臨床微生物實(shí)驗室生物安全

臨床微生物實(shí)驗室是一類(lèi)有設施的機構，通過(guò)對人體種種物質(zhì)進(jìn)行微生物學(xué)檢查，為診斷、預防、治療疾病提供信息，為評價(jià)人類(lèi)健康、解釋檢驗結果或建議作進(jìn)一步檢查等咨詢(xún)服務(wù)[1]。

　　由于病原微生物可通過(guò)直接感染或間接感染方式對健康人體造成切實(shí)的或潛在的危害，世界衛生組織（WHO）根據微生物的致病性、感染與傳染的嚴重程度、有效治療和預防措施的有無(wú)將其生物危害分為1~4組，為確保操作人員，周?chē)�環(huán)境不被微生物感染或污染，從事上述生物危害病原體檢驗或研究的實(shí)驗室的生物安全防護也分1~4組[biologtcal safety level（BSL）-1~BSL-4]。

　　根據微生物實(shí)驗室開(kāi)展工作的性質(zhì)、接觸的病原體生物危害程度、采取生物安全措施的不同分為4類(lèi)：第一類(lèi)為基礎實(shí)驗室，從事基礎教學(xué)與研究，接觸1級生物危害微生物，即接觸不引起人或動(dòng)物疾病的細菌、真菌、病毒等生物因子，如枯草桿菌、犬肝炎病毒等。這類(lèi)實(shí)驗室屬于1級生物安全實(shí)驗室（BSL-1），只需開(kāi)放式長(cháng)形工作臺和好的微生物操作技術(shù)。第2類(lèi)也為基礎實(shí)驗室，從事實(shí)驗健康服務(wù)、診斷、研究、接觸2級生物危害微生物，即引起人動(dòng)物發(fā)病但不會(huì )引起嚴重危害的病原體。實(shí)驗室感染后不導致嚴重疾病，具有有效的治療和預防方法，傳播風(fēng)險有限，如乙型肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、沙門(mén)菌、弓形體等。該類(lèi)實(shí)驗室屬于2級生物安全實(shí)驗室（BSL-2），除了開(kāi)放式長(cháng)形工作臺還應配置生物安全柜。實(shí)驗室應有生物危害標記，操作人員應身著(zhù)防護服，有好的微生物操作技術(shù)，第3類(lèi)為遏制實(shí)驗室，從事特殊診斷與服務(wù)，接觸3級生物危害微生物，即引起人或動(dòng)物嚴重疾病但通常不因偶然在個(gè)體間傳播，有治療方法的病原體，如結核分枝桿菌、真菌、圣路易斯腦炎病毒等，這樣的實(shí)驗室屬于3級生物安全實(shí)驗室（BSL-3），需要生物安全柜和其他操作所需的基本裝置，實(shí)驗室應有生物危害標記，操作人員身著(zhù)特殊防護服，有好的微生物操作技術(shù)。人員進(jìn)入受限，實(shí)驗室內有定向氣流。第4類(lèi)為嚴格遏制實(shí)驗室。從事危險病原體操作。接觸4級生物危害微生物，即引起人類(lèi)或動(dòng)物非常嚴重的疾病，能在人與人、人與動(dòng)物之間造成傳播，尚無(wú)有效治療和預防方法的病原體，如愛(ài)博拉病毒，砂粒病毒等。這種實(shí)驗室屬于4級生物安全實(shí)驗室（BSL-4），應有配套的生物安全柜，人員身著(zhù)帶正壓的連衣褲，實(shí)驗室空氣經(jīng)過(guò)濾，配備帶雙門(mén)的高壓滅菌器，除了三級防護措施外，人員進(jìn)入實(shí)驗室時(shí)，應經(jīng)過(guò)密封的過(guò)渡艙，離開(kāi)時(shí)應經(jīng)風(fēng)淋，生物廢棄物應經(jīng)特殊處理[2~4]。

　　一、臨床微生物實(shí)驗室的生物安全要求

　　醫院檢驗科臨床微生物實(shí)驗室從事來(lái)自患者呼吸道、腸道、泌尿生殖道等部位標本病原體的分離培養、腸道、泌尿生殖道等部位標本病原體的分離培養，接觸危險程度不同的微生物，完成疾病的診斷與治療，負責健康體檢等。根據工作性質(zhì)屬于BSL-2實(shí)驗室（結核菌或真菌的檢驗工作可在BSL-2實(shí)驗室中二級外排式生物安全柜中進(jìn)行），按照WHO規定或我國國家標準[1]對BSL-2實(shí)驗室的生物安全要求如下。

　　1．實(shí)驗室設計要求[2，3]設計實(shí)驗室時(shí)，除了遵循國家的、地方的有關(guān)實(shí)驗室建筑安全標準規定外，應著(zhù)重考慮生物安全問(wèn)題：例如，從事大量的和/或含高濃度微生物工作時(shí)氣溶膠形成的問(wèn)題；實(shí)驗室設備過(guò)多造成的擁護或空間狹小，大件設備維修與保養難以進(jìn)行；節肢動(dòng)物或嚙齒動(dòng)物橫行造成的環(huán)境污染；實(shí)驗室人員進(jìn)出、特殊標本檢驗、有毒試劑使用等工作流程問(wèn)題。按照BSL-2實(shí)驗室生物安全防護要求，應從功能上劃分清潔區和污染區，將采樣區、分析區、管理區清楚地區分，有進(jìn)行實(shí)驗的工作區域，有休息攝食的地方；有接受、處理標本的場(chǎng)所，有處置生物廢棄物的設施環(huán)境，有安放實(shí)驗設備、壓縮氣體、放射性物質(zhì)，有機溶劑，檢驗耗材的空間，實(shí)驗室面積應滿(mǎn)足工作需要，方便打掃保潔，保證安全。

　　 2．實(shí)驗室裝備 實(shí)驗室的墻、天花板、地面應光滑，易于清洗；管道應避免暴露，照明應適合每一項操作，避免反光帶來(lái)的干擾；工作臺面應耐酸堿、有機溶劑腐蝕，耐中等以上的溫度，防液體滲透，可消毒。實(shí)驗用的凳子、柜子及相關(guān)設備應牢固，相互間留置的空隙要方便打掃；實(shí)驗室的木門(mén)應有防火級別并可安全關(guān)閉，門(mén)上鑲嵌可視窗，每個(gè)試驗室，特別是在出門(mén)外應有洗手池，水龍頭開(kāi)關(guān)應設計成用肘部或腳操作，保證實(shí)驗室能用上優(yōu)質(zhì)的試劑水，實(shí)驗用水與飲用水供排放管道，污水排放前應作消毒處理，實(shí)驗室應考慮機械性通氣系統，提供不循環(huán)的向內氣流，假如辦不到，應考慮開(kāi)窗，這時(shí)應安裝防節肢動(dòng)物出入的紗窗，室內溫度應控制在令工作人員感到舒適的程度，實(shí)驗室的同一幢樓中應有高壓滅菌器，要有來(lái)火器，附近應緊急噴淋設備和洗眼裝置，以保證緊急發(fā)問(wèn)發(fā)生時(shí)可以立即處理，應有可靠的供電系統和緊急情況下供電的裝置，保證溫箱，冰箱，生物安全柜等基本設備用電，走廊上應有緊急情況下方便疏散的照明燈，在工作場(chǎng)所之外提供實(shí)驗室人員攝食的休息的地方，提供放置工作人員外衣或生活物品的設施。

　　 3.實(shí)驗室常用安全設備和器材 實(shí)驗室所用的安全設備器材應能防滲、抗腐、滿(mǎn)足結構需要，避免銳角、毛口，不穩定或用玻璃類(lèi)易碎材料制成，防止或限制操作者與感染 性物質(zhì)接觸，方便操作，易于維護，清洗、消毒。常用的實(shí)驗設備如：生物安全柜、電子爐、塑料接種環(huán)、塑料平皿、移液器、帶螺旋蓋的試管、試劑瓶、安定密封的離心杯、壓力蒸汽菌鍋、桌面型或移動(dòng)型生物廢物箱。

　　 4．個(gè)人防護 在實(shí)驗室，可根據操作需要穿著(zhù)工作服，必要時(shí)穿著(zhù)背開(kāi)式罩衫等防護服，防液滴飛濺時(shí)，應穿防水的長(cháng)工作服，必要時(shí)加外塑料圍裙，離開(kāi)實(shí)驗室時(shí)應脫去工作服并留在實(shí)驗室內。限制在實(shí)驗室以外的場(chǎng)所（休息室、圖書(shū)館、辦公室、廁所等）穿工作服。穿過(guò)的工作服應定期理?yè)Q，被污染的工作服應立即更換，先消毒滅菌后再洗滌。一次性使用的工作服也應先消毒再丟棄，工作服不應與生活服務(wù)裝放在同一衣柜中。接觸血液、感染性物質(zhì)、動(dòng)物、污染表面或設備的操作，宜戴大小合適，柔軟舒適的手套�？赡馨l(fā)生感染材料溢出，濺出的操作，應戴2副手套。穿戴前檢查有無(wú)破損、污染。操作完畢或離開(kāi)實(shí)驗室，接觸干凈區域前應摘手套，防止污染其他表面或環(huán)境。一次性手套 得清洗和再次使用。在實(shí)驗室，應穿舒適、防滑、防滲不露腳步趾的鞋。在特定區域操作時(shí)應穿特殊的鞋。當微生物的操作不可能在生物安全柜內進(jìn)行而必須采取外部操作時(shí)，為防止實(shí)驗材料中液體飛濺或霧化、實(shí)習顆粒撞擊、紫外線(xiàn)灼傷等造成的傷害。應戴口罩、護目鏡、面罩或其他個(gè)體呼吸保護用品，防濺出的保護裝置、處理隱形眼鏡，長(cháng)發(fā)必須束在腦后，操作人員不佩戴戒指、手鐲、腕表、耳環(huán)等。接觸可能或具有傳染性物質(zhì)后，操作人員及接觸過(guò)實(shí)驗室設備的參觀(guān)者離開(kāi)實(shí)驗室前均應洗手。操作人員及接觸過(guò)實(shí)驗室設備的參觀(guān)者離開(kāi)實(shí)驗室前均應洗手，除此之外，進(jìn)食前、接觸患者前后、入廁前后應洗手，某些不設洗滌槽的地方應用無(wú)水產(chǎn)品洗手。

　　 5．樣品運輸 向實(shí)驗室提交樣品的所有場(chǎng)所都應接受實(shí)驗人員的指導和指令。運送時(shí)嚴防對人員、環(huán)境的污染。無(wú)論在室內或室外運輸，均應按照有關(guān)傳染性物品安全運輸的規定，將樣品放在可靠、安全、防漏的容器中運輸。

　　 6．操作要求 所有的操作應降低氣溶膠或泡沫的生成，這類(lèi)操作應在二級生物安全柜內完成。感染性材料的離心操作應使用安全的離心杯，或密封的離心機轉子，在生物安全柜中開(kāi)戶(hù)、裝載或關(guān)閉感染性材料。禁止用嘴吸取液要，除了注射藥物或從動(dòng)物體內抽吸液體以外，不應使用注射器。發(fā)生注體濺出，溢出等事故時(shí)應立即向高年資人員報告，及時(shí)處理并對事故的發(fā)生與處理作記錄。

　　 7．生物廢棄處置 生物廢物是指經(jīng)實(shí)驗分析后被丟棄的含有已知或未知的微生物材料。健康體檢者的檢驗材料即使證明無(wú)污染也不應作為生活垃圾丟棄。實(shí)驗室中一次性使用的污染材料可高壓滅菌后焚燒或直接焚燒；可反復利用的已被污染的材料應選擇先消毒再高壓滅菌或直接高壓來(lái)菌。滅菌后的材料經(jīng)洗滌、干燥、包扎、再滅菌后使用，不提倡用干熱法處理生物廢物，用微波、紫外線(xiàn)、離子輻射等方法處理也不合適。每個(gè)實(shí)驗室的工作臺上或角落中應有盛放實(shí)驗廢棄材料的防漏容器。根據需要，有的容器中含規定濃度的新鮮配制的消毒液（如次氯酸鈉、石碳酸復合物、表面活性劑等），將需要消毒的物品作用一段時(shí)間后再放入轉送容器中，送去高壓滅菌或焚燒。盛放生物廢物的容器應加蓋、防滲、可消毒、可清洗。禁止用手對任何利器進(jìn)行折彎、剪斷、折斷、重新戴套或直接從注射器上取下針頭。用過(guò)的針頭和其他污染銳器如刀片、破碎的玻璃等物品應集中放在一個(gè)帶蓋的耐扎容器中，等容器裝滿(mǎn)三分之二時(shí)，應先高壓再焚燒或直接焚燒。含利器的容器不該作為生活垃圾掩埋。注射器的針頭不應從丟棄的注射器上取下后再次使用。

　　二、生物安全管理[2，3]

　　1．組織與人員職責 具有臨床實(shí)驗室的單位應成立一個(gè)由高層管理人員為首的生物安全委員會(huì )，對實(shí)驗室工作人員和參觀(guān)者的生物安全負責；制訂和修改生物安全管理計劃，保證計劃的貫徹實(shí)施并進(jìn)行安全檢查。實(shí)驗室應任命一位有經(jīng)驗并能勝任的人作為安全員，協(xié)助管理層工作。安全員負責提交生物安全計劃和培訓計劃，對實(shí)驗室的生物安全提出建議和指導，對微生物危害性作評估，監督操作過(guò)程中的生物安全，及時(shí)發(fā)現隱患，提出解決方案。

　　 2．生物安全手冊 實(shí)驗室應編寫(xiě)生物安全手冊，內容包括：（1）評估實(shí)驗室中接觸的微生物的危害級別；（2）標準或特殊安全操作規程；（3）人個(gè)防護要求；（4）意外發(fā)生時(shí)緊急處理程序；（5）生物廢物處置方法；（6）實(shí)驗設備安全消毒程序；（7）內務(wù)管理制度；（8）員工培訓方法和記錄。編制的生物安全手冊應方便員工獲取、閱讀并遵照執行。

　　3．內務(wù)管理 在實(shí)驗室入口明顯位置張貼國際統一的生物危險標志并表明實(shí)驗室生物安全級別，出口處應有發(fā)光指標標志。保證工作區域整潔有序。非實(shí)驗室有關(guān)人員和物品不得進(jìn)入實(shí)驗室，外來(lái)參觀(guān)、進(jìn)修或合作人員進(jìn)入實(shí)驗室前應得負責人允許。實(shí)驗室內禁止吸煙、攝食、飲水或其他與實(shí)驗無(wú)關(guān)的活動(dòng)，實(shí)驗設備維護或運出修理前進(jìn)行消毒。

　　 4．事故處理和報告 實(shí)驗室應制定報告危險隱患或事故發(fā)生的程序。所有的報告以文件形式保存，對事故原因、經(jīng)過(guò)、處理及預防作詳細說(shuō)明。

　　 5．培訓 在臨床微生物實(shí)驗工作的人員必須是受過(guò)專(zhuān)業(yè)教育的技術(shù)人員，必須清楚地了解工作中存在潛在微生物的種類(lèi)與危害級別，自愿從事實(shí)驗室工作，接受安全教育，遵守生物安全規章制度和操作規程，為防止出現差錯，事故、避免操作人員獲得實(shí)驗感染實(shí)驗室高級人員必須經(jīng)常地、定期地對的有員工進(jìn)行培訓，保證每個(gè)人有好的微生物操作技術(shù)，有識別和控制生物危害因子的能力，掌握接觸病原微生物后預防感染的方法，新進(jìn)人員工作前應熟悉操作規程，在高年資人員指導下工作一段時(shí)間，通過(guò)崗位培訓考核后方可獨立工作，生物安全培訓的內容包括：告知員式取自人體的各種標本中具有可能的潛在感染物質(zhì)，操作中存在的特別危害與潛在危害，例如使用接種環(huán)，刮瓊脂平板、吸帶菌液體、制作細菌涂片、打開(kāi)培養物等操作會(huì )產(chǎn)生氣溶膠、有吸入病原體的危險；使用注射器等銳器可致表皮破損。病原微生物可通過(guò)皮膚黏膜引起感染等，讓他們了解生物安全的具體內容。強調嚴格執行操作規程的重要性。必須對新進(jìn)人員作有關(guān)病原微生物學(xué)理論和技術(shù)的培訓，以便他們掌握無(wú)力操作技術(shù)和個(gè)人防護知識。

　　 6．健康監測 實(shí)驗室負責人應保證每一位操作人員有健康監測的機會(huì )，從而監測實(shí)驗感染得的疾病，具體做法如下：人員應職前進(jìn)行體檢，對接觸2級危害性微生物的人員最好作臨床檢查及血清血檢查，操作人員健康時(shí)，采集其血液按規定貯存，提供有效的主動(dòng)或被動(dòng)免疫，對孕婦等易感者免于接觸或從事高度生物危險性操作作出規定，實(shí)驗室發(fā)和事故和員工生病時(shí)應立即報告，以實(shí)驗室獲得性感染的個(gè)人作早期檢查，需要時(shí)應向每個(gè)人提供醫學(xué)評價(jià)、疾病監測和治療，有關(guān)記錄應存檔。

摘自：《檢驗醫學(xué)》2005年20卷第3期 作者婁崢

 

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