羅紅霉素片微生物限度檢查法的驗證

【摘要】 目的:驗證一種羅紅霉素片微生物限度檢查的方法。方法:采用薄膜過(guò)濾法檢驗,采用《中國藥典》2005年版收載的方法進(jìn)行驗證。結果:五種菌株的回收率均高于70%,且控制菌檢查具有專(zhuān)屬性。結論:采用薄膜過(guò)濾法檢查羅紅霉素片微生物限度可行。 

[關(guān)鍵詞] 羅紅霉素片;微生物限度檢查;薄膜過(guò)濾法 

　　 

　　[Abstract] Objective: To establish a microbial limit test method for Roxithromycin Tablets. Methods:Filtration and verification method of Chinese Pharmacopoeia 2005 were used.Results: The recoveries were more than 70% and the quality of control germ check was credible. Conclusion: Membrane-filter can be used in microbial limit test for Roxithromycin Tablets. 

　　[Key words] Roxithromycin Tablets; Microbial limit test; Membrane-filter 

　　 

　　羅紅霉素有殺菌作用,對微生物生長(cháng)有干擾,按常規方法測定其微生物限度無(wú)法確保結果的準確性,方法學(xué)驗證是保證結果準確的唯一途徑。 

　　1儀器與材料 

　　1.1 儀器 

　　開(kāi)放式薄膜過(guò)濾器(孔徑0.45 μrn,濾膜直徑50 mm),恒溫培養箱、培養皿,抽濾泵。 

　　1.2 樣品 

　　羅紅霉素片(麗珠制藥廠(chǎng),批號:070301、070501;沈陽(yáng)管城制藥有限公司,批號:20061101)。 

　　1.3 培養基 

　　營(yíng)養瓊脂培養基,玫瑰紅鈉瓊脂培養基,膽鹽乳糖增菌液,4-甲基傘形酮葡糖苷酸(MUG)培養基,均購自中國藥品生物制品檢定所。 

　　1.4 稀釋液及沖洗液 

　　pH為7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。 

　　1.5 菌種 

　　大腸埃希菌,枯草芽孢桿菌,金黃色葡萄球菌,白色念珠菌,黑曲霉菌,均購自中國藥品生物制品檢定所。 

　　2 方法與結果 

　　2.1 方法 

2.1.1 供試液制備 稱(chēng)取樣品10 g,研細,加稀釋液至100 ml,制成 1∶10供試液。 

　　2.1.2 菌液制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌液均按《中國藥典》2005年版二部方法制備,濃度為50~100 cfu/ml[1]。 

　　2.1.3 細菌總數、霉菌及酵母菌總數檢查方法的驗證 

　　2.1.3.1 試驗組 取供試液1 ml,加入裝有50 ml稀釋液的濾器中,經(jīng)薄膜過(guò)濾后,沖洗3次,每次100 ml,然后加入含有1 ml菌液的沖洗液100 ml,抽濾,取膜,將濾膜正貼于培養基平板,平行制備2個(gè)平皿。按《中國藥典》2005年版菌落計數方法計數。 

　　2.1.3.2 菌液組 測定所加的試驗菌數。除不加供試液外,操作同試驗組。 

　　2.1.3.3供試品對照組測定供試品本底菌數。除不加菌液外,操作同試驗組。 

　　2.1.3.4 稀釋液對照組測定稀釋液是否干擾微生物生長(cháng)。取稀釋液 l ml,其余同試驗組。 

　　2.1.4 控制菌檢查方法的驗證 

　　2.1.4.1試驗組取供試液的上清液10 ml,置于有100 ml稀釋液的薄膜過(guò)濾器內,過(guò)濾、沖洗3次,每次100 ml,最后1次加入10~100 cfu/ml大腸埃希菌菌液1 ml,抽濾,取出濾膜加入到100 ml膽鹽乳糖增菌液中,37℃恒溫培養 l8~24 h后作 MUG試驗及靛基質(zhì)試驗。 

　　2.1.4.2 陰性菌對照組方法同試驗組,加入10~100 cfu/ml金黃色葡萄球菌菌液l ml代替大腸埃希菌。同時(shí)作稀釋液和培養基陰性對照。 

　　2.2 結果 

　　2.2.1 細菌總數、霉菌及酵母菌總數檢查方法驗證 5種菌株的回收率均高于 70%(表 1),符合驗證規定。稀釋劑對照組的回收率(%) =(稀釋劑對照組平均菌落數/菌液組平均菌落數)×100%;試驗組的回收率(%) =[(試驗組平均菌落數-供試品對照組平均菌落數)/菌液組平均菌落數]×100%。 

　　2.2.2 控制菌檢查方法驗證試驗組陽(yáng)性菌對照檢出大腸埃希菌,陰性菌對照未檢出大腸埃希菌(表2),說(shuō)明本法可檢出大腸埃希菌,具有專(zhuān)屬性,符合驗證規定。 

　　3 討論 

　　薄膜過(guò)濾使微生物充分被濾膜截留,再用適量無(wú)干擾的沖洗液洗去供試樣品的干擾,就能準確地進(jìn)行樣品的微生物限度檢查。沖洗液的用量是關(guān)鍵,如過(guò)量沖洗,會(huì )使菌體受損、不利于生長(cháng),從而影響回收率,還會(huì )使濾膜受損、孔徑改變,影響實(shí)驗結果。反之,如沖洗不充分,樣品抗菌作用就不能徹底消除,也無(wú)法保證實(shí)驗結果的準確性。 

作者：趙金英 樊麗《中國醫藥導報》

　　[參考文獻] 

　　[1]中華人民共和國國家藥典委員會(huì ).中國藥典[S].二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.附錄93