厭氧菌的分離培養

厭氧菌的分離培養主要分初代培養和次代培養兩個(gè)階段，其中初代培養相對比較困難，關(guān)鍵的問(wèn)題就是厭氧環(huán)境和培養基的選擇。

　　初代培養的一般原則是： 

　�。�1）先將標本涂片染色直接鏡檢，指導培養基的選擇。 

　�。�2）盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養基。 

　�。�3）最好多選1～2種覆蓋面不同的選擇性培養基。 

　�。�4）盡量保證培養基新鮮。 

　�。�5）要考慮到微需氧菌存在的可能醫.學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。 

　　1.選用適當的培養基接種：應接種固體和液體兩種培養基； 

　�。�1）培養基的使用，應注意下列各點(diǎn)： 

　　1）盡量使用新鮮培養基，2～4h內用完； 

　　2）應使用預還原培養基，預還原24～48h更好； 

　　3）可采用預還原滅菌法制作的培養基（用前于培養基中加入還原劑，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等，盡可能使預還原劑處于還原狀態(tài)）； 

　　4）液體培養基應煮沸10min，以驅除溶解氧，并迅速冷卻，立即接種醫.學(xué)教育網(wǎng)搜集整理； 

　　5）培養厭氧菌的培養基均應營(yíng)養豐富，并加有還原劑與生長(cháng)刺激因子（血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等）。 

　�。�2）培養基的選擇：初次培養一般都使用選擇培養基和非選擇培養基。 

　　1）非選擇培養基：本培養基使分離的厭氧菌不被抑制，幾乎能培養出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂（BHI）、布氏瓊脂（BR）、胰豆胨肝粉瓊脂（GAM）、胰胨酵母瓊脂（EG）、CDC厭氧血瓊脂等。 

　　2）選擇培養基：為有目的選擇常見(jiàn)厭氧菌株，以便盡快確定厭氧的種類(lèi)。 

　　2.每份標本至少接種3個(gè)血平板，分別置于有氧，無(wú)氧及5%～10à2環(huán)境中培養，以便正確地培養出病原菌，從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類(lèi)。
　
　　3.厭氧培養法
　
　�。�1）厭氧罐培養法。
　
　�。�2）氣袋法醫.學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
　
　�。�3）氣體噴射法：又稱(chēng)轉管法。
　
　�。�4）厭氧手套箱培養法：是迄今厭氧菌培養的最佳儀器之一。
　
　�。�5）其他培養法：平板焦性沒(méi)食子酸法；生物耗氧法；高層瓊脂培養法。
　
　　4.厭氧狀態(tài)的指示：美藍和刃天青。無(wú)氧時(shí)均呈白色，有氧時(shí)美藍呈藍色，刃天青呈粉紅色。
　
　　5.分離培養厭氧菌失敗的原因：①培養前未直接涂片和染色鏡檢；②標本在空氣中放置太久或接種的操作時(shí)間過(guò)長(cháng)；③未用新鮮配制的培養基；④未用選擇培養基；⑤培養基未加必要的補充物質(zhì)；⑥初代培養應用了硫乙醇酸鈉作為唯一厭氧菌培養基；⑦無(wú)合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣；⑧催化劑失活；⑨培養時(shí)間不足；⑩厭氧菌的鑒定材料有問(wèn)題。

 

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