老年人齲壞組織中變形鏈球菌和乳酸桿菌的致齲特點(diǎn)

【摘要】  目的 探討老年人齲壞組織中變形鏈球菌（MS）和乳酸桿菌（LB）在致齲過(guò)程中的特點(diǎn)。方法 136例齲壞組織樣本按患者年齡、患牙齲壞程度和齲壞活躍性分組，利用選擇性培養基對MS及LB行分離、培養和鑒定。統計兩種細菌在不同組別中細菌菌落形成單位（CFU）計數及兩種細菌致齲樣本例數。結果 在老年齲組、嚴重齲組（中、深齲）和活動(dòng)期齲組中，MS與LB的CFU計數均顯著(zhù)升高(均P＜0.05)；MS與LB共同致齲樣本數在老年齲組中顯著(zhù)升高(P＜0.05)，并隨齲壞程度的加重而升高(P＜0.05)。結論 在老年齲病及中、深齲中，MS與LB為互生關(guān)系，有明顯共同致齲作用。 
【關(guān)鍵詞】  變形鏈球菌；乳酸桿菌；老年人；齲壞組織
變形鏈球菌（MS）和乳酸桿菌（LB）與齲病的形成和發(fā)展密切相關(guān)。MS是口腔主要致齲菌，對其在細菌毒力、致齲機制方面已有研究〔1〕，而有關(guān)LB的致齲作用頗有爭議，有學(xué)者認為L(cháng)B是齲壞的結果而不是齲壞的原因〔2〕；另有研究認為在致齲初期LB并不致齲，而在齲壞進(jìn)入深層時(shí)，LB由于其較強的耐酸性而大量繁殖并產(chǎn)酸，協(xié)同MS致齲〔3〕；有人指出LB有可能因抑制齲病病原菌的繁殖而抑制齲病的發(fā)展〔4～5〕。本研究通過(guò)分離、培養及鑒定136例齲壞組織樣本中的MS和LB，探討MS與LB的致齲特點(diǎn)及老年齲病患者齲壞組織中的菌與齲病嚴重程度的關(guān)系。
    1  材料與方法
    1.1  細菌培養基與鑒定方法  細菌培養基采用改良輕唾瓊脂培養基(MS)〔6〕與Rogasa培養基(LB)〔7〕，分別采用Dentocult SM 法和Dentocult LB法鑒別MS和LB致齲活躍性。
    1.2  方法
    1.2.1  采樣及樣本分組  齲壞組織樣本，由同一操作者于2006年11月～2007年3月在本院、甘肅省第二人民醫院及蘭州軍區總醫院口腔科的90位患者（136顆患牙）采集，每患牙采集1例樣本，共取樣本136例。研究對象無(wú)系統疾病，采樣前2 w內未使用任何抗生素藥物，并知情同意。準備盛有1.0 ml滅菌生理鹽水1.5 ml離心管及1＃挖器（Q/ILLS002��2001），常規無(wú)菌操作采樣。采樣過(guò)程如下：先將挖器前端置酒精燈外焰燒灼滅菌（3次，6～7 s/次），將取樣部位進(jìn)行沖洗、隔濕、干燥，然后刮取齲壞組織至平1＃挖器勺部。將所取樣本浸入離心管液體中，輕搖、混勻。將離心管標號，2 h內送檢。所剩樣本加300  μl 80%甘油，凍存備用（-20℃）。將樣本按照年齡分為老年組（年齡≥60歲）、恒牙組（年齡12～59歲）和乳和替牙組（年齡≤13歲）；按齲壞程度分為淺齲、中齲和深齲組；按齲病活躍性分為活動(dòng)期組和靜止期組。
    1.2.2  細菌接種及孵化  將樣本混勻后，分別取20 μl接種于兩種培養皿，20%O2、80%CO2、37℃恒溫條件下培養48 h。
    1.2.3  細菌形態(tài)學(xué)及專(zhuān)用培養基鑒定  MS菌落為透明、邊緣略整齊、中心微隆起似雨滴狀菌落；LB菌落乳白色、邊緣略不整齊、中心微隆起菌落。隨機法，將本實(shí)驗分離獲得的兩種細菌分別二次克隆后接種于Dentocult SM與Dentocult LB上培養，生長(cháng)良好,證明本實(shí)驗培養兩種菌為目的菌。
    1.2.4  菌落計數  136例樣本中，共120例檢出MS和(或)LB，對兩種培養皿中菌落行盲法計數(每皿計數3次，最后取均數)。本實(shí)驗設定：如MS的CFU計數對數值≥MS的CFU計數對數值的單側90%下限值〔P10(MS)〕，且LB的CFU計數對數值＜LB的CFU計數對數值的單側90%下限值〔P10(LB)〕，則該樣本所對應病例中MS為主要致齲細菌；如MS的CFU計數對數值＜P10(MS)，且LB的CFU計數對數值≥P10(LB)，則該樣本所對應病例中LB為主要致齲細菌；如MS的CFU計數對數值≥P10(MS)，且LB的CFU計數對數值≥P10(LB)，則該樣本所對應病例中MS與LB共同致齲。如MS的CFU計數對數值＜P10(MS)，且LB的CFU計數對數值＜P10(LB)，則該樣本不進(jìn)入細菌相關(guān)致齲病例數統計。
    1.3  統計學(xué)處理  MS和LB的CFU計數因頻數分布呈偏態(tài)分布，經(jīng)對數轉換后呈正態(tài)分布(區間寬度0.25)，其組間比較采用方差分析。利用公式 ��1.282 s計算P10(MS)和 P10(LB)。計數資料組間比較采用χ2檢驗。
    2  結  果
    2.1  MS和LB的CFU計數對數值  MS的CFU計數對數值為4.571 2±0.722 8；LB的CFU計數對數值為4.475 6±0.741 9。計算P10(MS)為3.644，P10(LB) 為3.524。在本實(shí)驗中有10例MS的CFU計數對數值＜P10(MS)，且LB的CFU計數對數值＜P10(LB)，因而不同細菌相關(guān)致齲病例數為110。
    2.2  不同組別中CFU計數均數對數值比較  各年齡組別中，老年組兩種細菌CFU計數均數對數值均升高(P＜0.05)（表1）；不同齲壞程度組中，MS與LB的CFU計數均數對數值分別隨著(zhù)齲壞程度加重而升高(P＜0.05)（表2）；不同齲病活躍性組中，活動(dòng)期組兩種細菌CFU計數均數對數值均升高(P＜0.05)（表3）。
    2.3  與不同細菌相關(guān)齲壞病例數比較  老年組兩種細菌共同致齲病例數均升高(χ2=12.328 5，P＜0.05)（表1）；兩種細菌共同致齲病例數隨著(zhù)齲壞程度的加重而升高（χ2＝10.170，P＜0.05)（表2）；活動(dòng)期組與靜止期組兩種細菌共同致齲病例數差別無(wú)統計學(xué)意義（χ2= 2.298，P＞0.05）（表3）。表1  不同年齡分組中MS及LB的CFU均數對數值表2  不同齲壞程度分組中MS及LB的CFU均數表3  齲病活躍性分組中MS及LB的CFU均數
3  討  論
    齲病在臨床上具有明顯的年齡特征。第三次全國口腔健康流行病學(xué)調查結果顯示：我國5歲兒童乳牙齲病患病率為66％、65～74歲的老年人齲齒患病率高達98％。這除了與不同年齡對口腔衛生的重視程度、飲食習慣不同外，還與口腔組織的增齡變化有關(guān)。周學(xué)東等 〔8〕發(fā)現老年人釉質(zhì)與青少年釉質(zhì)對齲損形成的敏感性沒(méi)有明顯的差異，提示因年齡增長(cháng)導致的牙體硬組織成分、結構變化并不能完全解釋齲病的成因。本研究發(fā)現在老年組齲壞組織中，兩種細菌共同致齲作用增強明顯（P＜0.05），說(shuō)明老年組齲壞組MS和LB是互生關(guān)系，即致齲過(guò)程中，兩種微生物間相互受益。這可能與老年人的唾液腺增齡性萎縮，唾液的流速和緩沖能力均降低有關(guān)。
    細菌的致齲能力主要是因為能黏附至牙面并發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸和耐酸。MS最適生長(cháng)pH值為6.5，而LB最適pH值較低，在5.5～6.2之間，兩者都能在pH值很低，甚至在pH值3.5的環(huán)境中生長(cháng)。MS對牙面有蔗糖非依賴(lài)性黏附和蔗糖依賴(lài)性黏附兩種黏附機制，其中，蔗糖依賴(lài)性黏附可高度促進(jìn)MS在牙面的黏附和聚集〔9〕。憑借這種黏附機制，MS附著(zhù)于光滑牙面的致齲作用較強〔10〕。有學(xué)者發(fā)現LB對Ⅰ型膠原蛋白具有強親和力；當齲洞形成以后，由于局部微生態(tài)的差異、唾液的沖洗和緩沖能力減弱、缺乏磷灰石的緩沖等原因，更為L(cháng)B提供了適宜的條件，因此，隨著(zhù)齲壞程度的嚴重，LB參與了成齲的過(guò)程。理論上，這兩種菌間存在協(xié)同或競爭和拮抗等關(guān)系〔11〕。本研究結果顯示，淺齲中MS與LB的共同致齲作用并不明顯，但隨著(zhù)齲壞程度的增加，二者的致齲過(guò)程有可能存在協(xié)同作用。
    本研究結果顯示，齲病處于活動(dòng)期時(shí)，MS和LB的CFU計數均數均明顯升高，齲病處于靜止期時(shí)，MS和LB的CFU計數均數均明顯降低(P＜0.05)。當齲病處于活動(dòng)期時(shí)，四聯(lián)因素充分發(fā)揮作用，有利于兩種細菌的繁殖，細菌的繁殖在數量上明顯增多，而靜止齲因齲損外露或開(kāi)放，原有致病條件發(fā)生了變化，不利于兩種細菌的繁殖，細菌總數也隨之減少。對于兩種細菌共同致齲病例數與齲病的活動(dòng)期或靜止期無(wú)關(guān)這一現象，以及LB在齲病的形成和發(fā)展過(guò)程中的致齲機制有待進(jìn)一步的研究。
綜上所述， LB與MS的共同致齲作用隨著(zhù)齲壞程度的增加而增加，且在老年齲病中作用明顯。這一結果為齲病尤其老年齲病的生物學(xué)診斷、預防、治療提供了新的思路。
作者：周建業(yè) 張金婷 肖云 車(chē)團結 何祥一 《中國老年學(xué)會(huì )雜志》
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