細菌對于碳水化合物的代謝試驗

細菌對于碳水化合物的代謝試驗原理為：由于細菌各自具有不同的酶系統，對糖的分解能力不同，有的能分解某些糖產(chǎn)生酸和氣體，有的雖能分解糖產(chǎn)生酸，但不產(chǎn)生氣體，有的則不分解糖。據此可對分解產(chǎn)物進(jìn)行檢測從而鑒別細菌。具體試驗方法有：①糖類(lèi)發(fā)酵試驗是鑒定細菌最常用的生化反應，特別是對腸桿菌的鑒定尤為重要；②葡萄糖代謝類(lèi)型鑒別試驗；③七葉苷水解試驗；④淀粉水解試驗；⑤甲基紅試驗；⑥V-P試驗；⑦β-半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）。
　
　　1.糖（醇、苷）類(lèi)發(fā)酵試驗
　
　�。�1）原理：由于各種細菌含有發(fā)酵不同糖（醇、苷）類(lèi)的酶，故分解糖類(lèi)的能力各不相同，有的能分解多種糖類(lèi)，有的僅能分解1～2種糖類(lèi)，還有的不能分解。細菌分解糖類(lèi)后的終末產(chǎn)物亦不一致，有的產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，有的僅產(chǎn)酸，故可利用此特點(diǎn)以鑒別細菌。
　
　�。�2）培養基：在培養基中加入0.5%～1%的糖類(lèi)（單糖、雙糖或多糖）、醇類(lèi)（甘露醇、肌醇等）、苷類(lèi)（水楊苷等）。培養基可為液體、半固體、固體或微量生化管幾種類(lèi)型。
　
　�。�3）方法：將分離的純種細菌，以無(wú)菌操作接種到糖（醇、苷）類(lèi)發(fā)酵培養基中，置培養箱中培養數小時(shí)至兩周后，觀(guān)察結果。若用微量發(fā)酵管，或要求培養時(shí)間較長(cháng)時(shí)，應保持濕度，以免培養基干燥。
　
　�。�4）結果：接種的細菌，若能分解培養基中的糖（醇、苷）類(lèi)產(chǎn)酸時(shí)，培養基中的指示劑呈酸性反應。若產(chǎn)氣可使液體培養基中倒管內或半固體培養基內出現氣泡，固體培養基內有裂隙等現象。若不分解，培養基中除有細菌生長(cháng)外，無(wú)任何其他變化。
　
　�。�5）應用：是鑒定細菌最主要和最基本的試驗，特別對腸桿菌科細菌的鑒定尤為重要。
　
　　2.氧化-發(fā)酵試驗（O/F試驗）
　
　�。�1）原理：細菌在分解葡萄糖的過(guò)程中，必須有分子氧參加的，稱(chēng)為氧化型。氧化型細菌在無(wú)氧環(huán)境中不能分解葡萄糖。細菌在分解葡萄糖的過(guò)程中，可以進(jìn)行無(wú)氧降解的，稱(chēng)為發(fā)酵型。發(fā)酵型細菌無(wú)論在有氧或無(wú)氧的環(huán)境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的細菌稱(chēng)為產(chǎn)堿型。利用此試驗可區分細菌的代謝類(lèi)型。
　
　�。�2）培養基：Hugh-Leifson培養基醫學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
　
　�。�3）方法：將待檢菌同時(shí)穿刺接種兩支HL培養基，其中一支培養基滴加無(wú)菌的液體石蠟（或其他礦物油），高度不少于1cm.將培養基于35℃培養48h或更長(cháng)。
　
　�。�4）結果：兩支培養基均無(wú)變化為產(chǎn)堿型或不分解糖型；兩支培養基均產(chǎn)酸為發(fā)酵型；若僅不加石蠟的培養基產(chǎn)酸為氧化型。
　
　�。�5）應用：主要用于腸桿菌科細菌與非發(fā)酵菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型，而后者通常為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于葡萄球菌與微球菌間的鑒別。
　
　　3.β-半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）
　
　�。�1）原理：有的細菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，能分解鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下也可檢出。
　
　�。�2）試劑：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸餾水中，在加入緩沖液（6.9g NaH2P04溶于45ml蒸餾水中，用30% NaOH調整pH為7.0，再加水至50ml）5ml，置4℃冰箱中保存。0NPG溶液為無(wú)色，如出現黃色，則不應再用。
　
　�。�3）方法：從克氏雙糖鐵培養基上取菌，于0.25ml無(wú)菌生理鹽水中制成菌懸液，加入一滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG試劑，水浴20min～3h觀(guān)察結果。
　
　�。�4）結果：菌懸液呈現黃色為陽(yáng)性反應，一般在20～30min內顯色。
　
　�。�5）應用：迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽(yáng)性，而不發(fā)酵乳糖的細菌為陰性。本實(shí)驗主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。
　
　　4.七葉苷水解試驗
　
　�。�1）原理：有的細菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養基中枸櫞酸鐵的二價(jià)鐵離于反應，生成黑色的化合物，使培養基呈黑色。
　
　�。�2）培養基：七葉苷培養基、膽汁七葉苷培養基。
　
　�。�3）方法：將待檢菌接種于七葉苷培養基中，培養后觀(guān)察結果。
　
　�。�4）結果：培養基變?yōu)楹谏珵殛?yáng)性，不變色者為陰性醫學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
　
　�。�5）應用：主要用于D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者陽(yáng)性，后者陰性。也可用于革蘭陰性桿菌及厭氧菌的鑒別。
　
　　5.甲基紅試驗
　
　�。�1）原理：某些細菌在糖代謝過(guò)程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸可進(jìn)一步分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養基的pH降至4.5以下，當加入甲基紅試劑則呈紅色，為甲基紅試驗陽(yáng)性。若細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉化為其他物質(zhì)（如醇、酮、醚、氣體和水等），則培養基的酸度仍在pH6.2以上，故加入甲基紅指示劑呈黃色，是為陰性。
　
　�。�2）培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基。
　
　�。�3）方法：將待檢菌接種于上述培養基中，培養2～4d，于培養基內加入甲基紅試劑，立即觀(guān)察結果。
　
　�。�4）結果：呈現紅色為陽(yáng)性；橘紅色為弱陽(yáng)性；黃色為陰性。
　
　�。�5）應用：主要用于鑒別大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽(yáng)性，后者為陰性。此外腸桿菌科中沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽(yáng)性，而腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性醫學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
　
　　6.V-P試驗
　
　�。�1）原理：某些細菌在糖代謝過(guò)程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環(huán)境中，被空氣中的氧氧化為二乙酰，進(jìn)而與培養基內蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色化合物，則為V-P試驗陽(yáng)性。若培養基中胍基含量較少，則可加入少量含胍基化合物，如肌酸或肌酐等。試驗時(shí)加入a-萘酚可加速此反應。
　
　�。�2）培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基醫學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
　
　�。�3）方法：將待檢菌接種于上述培養基中，于35℃培養48h后加入甲液（6% α-萘酚酒精溶液）和乙液（40% KOH溶液），振搖。
　
　�。�4）結果：在數分鐘內出現紅色為陽(yáng)性；如無(wú)紅色出現且于35℃4h后仍如故者即為陰性。
　
　�。�5）應用：本試驗常與甲基紅試驗一起使用，因為前者陽(yáng)性的細菌，后者通常為陰性。

 

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