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【摘要】 目的 檢測生活污水中大腸菌群對當前常用抗生素是否有耐藥性。方法 采集南寧市瑯東污水處理廠(chǎng)初沉池中的水樣，用多管發(fā)酵法分離其中大腸菌群，采用藥敏試紙擴散法，檢測了分離出來(lái)的大腸菌群對七種常用的抗生素包括青霉素、紅霉素、慶大霉素、阿米卡星、先鋒霉素Ⅴ、先鋒噻肟和氨芐西林的耐藥性。結果大腸菌群對青霉素和紅霉素表現出耐藥性（S），對氨芐西林的耐藥性處于中介（I），而對阿米卡星、慶大霉素、先鋒霉素Ⅴ、先鋒噻肟四種抗生素的耐藥性為敏感（R）。耐藥性大小順序依次為：青霉素>紅霉素>氨芐西林>阿米卡星>慶大霉素>先鋒霉素Ⅴ>先鋒噻肟。結論 在現有的停留時(shí)間內，生活污水中大腸菌群對革蘭陰性菌的抗生素都沒(méi)有產(chǎn)生耐藥性。
【關(guān)鍵詞】 抗生素；大腸群菌；耐藥性
【Abstract】 Objective To determine whether antibiotic resistance probability of Coliform bacteria in sanitary sewage is in existence. Methods Coliform bacteria has been separated from Sanitary sewage samples of Nanning Langdong sanitary sewage plant,and its antibiotic resistance has been detected to seven kinds of antibiotics,including Benzylpenicillin, rythromycin, Ampicillin, Gentamicin, Cefazolin, Amikacin, Cefotaxime. Results Coliform bacteria shows antibiotic resistance(R) to Benzylpenicillin and Rythromycin,shows intermediary(I) to Ampicillin,and shows sensitivity(S) to Amikacin, Gentamicin, Cefazolin Sodium, Cefotaxime.The antibiotic resistance rank is: Benzylpenicillin >Rythromycin>Ampicillin>Amikacin>Gentamicin>Cefazolin Sodium>Cefotaxime. Conclusion There is no prominent resistence of the Coliform bacteria from
【Key words】 antibiotic;coliform bacteria;antibiotic resistance
國內外醫學(xué)界早就開(kāi)始關(guān)注病原菌的抗藥性問(wèn)題，并且在微生物抗藥性的機理方面作了廣泛的研究。但長(cháng)久以來(lái)，人們關(guān)注的主要是病原菌的抗藥性。然而隨著(zhù)抗生素的大量使用，同時(shí)也會(huì )有一部分沒(méi)有被代謝掉的抗生素會(huì )隨排泄作用而不斷進(jìn)入環(huán)境，從而使得環(huán)境中的微生物長(cháng)期處于低濃度抗生素的訓化狀態(tài)中，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后也有可能逐漸產(chǎn)生耐藥性。微生物耐藥性產(chǎn)生的機理之一就是耐藥基因的形成，比如抗性基粒。一旦產(chǎn)生這種基因，就有可能會(huì )引起更廣泛的傳播。因此我們應該重視現代社會(huì )抗生素的大量應用所帶來(lái)的深遠的環(huán)境效應、生態(tài)效應及健康效應。
水環(huán)境中的藥物殘留因為濃度很低，檢測的難度很大，因而對檢測技術(shù)要求較高，長(cháng)久以來(lái)未受到足夠的重視。然而近年來(lái)隨著(zhù)檢測技術(shù)的發(fā)展，國內外已有人對各種水體，如河流、湖泊、地下水、受污染的海水等做了研究，均發(fā)現了藥物殘留問(wèn)題［1~4］。
污水處理廠(chǎng)接納的污水通常包括了人們的生活污水，甚至有醫院污水、藥廠(chǎng)廢水等，抗生素殘留的可能性很大。污水處理廠(chǎng)通常只監測一些常規的指標，如懸浮固體、大腸菌群、生化需氧量、化學(xué)需氧量等，至今尚不可能關(guān)注到其中的抗生素含量和抗生素的耐藥性問(wèn)題。本研究就是從南寧市瑯東污水處理廠(chǎng)初沉池中采集水樣分離出大腸群菌，并采用藥敏試紙擴散法選用了七種人們常見(jiàn)也是經(jīng)常使用的抗生素，進(jìn)行了抗藥性的初步研究。
1 材料與方法
1.1 水樣 南寧市瑯東污水處理廠(chǎng)是南寧市第一座現代化城市污水集中處理廠(chǎng)，污水主要是來(lái)自南湖和竹排沖流域的南寧市東北部市區的城市污水管道及管渠收集的城市生活污水。平均日處理污水１０~１
1.2 大腸菌群的分離 大腸菌群并非細菌學(xué)分類(lèi)命名，而是衛生細菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，它不代表某一個(gè)或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌。大腸菌群是糞便污染的指標菌，可以以該菌群的檢出情況來(lái)表示環(huán)境中是否有糞便污染。該類(lèi)細菌最適宜生長(cháng)溫度為
本實(shí)驗采用多管發(fā)酵法［5］分離和鑒別水樣中的大腸菌群，培養溫度為
1.3 耐藥性測定（藥敏試紙擴散法） 采用藥敏試紙擴散法［6］，首先將乳糖蛋白胨培養基制成平皿，用滅菌棉簽蘸取少許上述備用菌液，涂布整個(gè)培養基表面，反復3次，每次旋轉60°，最后沿平皿內緣涂抹一周，保證涂布均勻，每樣10個(gè)平行；經(jīng)室溫干燥3～5min后，用無(wú)菌小鑷子分別夾取七種藥敏試紙貼于培養基表面，并輕壓使其緊貼培養基表面。翻轉置于
2 實(shí)驗結果
恒溫培養24h后，將培養皿取出，可觀(guān)察到七種藥敏試紙周?chē)霈F大小不同的抑菌圈。分別測量各抑菌圈直徑如表1（以mm表示）。
抑菌圈的大小可直接用來(lái)估計該微生物對研究抗生素的耐藥性，抑菌圈越大，表明該微生物對抗生素敏感，即抗藥性差，反過(guò)來(lái)則表明該微生物的抗藥性強。根據常用的判別標準，將微生物的耐藥性分為三層次：敏感（S），中介（I）、耐藥（R），每一種抗生素都有相應的判別標準，各測量數據和各標準值均列于表1。表1 大腸菌群的抑菌圈直徑及耐藥性評價(jià)從表1可以看出，該大腸菌群在青霉素和紅霉素藥敏試紙周?chē)囊志χ睆叫∮谀退幮詷藴手�，評定耐藥（R）；而在氨芐西林藥敏試紙周?chē)囊志χ睆浇橛谀退幒兔舾兄g，評定結果為中介（I），在其他抗生素阿米卡星、慶大霉素、先鋒噻肟、先鋒霉素Ⅴ等藥敏試紙周?chē)囊志χ睆骄幱诿舾袠藴手捣秶�，因而評定結果均為敏感（S）。
可以用抑菌圈直徑與耐藥標準值的最大值的比例大小來(lái)表示耐藥性的大小，比值越小，說(shuō)明耐藥性越大，反過(guò)來(lái)比值越大，耐藥性越小。由此，我們可以得出大腸菌群對各抗生素的耐藥性大小排序為：青霉素>紅霉素>氨芐西林>阿米卡星>慶大霉素>先鋒霉素Ⅴ>先鋒噻肟。
3 討論
大腸菌群屬于革蘭陰性菌。實(shí)驗選用的抗生素是當前醫院常用的抗生素。各抗生素所屬的種類(lèi)以及抗菌譜范圍歸納列于表2。表2 實(shí)驗用各抗生素抗菌范圍由此可以看出，青霉素和氨芐西林均屬于青霉素類(lèi)，紅霉素屬于大環(huán)內酯類(lèi)，慶大霉素和阿米卡星屬于氨基糖苷類(lèi)，先鋒霉素Ⅴ和先鋒噻肟屬于頭孢菌素類(lèi)，抗菌對象是革蘭陽(yáng)性菌的有青霉素和氨芐西林和紅霉素，抗菌對象是革蘭陰性菌的有阿米卡星、慶大霉素和先鋒噻肟，先鋒霉素Ⅴ主要抗革蘭陽(yáng)性菌，也抗部分革蘭陰性菌。
從大腸菌群的抗菌實(shí)驗結果來(lái)看，大腸菌群對青霉素和紅霉素有較強耐藥性，對氨芐西林的耐藥性處于中介，這三種抗生素的抗菌譜都是革蘭陽(yáng)性，大腸菌群之所以對這三種抗生素產(chǎn)生較強的耐藥性，主要是由這三種抗生素的抗菌譜范圍決定的。其他四種抗生素的抗菌譜均為革蘭陰性菌，污水中的大腸菌群對他們都表現出敏感性，說(shuō)明污水中的大腸菌群沒(méi)有對抗菌譜為革蘭陰性菌的抗生素產(chǎn)生耐藥性。
作者：張新英，胡波，莫莉萍，秦成琴，韋璐《中國醫學(xué)研究雜志》
【參考文獻】
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5 王家玲.環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗.北京：高等教育出版社，1988,81-85.
6 王傳恩.醫學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗指導.廣州：中山大學(xué)出版社，2002，146-156.
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