產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析

超廣譜β-內酰胺酶(extended-spectrum-β- lactamases，ESBLs)由質(zhì)�；�因編碼，通過(guò)轉導和轉化在細菌間擴散，水解含甲氧亞氨基的β-內酰胺類(lèi)抗生素，是細菌對青霉素、頭孢菌素及單環(huán)類(lèi)抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要原因。ESBLs多由腸桿菌科細菌產(chǎn)生，其中以大腸埃希菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)最為常見(jiàn)[1]。為了解嘉興地區大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的感染率和耐藥率，本次研究對臨床分離的121株大腸埃希菌和101株肺炎克雷伯菌菌株標本中進(jìn)行了ESBLs檢測，現報道如下。

　　1　資料和方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　菌株來(lái)源　121株大腸埃希菌、101株肺炎克雷伯菌菌株取自2006年1月至2008年6月嘉興地區分離于各種感染性疾病患者送檢的痰液、咽拭子、尿液及靜脈血等標本，并經(jīng)細菌學(xué)鑒定。藥敏試驗質(zhì)控菌株大腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603均由浙江大學(xué)醫學(xué)院嚴杰教授提供。

　　1.1.2 細菌鑒定儀及主要藥敏紙片　細菌鑒定儀為VITEK-32微生物分析儀(由法國梅里埃公司生產(chǎn))。氨芐西林/舒巴坦(30μg / 10μg)、阿莫西林/棒酸(30μg /10μg)等藥敏紙片(由英國Oxoid公司生產(chǎn))，其它藥敏紙片(由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn))。

　　1.1.3　培養基及ESBLs檢測紙片　培養基采用M-H瓊脂(由杭州天和微生物有限公司生產(chǎn))。ESBLs檢測紙片(由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn))。

　　1.2　方法

　　1.2.1　細菌懸液的制備　將各菌株接種于M-H瓊脂平板上，37℃培養24 h，用滅菌0.9%氯化鈉溶液收集菌苔，3000 r/min離心30 min，取菌體沉淀用滅菌0.9%氯化鈉溶液重懸，采用麥氏比濁法稀釋至1×107 CFU/ml。

　　1.2.2　ESBLs檢測　藥物敏感試驗：采用K-B紙片擴散法。取上述各細菌懸液0.1 ml均勻涂布于直徑9 cm的M-H瓊脂平板上，貼上各藥物紙片，37℃培養24 h后觀(guān)察結果。采用美國國家臨床實(shí)驗室標準化委員會(huì )(NCCLS 2008版本)的標準判斷藥敏試驗結果[2]。

　　1.2.3　采用雙紙片協(xié)同試驗　取上述各細菌懸液0.1 ml均勻涂布于直徑9 cm的M-H瓊脂平板上，貼上ESBLs檢測紙片，37℃培養24 h后觀(guān)察結果，若于紙片周?chē)�出現串聯(lián)的啞鈴狀沉淀環(huán)判為ESBLs陽(yáng)性[3]。

　　1.2.4　統計學(xué)方法　采用SPSS 13.0統計學(xué)軟件。采用χ2檢驗對不同菌種ESBLs陽(yáng)性率進(jìn)行比較。設P<0.05為差異有統計學(xué)意義。

2　結果

　　2.1　ESBLs檢測陽(yáng)性率　121株大腸埃希菌中，43株產(chǎn)ESBLs，陽(yáng)性率為35.53%;101株肺炎克雷伯菌中，33株產(chǎn)ESBLs，陽(yáng)性率為32.67%;兩種細菌ESBLs檢測陽(yáng)性率比較差異無(wú)統計學(xué)意義(χ2=3.40, P>0.05)。

　　2.2　藥敏試驗結果　產(chǎn)ESBLs及不產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對17種抗生素的藥敏試驗結果見(jiàn)表1。

　　由表1可見(jiàn)， 對不產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對17種抗生素耐藥率明顯低于產(chǎn)ESBLs菌株(χ2=29.91~106.64, P 均<0.05)。

　　3　討論

　　目前檢測ESBLs的方法較多，有雙紙片協(xié)同試驗(double disk synergy test, DDS)、三維試驗、E-test、Vitek儀器鑒定等。DDS法為法國學(xué)者Jarlier等于1988年所建立，具有簡(jiǎn)便、廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)，對產(chǎn)ESBLs細菌的檢出率可達98%以上，適合臨床實(shí)驗室使用[2～4]。我國幅源遼闊，各地區、各醫院抗菌藥物使用情況差異較大，產(chǎn)ESBLs菌株流行情況、產(chǎn)ESBLs菌株耐藥性差異也較大，并有逐年增加的趨勢[5~7]。本次研究認為浙江嘉興地區大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率分別為35.53%和32.67%，低于金華地區近年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率[8]。

　　由于存在菌種接種效應，2004年NCCLs明確規定即使產(chǎn)ESBLs菌株體外敏感，也不能用于臨床治療。Paterson等[9]研究產(chǎn)ESBLs菌株感染病例，發(fā)現堅持用體外中介的三代頭孢菌素治療的病例，最終臨床治療全部失敗;其他病例采用體外藥敏敏感的三代頭孢菌試驗敏感的三代頭孢菌素治療，治療的失敗率為58%。本次研究表明本地區產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對第三代頭孢菌素的耐藥率很高，可能與頭孢菌素目前大量使用及使用不規范有關(guān)。建議減少第三代頭孢菌素作為產(chǎn)ESBLs菌株感染治療的一線(xiàn)用藥。

由于所有大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌株均對碳青霉烯類(lèi)抗生素亞胺培南敏感，本地區大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌感染治療首選亞胺培南。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對單環(huán)類(lèi)β-內酰胺類(lèi)的氨曲南均敏感、抑制劑復合抗生素阿莫西林/棒酸以及阿米卡星耐藥率僅為18.60%~27.27%，故在臨床上發(fā)現產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌感染時(shí)，可考慮采用這些抗生素作為治療藥物。

作者：作者：孫志華　吳森林　孫愛(ài)華

【參考文獻】
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　　3 Sanders CC, Barry AL, Waashington JA, et al. Detection of extended-spectrum-β-lactamase-producing members of the family Enterobacteriaceae with the Vitek ESBL test[J]. J Clin Microbiol, 1996, 34(12): 2997-3001.
　　4 Thomson KS, Sanders CC. Detection of extended-spectrum β-lactases in members of the family Enterobactenaceae: Comparison of thedouble-disk and three dimensional test[J]. Antimicrob Agents Chemother, 1992, 36(9): 1877-1882.
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　　8 卜黎紅, 徐瑞龍, 也海深. 超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析[J].浙江預防醫學(xué)，2004, 16(10):11-12.
　　9 Patterson JE, Hardin TC, Kelly CA, et al. Association of antibiotic utilization measures and control of multiple-drug resistance in Klebsiella pneumoniae[J]. Infect Control Hosp Epidemiol, 2000, 21(4):455-458.

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