硫化氫陽(yáng)性的大腸桿菌的鑒定報告

大腸桿菌是人和動(dòng)物腸道的正常菌群，并廣泛分布于自然界中，除部分具有致病性外，大多數屬于正常菌群，近2年我們在腹瀉患者糞便中分離出引起致瀉的H2S陽(yáng)性的大腸桿菌，就此我們進(jìn)行了系統鑒定，現將鑒定結果介紹如下。以供參考。

    1  材料與方法

    1.1  材料來(lái)源  所采檢樣來(lái)源于新疆烏魯木齊市第一人民醫院兒童分院腹瀉病門(mén)診，按常規法采樣送檢。

    1.2  實(shí)驗用培養基和診斷血清  S.S瓊脂、伊紅美蘭瓊脂均由上海醫學(xué)化驗所提供。水解酪蛋白瓊脂、生化試驗培養基均由浙江省軍區后勤部衛生防疫檢驗所提供。

    雙糖鐵培養基由衛生部上海生物制品研究所提供。試驗前按2%的尿素、1%的蔗糖量分別加入雙糖鐵半固體培養基內，制成三糖鐵尿素半固體培養基斜面備用。

    藥物敏感試驗紙片由北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供。

    沙門(mén)菌屬診斷血清、致病性大腸艾希菌診斷血清均由衛生部成都生物制品研究所提供。

    實(shí)驗用對照菌株選用地方株200020(O111：K58)大腸桿菌；藥物敏感試驗菌株選用ATCC 25922。

    1.3  方法  待檢樣品的分離檢驗程序均按常規法進(jìn)行，將患者糞便標本直接劃種于伊紅美蘭瓊脂和S.S瓊脂平板上，置37℃溫箱培養24h后觀(guān)察。

    2  結果與分析

    2.1  形態(tài)學(xué)分析  按上述方法進(jìn)行分離劃種，置37℃溫箱培養24h后在伊紅美蘭瓊脂平板上生長(cháng)出邊緣整齊、濕潤、紅色的菌落。S.S瓊脂平板上生長(cháng)出紅色且中心產(chǎn)H2S的菌落，該菌在兩皿上均呈現為優(yōu)勢菌落。將上述特征的菌落挑取若干個(gè)穿刺接種于三糖鐵尿素半固體培養基斜面上，置37℃溫箱培養18～24h后，反應為典型的大腸艾希菌的初步生化反應：發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、分解乳糖、尿素酶陰性、動(dòng)力陽(yáng)性。所不同的是產(chǎn)生硫化氫，對該典型菌落進(jìn)行了涂片染色后，鏡下觀(guān)察為革蘭陰性無(wú)芽孢小桿菌。

2.2  血清學(xué)試驗  采用沙門(mén)菌屬診斷血清和致病性大腸艾希菌診斷血清對待檢菌株進(jìn)行了玻片凝聚試驗，兩屬血清均未發(fā)現凝聚現象。

    2.3  生化試驗  在初步生化試驗的基礎上對該菌進(jìn)行了大生化試驗，其結果也符合大腸艾希菌的生化反應(見(jiàn)表1)。表1  待檢菌的生化反應

    2.4  藥敏試驗  我們對待檢菌進(jìn)行了藥敏試驗，結果對慶大霉素、痢特靈、復方新諾明，氟哌酸敏感，對青霉素、紅霉素、強力霉素均有不同程度的耐藥。

    2.5  毒力試驗(小白鼠腹腔注射法)  將待檢菌株轉種于肉湯培養基中置37℃培養24h后，取0.5ml肉湯培養物加入另一支4.5ml的肉湯培養管中置37℃培養2h后，按不同量稀釋(2h培養物、10倍倍比稀釋2個(gè)濃度)后注射于小白鼠腹腔內，以每2只為一試驗平行組，共注射三組，每只按0.5ml量注射，同時(shí)設有2只作為陰性對照組，注射3h后各試驗組小白鼠均開(kāi)始出現不同程度的發(fā)病癥狀，腹瀉，四肢無(wú)力，精神萎糜，尤其是高濃度注射組發(fā)病明顯，注射5h后即死亡，其他各組也于24h內相繼死亡。證明該菌具有致病力。

    3  討論

    血清學(xué)試驗是細菌學(xué)鑒定工作中常用的方法之一，此次試驗中我們采用沙門(mén)菌屬診斷血清和致病性大腸艾希菌診斷血清對待檢菌進(jìn)行了血清學(xué)試驗，兩屬血清均未發(fā)現凝聚現象，如僅從血清學(xué)試驗上分析并不能支持我們的判定，但在進(jìn)一步的毒力試驗中證明該菌確定可導致發(fā)病，無(wú)疑是引起腹瀉的病原菌。除H2S陽(yáng)性與大腸桿菌不符外，其他生化試驗結果均具有大腸桿菌的生化特性。綜合以上試驗，無(wú)論從形態(tài)學(xué)和常規的生化反應以及毒力試驗結果分析，都與大腸桿菌相符，因此我們認為該菌是大腸桿菌。

近年來(lái)也有過(guò)H2S遲緩陽(yáng)性的大腸桿菌［1］的報道，但在我區還是首次發(fā)現，該菌株與相應的診斷血清均不發(fā)生凝聚，但在生化反應上又極具備大腸艾希菌的特性，是否與菌株本身產(chǎn)生H2S有直接影響，筆者認為有必要對此特性進(jìn)行研究，對H2S所能產(chǎn)生的毒力及對表型特征的干擾等應做一分析，對菌株是否自身發(fā)生變異以及其他特性所致，也有待于進(jìn)一步探討。

作者：高濤 高濤 阿衣夏木 于烽 遠雪梅 《中華醫學(xué)研究雜志》

【參考文獻】
  1 陳霞, 牟懷德, 左金蓉,等. 中國衛生檢驗,2000,10(1): 74.

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