大腸埃希菌超廣譜β-內酰胺酶的檢測和耐藥分析

超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）是指由質(zhì)粒介導的能水解所有青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)和單酰胺類(lèi)氨曲南的一類(lèi)酶，它由質(zhì)粒介導可在菌株間轉移和傳播，部分產(chǎn)ESBLs菌株不但對β-內酰胺類(lèi)抗菌藥物耐藥，而且同時(shí)對氨基糖苷類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)耐藥，因此給臨床抗感染治療帶來(lái)很大的困難。大腸埃希菌是引起院內感染的常見(jiàn)病原菌同時(shí)又是產(chǎn)ESBLs的代表菌種，為了解其在本院的發(fā)生率及耐藥情況，作者對分離的393株大腸埃希菌進(jìn)行產(chǎn)ESBLs的檢測，同時(shí)做了抗生素的耐藥分析，結果報告如下。

　　1  資料與方法

　　1.1  菌株來(lái)源 

　　從2005年1月至2006年12月住院患者的痰、尿、分泌物等標本分離的大腸埃希菌393株，其中103株為ATB儀器專(zhuān)家系統確定的ESBLs耐藥表型和可疑表型, 從-20℃冰庫中取出用40%甘油肉湯保存的菌株復溶。標準菌株為大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603（產(chǎn)ESBLs菌株），均購自衛生部臨床檢驗中心。

　　1.2  儀器與試劑 

　　ATB express 自動(dòng)細菌鑒定儀和藥敏系統、ATB Plus EXPERT、MH藥敏培養基均購自法國生物梅里埃公司，ESBLs檢測紙片為杭州天和微生物試劑公司產(chǎn)。

　　1.3  細菌鑒定和藥敏試驗 

　　按照《全國臨床檢驗操作規程》(第二版)分離培養臨床標本，使用ATB儀器進(jìn)行菌種鑒定；藥敏試驗采用配套的（ATB G-5 2000版）藥敏卡。

　　1.4  產(chǎn)ESBLs的檢測 

　　儀器法檢測和K-B法檢測。產(chǎn)ESBLs確證試驗 采用NCCLS推薦的紙片確證法（頭孢噻肟，頭孢噻肟/克拉維酸；頭孢他啶，頭孢他啶/克拉維酸）。

　　2  結果

　　2.1  產(chǎn)ESBLs菌標本來(lái)源科室分布 

　　見(jiàn)表１。表１  產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的標本來(lái)源科室分布(略)

　　2.2  檢測產(chǎn)ESBLs菌結果

　　ATB儀器法監測產(chǎn)ESBLs菌，陽(yáng)性90株；可疑3株，K-B法確證試驗結果：?jiǎn)我訡TX為底物組檢出產(chǎn)ESBLs陽(yáng)性菌58株，單以CAZ為底物組檢出產(chǎn)ESBLs陽(yáng)性菌5株，兩種底物同時(shí)檢出產(chǎn)ESBLs陽(yáng)性菌20株，共83株(ATB法陽(yáng)性90株中確證80株，可疑13株中確證3株)。

2.3  藥敏試驗 

　　83株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對常見(jiàn)抗生素的耐藥狀況，青霉素類(lèi)和頭孢類(lèi)（Ⅰ～Ⅳ代）100%、奈替米星63.86%，環(huán)丙沙星87.95%，慶大霉素74.70%，妥布霉素80.72%，阿米卡星26.51%，復方SMZ 75.90%，亞胺培南、美羅培南0，阿莫西林/克拉維酸68.67%，替卡西林/克拉維酸61.45%，哌拉西林/他唑巴坦10.84%，頭孢西丁55.42%。

　　3  討論

    本檢測結果顯示，本院近兩年產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的檢出率為21.1%(83／393)，明顯低于先前報道的31.40%(65／207)的檢出率［１］，這可能與作者把產(chǎn)ESBLs列為常規檢測項目，有助于控制其在本院的進(jìn)一步傳播和流行有關(guān)，尚待于今后積累更多的數據來(lái)證實(shí)。從表1結果來(lái)看，產(chǎn)ESBLs菌主要分離自痰標本（50.60%）和尿標本(31.33%)，送檢科室以呼吸科、普通內科為主，表明醫院感染管理部門(mén)應加強對這兩個(gè)重點(diǎn)科室的管理，同時(shí)密切關(guān)注下呼吸道和泌尿道易感部位的監測和預防。

    ATB儀器專(zhuān)家系統根據細菌對頭孢菌素類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)等抗生素的耐藥情況提示該菌為產(chǎn)ESBLs耐藥表型或可疑表型，在本次實(shí)驗中，專(zhuān)家系統檢出耐藥表型90株，用NCCLS推薦的確證試驗最后確定為80株，兩種方法的陽(yáng)性檢出率差異無(wú)顯著(zhù)性（P>0.05），但是從13株可疑表型菌株中證實(shí)漏檢了3株，這說(shuō)明ATB專(zhuān)家系統可初篩產(chǎn)ESBLs菌，而不能作為最終的確證試驗。

根據2001年NCCLS的提示，產(chǎn)ESBLs菌株的藥敏結果均應報告所有的青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)及氨曲南耐藥，ATB儀器專(zhuān)家系統能夠根據儀器提示自動(dòng)修正產(chǎn)ESBLs菌株的藥敏結果，補充手工藥敏的不足。本次ATB儀器統計分析耐藥情況，83株產(chǎn)ESBLs菌呈現多重耐藥現象，氟喹諾酮類(lèi)藥的環(huán)丙沙星、奈替米星，氨基糖苷類(lèi)藥的慶大霉素、妥布霉素，磺胺類(lèi)藥中的復方SMZ耐藥率高達63.86%～87.95%,這可能是產(chǎn)ESBLs耐藥基因編碼與其他的耐藥基因聯(lián)結致使交叉耐藥有關(guān)［２］。酶抑制劑復合抗菌藥物阿莫西林/克拉維酸、替卡西林/克拉維酸和頭霉素類(lèi)的頭孢西丁耐藥率也高達55.42%～68.67%，分析其產(chǎn)生的原因可能是該菌株同時(shí)產(chǎn)生了過(guò)量的產(chǎn)ESBLs和(或)AmpC酶，或是產(chǎn)生了對酶抑制劑耐藥的新型酶，具體原因還有待于進(jìn)一步研究。本資料未發(fā)現亞胺培南、美羅培南的耐藥株，哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星的耐藥率為10.84%、26.51%，可同時(shí)作為治療產(chǎn)ESBLs菌感染的首選藥物，與有關(guān)文獻報道相符［３］。通過(guò)此次實(shí)驗，提醒應結合實(shí)際情況采用正確的方法檢測產(chǎn)ESBLs菌，以便掌握其耐藥特點(diǎn)，及時(shí)地指導臨床合理選用抗生素。

 

作者：鄭小銀 徐立群《浙江臨床醫學(xué)》

【參考文獻】

  　　1 徐立群，鄭小銀．ATB細菌鑒定儀對超廣譜β-內酰胺酶的檢測．中華醫院感染學(xué)雜志，2005，15（12）：1432～1434．

　　2 周惠平．臨床細菌學(xué)檢驗面臨的挑戰．中華檢驗醫學(xué)雜志，1999，22（1）：12～14．

3 邱文影，鐘國權．產(chǎn)超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性分析．中華醫院感染學(xué)雜志，2005,15（12）：1415～1416．