靈芝孢子粉和雙歧桿菌對小鼠菌群失調的治療作用

【摘要】  　　目的： 研究靈芝孢子粉（GSP）、雙歧桿菌（BB）對小白鼠腸道菌群失調的治療作用。方法： 用鹽酸林可霉素注射液給實(shí)驗小鼠灌胃0.36 g/kg連續6 d，建立小鼠菌群失調模型。將小鼠隨機分成11組，每組10只，包括一個(gè)正常對照組（CG），一個(gè)菌群失調模型組（MIG）和9個(gè)治療組（根據不同劑量和治療方法建立的3個(gè)GSP治療組，3個(gè)BB治療組以及3個(gè)共同治療組）。連續6 d后，處死小鼠，取直腸糞便并用生理鹽水稀釋成1×10-7、1×10-8、1×10-9三個(gè)稀釋度，行有氧及厭氧培養48 h后作菌落計數，數據進(jìn)行統計學(xué)處理。結果：成功建立了小鼠腸道菌群失調模型，MIG組的需氧菌和厭氧菌菌落計數均低于CG組，并且在經(jīng)過(guò)GSP和BB治療后小鼠腸道菌群數量明顯得到恢復，其中高劑量靈芝孢子粉和高劑量雙歧桿菌治療組的效果最好，與CG組及相應中、低劑量組比較有統計學(xué)意義（P＜0.05）。結論： GSP和BB對治療因抗生素引起的腸道菌群失調有顯著(zhù)的作用。

【關(guān)鍵詞】  靈芝 雙歧桿菌感染 細菌 需氧 細菌 厭氧 直腸 小鼠

　�。�Abstract］ Objective: To investigate the effect of Ganoderma spore powder (GSP) and bifidobacteria (BB) on the intestinal microflora imbalance of mice.Methods: The mouse model of intestinal microflora imbalance were established by intragastric administration of lincomycin hydrochloride injection at a dose of 0.36g/kg for 6 days. The mice were randomly divided into 11 groups (10 mice in each) including one normal control group (CG), one microflora imbalance model group (MIG) and 9 treatment groups (3 for GSP, 3 for BB, and 3 for their combination in terms of different dosages and treating programs). In 6 days of treatment, mice were killed and intestinal dejection was collected and diluted with asepsis NS into three different concentrations: 1×10-7, 1×10-8, and 1×10-9. The dejection dilutions were cultivated for 48 hours under oxygen or anoxic conditions and the obtained bacterial colonies were counted. Data were statistically analyzed with variance analysis method. Results: The model of mice with intestinal microflora imbalance was successfully established. The colony numbers of both aerobic bacteria and anaerobic bacteria in MIG were less than those of CG, and the colony numbers in microflora imbalanced mice increased after the treatment of GSP or BB. In groups treated with high dosages of GSP or BB, the best curative results were obtained and significantly different from those of CG and groups received low dosages (P<0.05). Conclusions: GSP and BB have obvious therapeutic effect on intestinal microflora imbalance of mice .

　�。�Key words］ Gardenia；bifidobacteriales infections；bacteria, aerobic；bacteria, anaerobic; rectum; mice

　　由于廣譜抗生素種類(lèi)的不斷增多以及在臨床上的不合理使用，抗生素在殺滅細菌的同時(shí)也破壞了腸道內菌群之間的正常關(guān)系，使其失去平衡，引起腸道菌群失調[1]。菌群失調會(huì )導致腸道正常菌無(wú)法合成維生素，影響蛋白質(zhì)、糖、脂肪的消化吸收，同時(shí)可直接刺激腸道蠕動(dòng)加快，使正常小腸細菌菌種分布變窄及數量減少而誘發(fā)抗生素相關(guān)性腹瀉。菌群失調常規治療除采取支持治療和停用誘發(fā)腹瀉的抗生素外，口服益生菌已成為防治的有效手段[2]。2006年4月～2007年9月給小鼠經(jīng)口灌胃靈芝孢子粉、雙歧桿菌及兩者的混合物，研究?jì)煞N藥物對小鼠腸道菌群失調的治療作用。

　　1  材料與方法

　　1.1材料 

　　盈康活膠囊制劑（含全破壁純赤靈芝孢子），由上海第二醫科大學(xué)及盈康科技控股國際有限公司聯(lián)合研究，香港天維健康產(chǎn)品國際有限公司生產(chǎn)。鹽酸林可霉素注射液（0.3 g/ml） 由福建省福清藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，MRS培養基、普通肉湯瓊脂培養基。

　　1.2  動(dòng)物

　　健康 6～8周齡昆明種小鼠 110只 ，體重（20±2） g ，雌雄隨機，由貴陽(yáng)醫學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗中心提供。

　　1.3  實(shí)驗方法 

　　110只小鼠隨機分成11組,每組10只。正常對照組：用無(wú)菌生理鹽水（NS）灌胃0.7 ml/d， 連續12 d；菌群失調模型組：用10 g/L抗生素給小鼠灌胃 0.7 ml/d，連續6 d，再用蒸餾水灌胃0.7 ml/d，連續6 d；靈芝孢子治療組30只：按菌群失調造模后，用高(35%)、中(5%)、低(2.5%)三種濃度的靈芝孢子液給小鼠灌胃0.7 ml/d，持續6 d；雙歧桿菌治療組30只：按菌群失調造模后，采用三種濃度的雙歧桿菌液高(35%)、中(17.5%)、低(8.75%)給小鼠灌胃；靈芝孢子和雙歧桿菌共同治療組30只：按菌群失調造模后，將高劑量靈芝孢子液與高劑量雙歧桿菌液等量混合，再依次對倍稀釋?zhuān)�配制成高、中、低三種濃度灌胃小鼠。

　　1.4  檢測指標

　　觀(guān)察記錄各組小白鼠的活動(dòng)狀態(tài)、進(jìn)食量、糞便形狀。各組小鼠頸椎脫臼處死，取直腸成型糞便，無(wú)菌NS混合稀釋后行有氧及厭氧培養48 h后作菌落計數，換算成對數值。SPSS軟件12.0 方差分析(LSD法)實(shí)驗結果。

　　2  結果

　　2.1  一般狀態(tài) 

小鼠在給予抗生素灌胃6 d后，進(jìn)食量減少，糞便含水量明顯增加，有腹瀉癥狀；各個(gè)治療組治療后，糞便含水量明顯減少，腹瀉癥狀減輕。

2.2  腸道菌群 

　　由表1可知，經(jīng)抗生素灌胃后的小鼠腸道中的需氧菌和厭氧菌菌落數明顯減少，低于正常對照組，有顯著(zhù)差異性（P<0.01）。由表2可知，用不同劑量的靈芝孢子粉、雙歧桿菌及二者混合物治療后，各治療組菌落數(需氧菌和厭氧菌)都較模型組多，說(shuō)明模型小鼠在經(jīng)過(guò)靈芝孢子粉、雙歧桿菌及二種混合物治療后，其腸道內的細菌數有所恢復。靈芝孢子粉治療高劑量組比中、低劑量組的菌落數(需氧菌和厭氧菌)更多，與對照組及中、低劑量組比較，有顯著(zhù)差異性(P<0.05)；雙歧桿菌治療高劑量組也較其中、低劑量組的效果好，與對照組及中、低劑量組比較，有顯著(zhù)差異性(P<0.05)。但是混合治療高劑量組與中、低劑量組比較效果則不明顯，P>0.05。各劑量組的需氧菌和厭氧菌比較，厭氧菌數明顯多于需氧菌數，有顯著(zhù)差異性(P<0.05)。表1  鹽酸林可霉素對小鼠腸道菌的影響（略）注：(1)與正常對照組相比P<0.05。表2  靈芝孢子和雙歧桿菌對小鼠腸道菌的影響（略）注：(1)與靈芝孢子中、低治療組相比，P<0.05;(2)與雙歧桿菌中、低治療組相比，P<0.05;(3)與共同治療中、低組相比，P<0.05;(4)與同藥物同劑量的需氧菌比較，P<0.05。

　　3  討論

　　人體腸道中生存著(zhù)100萬(wàn)億種微生物，包括細菌、真菌、病毒、原蟲(chóng)等，而對機體有益的僅有10～20種，如擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、雙歧桿菌屬、埃希菌屬等。這些生理菌群數量在一定范圍波動(dòng)時(shí)，能維持正常的生理和免疫功能，具有對抗外籍菌定植的能力，即定植抗力。同時(shí)，生理菌群還參與蛋白、糖、脂肪的消化吸收、合成維生素等，對宿主有營(yíng)養作用，對亞硝胺等致癌物質(zhì)有降解的功能而起抗癌作用。生理菌群構成了人體的正常微生態(tài)環(huán)境[3]。大量抗生素使用后，腸道生理菌群(乳酸桿菌、雙岐桿菌等)受到抑制，對腸道有害菌（難辨梭菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等）的拮抗作用減弱，使這些細菌在結腸定植、繁殖而導致結腸炎和腹瀉。另外，某些抗生素還可直接引起腸黏膜損害、腸上皮纖毛萎縮、細胞內酶的活性降低或與腸道內膽汁結合或直接促進(jìn)腸蠕動(dòng)而導致腹瀉[4]。

　　微生態(tài)制劑可調整腸道菌群失調，避免抗生素帶來(lái)的種種不良反應，恢復腸道內的微生態(tài)平衡[5，6]。雙歧桿菌經(jīng)口服后，可與腸道內其它厭氧菌一起占據腸黏膜表面，構成生物學(xué)屏障，形成定植抗力，從而阻止致病菌和條件致病菌的定值入侵。此外，雙歧桿菌通過(guò)發(fā)酵葡萄糖可產(chǎn)生大量醋酸、乳酸 ,使腸道 pH 值降低，從而抑制一些致病性細菌，如傷寒桿菌、痢疾桿菌、銅綠假單孢菌、變形桿菌以及真菌等致病菌的生長(cháng)；并且它還可以合成細胞外糖苷酶，降解腸黏膜上皮細胞上的復雜多糖，從而阻止腸道內潛在致病菌及其毒素對腸黏膜上皮細胞的黏附[7，8]。此外，雙歧桿菌在腸內可合成多種維生素和生物酶，如維生素 B1 、維生素B2 、維生素B6 、維生素B12 、維生素K1 、尼克酸和葉酸等；另外，雙歧桿菌可通過(guò)產(chǎn)酸使腸道酸化，有利于 Fe2+、Ca2+及維生素D 等營(yíng)養物質(zhì)的吸收。此外，雙歧桿菌還具有清除自由基、抗氧化、增強機體免疫力、減少諸多腸源性有害物質(zhì)，如酚、氨、苯乙醇胺、吲哚、硫化氫等生成[1,2]。在菌群失調的情況下，及時(shí)補充雙歧桿菌可促進(jìn)腸道功能恢復，減少相關(guān)疾病的發(fā)生。

　　靈芝是食藥兩用真菌，中醫認為靈芝有滋補、健腦、強身、消炎、利尿、益胃等功效�，F代醫學(xué)研究表明，靈芝安全無(wú)毒、無(wú)副作用，具有抑制腫瘤作用、調節免疫功能，促進(jìn)骨髓細胞蛋白質(zhì)、核酸合成代謝，對放射性損傷有保護作用，減輕化學(xué)藥物對肝臟的損傷，加強肝臟代謝藥物的降毒功能，降血糖及清除自由基作用[9，10]。靈芝孢子是靈芝生長(cháng)成熟期從菌蓋彈射出來(lái)極其細小的孢子，是靈芝的生殖細胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)。此外，它還具有調理腸胃作用，使腸道內益生菌增殖，從而糾正和預防抗生素引起的小鼠腸道菌群失調[11]。 

本實(shí)驗通過(guò)給小鼠經(jīng)口灌胃抗生素的方法建立小鼠腸道菌群失調模型[12]，模型組小鼠出現進(jìn)食量減少、活動(dòng)量降低、糞便含水量增加等腸道菌群失調癥狀，腸道菌落數（需氧菌和厭氧菌）明顯低于正常對照組，說(shuō)明抗生素的使用引起了實(shí)驗小鼠腸道菌群失調。模型建立后分別給予小鼠不同濃度的靈芝孢子粉、雙歧桿菌以及二者的混合物進(jìn)行治療后，小鼠腸道需氧菌和厭氧菌的數量均有增加，其中高劑量靈芝孢子粉和高劑量雙歧桿菌治療后的效果明顯，甚至恢復到正常值。說(shuō)明高劑量的靈芝孢子粉和雙歧桿菌對于恢復腸道內的厭氧菌數量具有較強的作用，而當靈芝孢子粉和雙歧桿菌二者的濃度降低，或用低濃度制成的混合物治療時(shí)效果則不理想，說(shuō)明這兩種藥物的治療效果與它們的濃度有著(zhù)密切的關(guān)系。另外，無(wú)論是單獨使用還是混合使用，靈芝孢子粉和雙歧桿菌對于恢復小鼠腸道內的厭氧菌的效果較好，一方面補充的雙歧桿菌增加了腸道中厭氧菌的數量；另一方面，靈芝孢子粉促進(jìn)了腸道內益生菌尤其是厭氧菌的增殖，提高了其在腸道內的定植抗力，恢復了腸內正常微生態(tài)環(huán)境。研究表明，靈芝孢子粉和雙歧桿菌對治療因抗生素所引起的腸道菌群失調確實(shí)有明顯效果，能夠使腸道中的優(yōu)勢菌群數量得以恢復，從而糾正了因抗生素引起的菌群失調癥狀。

 作者：崔冬冰，左麗， 陳阿英， 龍世棋， 鐘志強《貴陽(yáng)醫學(xué)院學(xué)報》

【參考文獻】（略）

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