ICU分離銅綠假單胞菌耐藥性分析

 銅綠假單胞菌是臨床最常見(jiàn)的條件致病菌之一,已對臨床感染的控制構成嚴重威脅［１～３］�，F就本院ICU近三年來(lái)分離的銅綠假單胞菌耐藥性進(jìn)行研究分析。

　　1 資料與方法

　　1.1  菌株   

　　收集2002年6月至2005年6月ICU住院患者分離的銅綠假單胞菌67株，細菌來(lái)源包括痰液58株，咽拭子7株，留置導尿2株。

　　1.2 主要試劑   

　　2-巰基丙酸（2-MPA）購自Sigma公司�？咕�藥紙片：氨芐西林/舒巴坦，替卡西林，替卡西林/克拉維酸，哌拉西林，哌拉西林/他唑巴坦，頭孢哌酮，頭孢哌酮/舒巴坦，頭孢吡肟，頭孢他啶，阿米卡星，環(huán)丙沙星和復方新諾明，均為英國 Oxoid公司產(chǎn)品。

　　1.3  方法   

　　采用Kirby-Bauer瓊脂擴散法，結果按NCCL 2005年版判斷［４］。質(zhì)控菌株為銅綠假單細胞ATCC 27853。

　　1.4  金屬β內酰胺酶（金屬酶）測定   

　　采用2-巰基丙酸（2-MPA）協(xié)同試驗方法［５］，在預告已涂布待檢菌MH平板上分別貼上2-MPA紙片和頭孢他啶紙片，兩紙片中心間距30mm，過(guò)夜培養后觀(guān)察結果，凡頭孢他啶片抑菌環(huán)擴大者即判為產(chǎn)金屬酶陽(yáng)性。

　　1.5  金屬酶和外膜蛋白分析   

　　用PCR方法分別檢測金屬酶IMP型和VIM型和外膜蛋白D2（oprD2）。靶基因引物序列（5'→3'）IMP型為CTACCGCAGCAGAGTCTTTC和AACCGTTTTGCCTTACCAT；VIM型為ATTCCGGTCGG（A/G）GAGGTCCG和GAGCAAGTCTAGACCGCCCG；oprD2為GCGCATCTCCAAGACCATG和GCCACGCCATTTGACGGAG。堿裂解法提取DNA模析，按說(shuō)明書(shū)設置各PCR反應體系和熱循環(huán)參數，PCR擴增儀為PE 9600型。擴增產(chǎn)物作2%瓊脂糖凝膠電泳，PCR檢測陽(yáng)性對照DNA(以上試劑盒及對照物均由無(wú)錫克隆遺傳所提供)。

　　2  結果

　　2.1  金屬酶檢出結果   

　　檢出產(chǎn)金屬酶菌28株（41.8%），分別為痰液25株，咽拭子3株�；�因檢測23例陽(yáng)性，其中IMP型17株，VIM型6株，型別不明5株。  檢測有32株缺失。

　　2.2 藥敏試驗結果   

　　見(jiàn)表1。表1  67株銅綠假單胞菌對13種抗生素耐藥率（略）

　　3 討論

    銅綠假單胞菌的耐藥機制主要有外膜蛋白D2丟失和產(chǎn)生β�矁弱０访�，其中產(chǎn)生金屬酶可導致幾乎對所有的β�矁弱０奉�(lèi)抗生素耐藥，且酶抑制劑的抑制作用很弱［６］。本研究結果，在67株細胞中用2-MPA協(xié)同試驗有28株為產(chǎn)金屬酶株；基因檢測有23株陽(yáng)性，目前已知的金屬酶基因型有IMP、VIM、L1、OXA、GES、2TFFU等［７］，是否還有其它基因型別尚有待研究。值得關(guān)注的是2003年和2004年的菌株基因型以IMP為主，隨后演變?yōu)橐訴IM為主，總共有32株細菌證明蛋白D2   缺失，其中產(chǎn)金屬酶的菌株均為缺失，表明外膜通道不暢也是導致細菌耐藥的主要原因之一。

近年來(lái)，銅綠假單胞菌對β�矁弱０奉�(lèi)抗菌藥物的耐藥率已有上升趨勢，尤其是產(chǎn)金屬酶的菌株。對13種常用藥物的檢測結果表明，產(chǎn)金屬酶菌株除對替卡西林、亞胺培南全部耐藥外，對氨芐西林/舒巴坦、復方新諾明、哌拉西林、頭孢他啶、頭孢哌酮、替卡西林/克拉維酸、哌拉西林/他唑巴坦和環(huán)丙沙星的耐藥率也在50%～93%之間。耐藥率＜50%的僅有阿米卡星、頭孢哌酮/舒巴坦和頭孢吡肟，與文獻相近［１，２，８］。按照對亞胺培南、頭孢他啶、哌拉西林、環(huán)丙沙星等均耐藥的銅綠假單胞菌定義為多藥耐藥銅綠假單胞菌（MDRP）［９］，28株產(chǎn)金屬酶菌株大多還對復方新諾明和環(huán)丙沙星耐藥，屬于MDRP。對于產(chǎn)金屬酶細菌的治療，目前尚無(wú)應用于臨床的金屬酶抑制劑，氨曲南不被金屬酶所水解，但臨床應用的效果并不理想，頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦顯示有較好的敏感性，必要時(shí)，可與氨基糖苷類(lèi)或氟諾酮類(lèi)聯(lián)合使用。

 

作者：陳燕青 趙仲農 錢(qián)小毛《浙江臨床醫學(xué)》　

【參考文獻】

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　　2 王輝,陳民鈞. 1994～2001年中國重癥監護病房非發(fā)酵糖細菌的耐藥變遷. 中華醫學(xué)雜志,2003,83(5):385～390.

　　3 蔣曉飛,洪秀華,孫景勇,等. 多重耐藥銅綠假單胞菌超廣譜β�矁弱０访阜治�. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2002,22(6):443～446.

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　　5 錢(qián)小毛，毛中萍，趙仲農，等. 2-巰基丙酸協(xié)同試驗檢測細菌金屬β�矁弱０�. 中華檢驗醫學(xué)雜志,2004,27(2):126.

　　6 趙青,魏澤慶,俞云松,等. 重癥監護病房產(chǎn)VIM-2型金屬酶銅綠膿假單胞菌的研究. 中華檢驗醫學(xué)雜志,2004,27(10):678～682.

　　7 糜祖煌. 金屬β�矁弱０匪峄�因及其檢測方法. 現代實(shí)用醫學(xué),2004,16(1):15～16.

　　8 辜依海,羅燕萍,張文莉,等. 耐亞胺培南銅綠假單胞菌的耐藥性分析及金屬內酰胺酶檢測. 中華醫學(xué)感染學(xué)雜志,2005,15(3):339～341.

　　9 王輝;陳民鈞. 非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的耐藥發(fā)展研究進(jìn)展. 中國抗生素雜志,2004,29(3):193～195.