五味子提取物體外抑菌作用研究

【摘要】  　�。勰康模菅芯课逦蹲犹崛∥矬w外抑菌作用。［方法］用75％乙醇從五味子中提取其活性成分進(jìn)行抑菌試驗。［結果］在PH=6的情況下，抑菌效果最強。濾紙片瓊脂擴散法表明MIC值金黃色葡萄球菌為62.5mg／ml，大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌為31.3mg／ml；與二倍稀釋法測得的結果基本一致，除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg／ml外，其余3種菌的MIC均為25mg／ml。另外，瞬時(shí)高溫處理后，仍具有較強的抑菌作用。［結論］五味子提取物在體外對微生物有明顯的抑制作用，并且其抑菌成分具有一定熱穩定性。

【關(guān)鍵詞】  五味子；提取物；抑菌作用；實(shí)驗

　　Abstract：Effective components of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill were extracted by using ethanol，the antibacterial action of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill extracts was studied.It is shown that extracts of Schisandra chinensis （Turcz.）Baill had a notable inhibiting microorganism activity.In the additiion of pH=6.0，the bacteriostasis potency is strongest.By disc diffusion method，The results showed that the MIC for every kind of microorganism is respectively as follows：Staphylococcus aureus，62.5mg／ml，Echerichia coli，Pseudomonas aeruginosa，Klebsiella peneumoniae，31.3mg／ml.By tube double dilution method，the result was in substantial agreement.The MIC of Staphylococcus aureus is 50mg／ml，and the others are 25mg/ml.In addition,Schisandra chinensis（Turcz）Baill extracts were excellent in heat stability，it still showed a strong antiseptic power after a treatment of heated because the antibacterial action of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill has good stability against heating.

　　Key words：Schisandra chinensis（Turcz.）Baill；extracts；the antimicrobial activity

    五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill）別名北五味子、遼五味子、山花椒、烏梅子、軟棗子等，為木蘭科五味子屬植物。多年生落葉木質(zhì)藤本，以野生為主，為常用中藥材。主要以果實(shí)入藥，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有斂肺、滋腎、止汗、生津、止瀉、澀精等功能�？梢灾委熆人�、哮喘、口渴自汗、盜汗、遺精、久瀉、神經(jīng)衰弱等癥，也是很好的果酒和飲料的原料［1］，具有極高的藥用價(jià)值和營(yíng)養價(jià)值，是一種新型的“藥食同源”功能性保健食品，其果實(shí)在國際上已成為一種新興食品工業(yè)的重要原料［2��3］。本實(shí)驗采用濾紙片瓊脂擴散法，研究五味子提取物對常見(jiàn)的幾個(gè)污染菌的抑制作用，為五味子的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據。

　　1.1  菌種與培養基 

　　試驗選用金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella peneumoniae）。以上菌種由浙江省臺州醫院微生物實(shí)驗室友情贈送。采用牛肉膏蛋白胨培養基，按文獻［4］自制，pH為6.0（用磷酸緩沖液配制［5］），其中固體培養基加瓊脂20‰。

　　1.2  五味子提取物的制備 

　　實(shí)驗用五味子飲片購自臨海市醫藥有限公司，經(jīng)70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超聲波清洗器中提取，反復多次，直至浸出液色淡。將浸出液濃縮，并定容至10ml，即1ml提取液為1g五味子粉末的提取物［6］。提取液過(guò)0.22μm濾膜除菌，貯存于4℃冰箱中備用。

　　1.3  抑菌試驗

　　1.3.1  抑菌效力的測定 

　　分別將菌種從斜面上轉接到5ml的液體牛肉膏蛋白胨培養基中，30℃培養24h，再從中吸取50μl到5ml液體培養基中，30℃培養6h后吸取100μl菌液均勻涂抹到滅菌平板上。將浸漬過(guò)提取液的濾紙圓片（��6mm）稍風(fēng)干，貼到每個(gè)涂有菌液的平板上（每皿4片），每個(gè)濃度重復3次。37℃倒置培養24h后測定抑菌圈大小，并用無(wú)菌水作空白對照（以CK表示），確定抑菌效果。

　　1.3.2  最低抑菌濃度（MIC）的測定

　　采用二倍稀釋法［7］測定五味子提取物對4種供試菌的MIC。取7支試管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml無(wú)菌水，從第1支吸取5ml提取液移至第2支，混勻后，再吸取5ml至第3支，以此類(lèi)推，最后1支試管取出5ml棄去，每一試管的濃度分別為1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.3mg/ml和15.6mg/ml。分別將5ml上述各濃度的提取物與20ml牛肉膏固體培養基混勻，制成提取物的濃度分別為200mg/ml，100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5mg/ml，6.3mg/ml，3.2mg/ml（五味子粉末重量/培養基體積）的平板，隨后涂布接種菌液，倒置培養24h后觀(guān)察，以完全沒(méi)有供試菌生長(cháng)的最低濃度為提取物的MIC。

　　1.3.3  抑菌活性的pH范圍 

　　用磷酸緩沖液配制4種pH（分別為5、6、7和8）的牛肉膏蛋白胨培養基，制成平板并分別涂布各種供試菌；再將濾紙片置于濃度為500mg/ml的提取液中浸泡24h，稍風(fēng)干后貼在涂有供試菌的平板中，測定其抑菌效果。

1.3.4  熱穩定性試驗 

　　將五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃濕熱條件下［8］，熱處理20min，并制成濃度為500mg/ml的提取液，將濾紙片置于其中浸泡24h，稍風(fēng)干后貼在涂有各種菌液的乎板中，測定其抑菌效果。

　　2.1  pH對提取物的抑菌活性影響 

　　在pH為5時(shí)，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌均不能生長(cháng)，在pH為6～8范圍內，五味子提取物對4種供試菌的生長(cháng)均有一定的抑制作用，其中pH為6時(shí)的抑制作用最強（見(jiàn)表1）。表1  pH對五味子提取物抑菌效力的影響（略）

　　2.2  提取物濃度對抑菌效力的影響 

　　濾紙片法測定結果（見(jiàn)表2）顯示，五味子提取物對4種供試菌的生長(cháng)均有很強的抑制作用，其中對綠膿桿菌的抑制作用最強，肺炎克雷伯氏菌其次，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最弱。表2  五味子提取物的濃度對抑菌效率的影響（略）

　　2.3  不同菌的MIC 

　　五味子提取物（二倍稀釋法）對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表3所示。除了對金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，對其余三種菌的MIC為25mg/ml（與濾紙片法的結果基本一致）。表3  五味子提取物的MIC（略）

　　2.4  提取物的熱穩定性試驗 

　　五味子提取物經(jīng)3種溫度的熱處理20min后，仍具有較強的抑菌效力，其抑菌圈直徑與未經(jīng)高溫處理的樣品（對照）接近，其中只有對綠膿桿菌抑制作用，經(jīng)100℃處理和濕熱滅菌后有顯著(zhù)下降，對金黃色葡萄球菌的抑制作用，經(jīng)濕熱滅菌后有顯著(zhù)降低；而對大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3種處理與對照均無(wú)顯著(zhù)差異（見(jiàn)表4）。說(shuō)明五味子提取物中的抑菌成分具有一定的熱穩定性。表4  熱處理對五味子提取物抑菌效力的影響（略）

經(jīng)反復實(shí)驗，結果表明五味子提取物的濃度在31.3～1000mg/ml范圍內，pH為6～8時(shí)，對常見(jiàn)的4種致病菌有廣譜的抑菌作用，其中在pH=6時(shí)具有最佳的抑菌效果，抑制效應依次為：綠膿桿菌＞肺炎克雷伯氏菌＞大腸桿菌＞金黃色葡萄球菌。濾紙片瓊脂擴散法結果顯示，除金黃色葡萄球菌MIC為62.5mg/ml外，其余3種供試菌MIC均為31.3mg/ml；采用二倍稀釋法測得的MIC也顯示基本一致的結果，金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其余3種供試菌的MIC均為25mg/ml。另外，五味子提取物經(jīng)短時(shí)高溫處理后，仍保持較強的抑菌效果，且多數與對照無(wú)顯著(zhù)差別。

 

作者：邊才苗 楊云斌 費杰 何偉平 鐘浩  《浙江中醫藥大學(xué)學(xué)報》

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