培養基的質(zhì)量控制

本文對微生物實(shí)驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論，談一些觀(guān)點(diǎn)和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開(kāi)展工作。

1.1 購置培養基、抗血清和試劑時(shí)要求供應商提供產(chǎn)品質(zhì)控證書(shū)，盡量選擇通過(guò)ISO9000認證的生產(chǎn)廠(chǎng)家。

使用前首先對外觀(guān)、批號、pH 值、滅菌要求、選擇性等進(jìn)行初步評估，用陽(yáng)性和陰性對照菌株做質(zhì)量控制實(shí)驗，要按照培養基和試劑標簽說(shuō)明的貯藏條件保存，自配的染液每周必須作質(zhì)控。如有條件可參照國際食品微生物與食品衛生委員會(huì )提供的關(guān)于培養基質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控。

1.2 使用 培養基的使用應在有效期內，開(kāi)封后的保存、制備過(guò)程中器皿管壁的潔凈度以及配制時(shí)的pH值要嚴格按規定控制，不同批號的培養基和試劑不要混合使用。目前市售的大多數為半成品培養基，無(wú)論是分裝后滅菌，還是無(wú)菌分裝，都應進(jìn)行嚴格的無(wú)菌試驗，證明無(wú)菌生長(cháng)后才能使用。從可靠來(lái)源獲得的診斷血清應注明收到的日期，如為凍干制品，還應注明配成水溶液的日期。使用前檢查外觀(guān)應清澈，如出現混濁表示己被雜菌污染。使用時(shí)應注意其有效期和滴度，使用前用標準菌株試驗其敏感性和特異性。

干粉培養基應保存在陰涼干燥處，要避免陽(yáng)光直射；未開(kāi)瓶的培養基在室溫下的最長(cháng)保存2年，開(kāi)瓶后的干粉培養基易吸濕，應注意防潮并在6個(gè)月內用完。應定期對儲存中的培養基進(jìn)行常規檢查，如容器密閉性復查、首次開(kāi)封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發(fā)生結塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

3.1 外觀(guān)控制制備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)／脫水。

3.2 污染控制 從每批制備好的培養基中選取部分進(jìn)行污染測試(無(wú)菌試驗)，確定無(wú)微生物生長(cháng)方可使用。

3.3 性能測試

3.3.1 測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩定

特性并能有效證明實(shí)驗室特定培養基最佳性能的一套菌株，應來(lái)自國際／國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株，菌株的選擇參考衛生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養基質(zhì)量檢驗規程》。

3.3.2 定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過(guò)夜培養物10倍遞增稀釋?zhuān)粶y試平板和參照平板劃分為4個(gè)區域并標記；從最高稀釋度開(kāi)始，分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域；將稀釋液涂滿(mǎn)整個(gè)1/4區域，37℃培養18小時(shí)；對易計數的區域計數，按公式計算生長(cháng)率(生長(cháng)率=待測培養基平板上得到的菌落總數／參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長(cháng)率應不低于0.7，該類(lèi)培養基應易于目標菌生長(cháng)；選擇性培養基上目標菌的生長(cháng)率應不低于0.1。

3.3.3 半定量測試方法 改進(jìn)的劃線(xiàn)法接種法平板分ABCD四區，共劃16條線(xiàn)，平行線(xiàn)大概相隔0.5cm，每條有菌落生長(cháng)的劃線(xiàn)記作1分，每個(gè)僅一半的線(xiàn)有菌落生長(cháng)記作0.5分，沒(méi)有菌落生長(cháng)或生長(cháng)量少于劃線(xiàn)的一半記作0分，分數加起來(lái)得到生長(cháng)指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長(cháng)，而非目標菌的生長(cháng)應部分或完全被抑制， 目標菌的生長(cháng)指數G大于6時(shí)，培養基可接受。

3．3．4 定性測試方法平板接種觀(guān)察法用接種環(huán)取測試菌培養物，在測試培養基表面劃平行直線(xiàn)。按標準中規定的培養時(shí)間和溫度對接種后的平板進(jìn)行培養， 目標菌應呈現良好生長(cháng)，并有典型的菌落外觀(guān)、大小和形態(tài)，非目標菌應是微弱生長(cháng)或無(wú)生長(cháng)。

 

作者：金晶 殷愛(ài)琴 徐子茗 哈爾濱市南崗區疾病預防控制中心