肺炎鏈球菌幾種保存方法的比較

肺炎鏈球菌是醫學(xué)微生物實(shí)驗教學(xué)中經(jīng)常要用到的菌種，該菌營(yíng)養要求較高且能產(chǎn)生自溶酶，比一般細菌難保存，常用的定期移植保存法保存效果不理想。冷凍真空干燥法雖能保存菌種數年或十年以上，但所需設備昂貴，操作復雜，一般實(shí)驗室難以配備。為能建立一種操作簡(jiǎn)便、保存時(shí)間較長(cháng)、勿需特殊設備的肺炎鏈球菌保存方法，我們就5種簡(jiǎn)便易行的保存方法進(jìn)行對比觀(guān)察，現報告如下。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  菌株  肺炎鏈球菌CMCC（B）31003。

　　1.1.2  脫脂牛奶  新鮮牛奶經(jīng)反復脫脂數次后，0.07MPa高壓蒸汽滅菌15min后冰箱保存備用。

　　1.1.3  脫纖維羊血  用無(wú)菌手續抽取羊頸靜脈血，注入已滅菌的盛有玻璃珠的三角瓶中，脫去纖維后分裝于無(wú)菌小試管中備用。

　　1.1.4  動(dòng)物  健康昆明種小鼠。

　　1.1.5  菌種保存管  2ml安瓿或1.5ml連蓋塑料離心管，高壓滅菌后烘干。

　　2  方法

　　2.1  甘油保存法  從生長(cháng)良好的血平板上取2～3環(huán)肺炎球菌移入盛有0.5ml無(wú)菌甘油的小離心管中，蓋上蓋后用封口膜密封管口，放-20℃冰箱保存。

　　2.2  50%甘油肉湯保存法  無(wú)菌甘油與肺炎鏈球菌血清肉湯培養物以1：1比例混勻后取適量分裝于小離心管中，于-20℃下保存。

　　2.3  脫脂牛奶保存法  用準備好的脫脂牛奶洗下菌苔，用毛細滴管吸取菌懸液向安瓿內滴入幾滴，火焰封口后于-20℃下保存。

　2.4  脫纖維血保存法  用新鮮脫纖維羊血洗下菌苔，用滴管向安瓿內滴入幾滴菌懸液，火焰封口后于冰箱冷凍室中保存。

　　2.5  含菌鼠肝保存法  小鼠腹腔注射0.5ml肺炎鏈球菌菌液24h后處死小鼠，在無(wú)菌操作條件下打開(kāi)腹腔，剪取幾小塊肝組織放入小離心管中，封好口后于-20℃下保存。

　　3  結果

　　每種上述方法保存若干管，每個(gè)月取出一管室溫自然融化后取樣培養檢測菌株存活情況及主要性狀。幾種保存方法對肺炎鏈球菌的保存時(shí)間見(jiàn)表1。以含菌鼠肝保存法肺炎鏈球菌存活時(shí)間最長(cháng)，可達18個(gè)月左右，其余4種保存法菌存活時(shí)間不到1年�？梢�(jiàn)肝組織對菌的保護作用要優(yōu)于甘油、脫脂牛奶等保護劑。

　　表1  幾種保存方法保存肺炎球菌的時(shí)間（略）

　　3  討論

    已報告的肺炎鏈球菌菌種保存方法有多種，基本上分為定期移植保存法、使用保護液凍存法和冷凍真空干燥法三類(lèi)。冷凍真空干燥法是迄今最佳的菌種保存方法［1］，但所需專(zhuān)用儀器一般實(shí)驗室難以配備。保護劑常用的有甘油、脫脂牛奶、脫纖維羊血等［2］，但用保護液冷凍保存肺炎球菌一般只能保存數月。肺炎球菌難以保存較長(cháng)時(shí)間可能與該菌產(chǎn)生自溶酶有關(guān)。我室一直沿用血平板或血斜面培養物保存此菌。雖然條件不高，但移種頻繁，須每半個(gè)月移種1次。操作包括羊血采集、培養基制作、接種及培養、舊菌種管的滅菌處理等，消耗較多的人力物力，而且頻繁的傳代接種容易導致雜菌污染及菌種變異。我們通過(guò)對5種簡(jiǎn)便易操作的保存方法效果的比較，發(fā)現采用含菌鼠肝塊可將肺炎球菌保存1年以上，可大大減少傳代次數，比較實(shí)用方便，且至今國內外尚未見(jiàn)報道，值得推廣。

　　【參考文獻】

　　1  張卓然. 醫學(xué)微生物學(xué).北京：科學(xué)出版社，1998，226.

　　2  藍鴻泰.微生物學(xué)和微生物學(xué)檢驗.北京：人民衛生出版社，1988，123.

作者：王丹敏，吳勝吉，吳玉秀，董小青  中華醫學(xué)研究雜志 2006年1月 第6卷 第1期

作者單位：300162 天津，武警醫學(xué)院微生物教研室

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