“-”表示無(wú)菌落生長(cháng)

　　2.2  協(xié)同抑菌作用

　　2.2.1   蘆薈提取物與25%蔗糖溶液的協(xié)同抑菌作用采用濾紙片法研究了蘆薈提取物（含0.05 mg/ml蒽醌化合物）與25%蔗糖溶液對大腸桿菌、釀酒酵母和米曲霉的協(xié)同抑菌效果。結果見(jiàn)表2。

 

　　表2  蘆薈提取物與蔗糖的協(xié)同抗菌作用（略）

　　由表2數據可以看出，蘆薈提取物和25%蔗糖溶液對大腸桿菌、米曲霉存在協(xié)同抑菌效果；而對釀酒酵母基本無(wú)協(xié)同抑菌作用，可能是因為其嗜糖。

　　2.2.2   蘆薈提取物與10%食鹽溶液的協(xié)同抑菌作用采用濾紙片法研究了蘆薈提取物（含0.05 mg/ml蒽醌化合物）與10%食鹽溶液對大腸桿菌、釀酒酵母和米曲霉的協(xié)同抑菌效果，所得結果見(jiàn)表3。

　　表3   蘆薈提取物與食鹽的協(xié)同抗菌作用（略）

　　由表3可知，蘆薈提取物與10%食鹽溶液對大腸桿菌、釀酒酵母和米曲霉都有協(xié)同抗菌作用，但對釀酒酵母的協(xié)同抑菌效果較弱。

　　3  討論

   

　　從中華蘆薈葉皮中提取得到了活性物質(zhì)粉末，同時(shí)采用醋酸鎂-甲醇比色法測定了提取物中蒽醌化合物的含量。

   

　　抑菌實(shí)驗確定了蒽醌化合物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)朊假絲酵母、釀酒酵母、米曲霉和木霉的最小抑菌濃度；實(shí)驗結果表明，蒽醌化合物對供試菌株抑菌能力由強到弱依次為：木霉－大腸桿菌和米曲霉-金色葡萄球菌和產(chǎn)朊假絲酵母－釀酒酵母。

   

近年來(lái)，在全球興起了對蘆薈研究和應用的熱潮。美國、日本、韓國等國家的蘆薈研究處于世界領(lǐng)先地位；相對而言，我國對蘆薈的研究還處于初始階段，特殊療效的蘆薈藥品還很少見(jiàn)。我國中藥歷史悠久，內容博大精深，也引進(jìn)了許多方便型西藥，蘆薈均可應用于其中。深度開(kāi)發(fā)蘆薈的藥用價(jià)值，以便廣泛運用于醫療、食品等領(lǐng)域，具有重要的社會(huì )意義和經(jīng)濟價(jià)值。本文對中華蘆薈提取物的抑菌性能進(jìn)行了研究，希望能為蘆薈藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)利用提供借鑒。

 

 作者：謝宗波， 姜國芳《時(shí)珍國醫國藥》

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