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摘 要 進(jìn)行了大扶康、大蒜素、大蒜油注射液抗深部真菌藥效學(xué)的研究，采用沙氏培養基倍比稀釋法觀(guān)察不同接菌量、不同培養時(shí)間對藥物最小抑菌濃度(MIC)、最小殺菌濃度(MBC)的影響.用1×105 cfu//mL的接菌量，測定了大扶康、大蒜素、大蒜油注射液對65株(臨床分離和標準菌株)深部真菌的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90.結果顯示大扶康對白色念珠菌、熱帶念珠菌和新型隱球菌有較好的抑制作用，而對其它真菌無(wú)抑制作用和殺滅作用.大蒜素、大蒜油注射液對所有真菌均有抑、殺作用，說(shuō)明他們具有廣譜抑、殺真菌的作用特點(diǎn).提示：臨床在不明確的嚴重真菌感染時(shí)，可聯(lián)合用藥.
Abstract A study on the pharmacodynetics of diflucan,allitridi,and the garlic oil injection against system fungi was carried out.The influence of fungi concentrations and incubation time on minimal inhibitory concentrations(MICs) and minimal bactericidal concentrations(MBCs)was observed by the double dilution method with sabourand agar.MICs and MBCs of them were determined by inoculation 1×105 cfu/mL for 65 species of fungi (clinic and standerd).Diflucan was effective in vitro against Candida albicans,Candida tropicalis and Cryptococcus neoformans while it was no use for other fungi.Allitridi and the garlic oil injection were effective against all these fungi in experiments.It was noted that when the severe infection was not definite it might increase the therapeutic effect with combination of the two drugs.
Key words Diflucan injection；allitridi injection;garlic oil injection;the minimal inhibitory concentration(MIC);the minimal bactericidal concentration(MBC)
近年來(lái)，隨著(zhù)抗生素的不斷開(kāi)發(fā)和廣泛應用，細菌耐藥性及院內感染不斷上升，真菌發(fā)病率大大增加.大扶康、大蒜素、大蒜油注射液是臨床普遍使用和受歡迎的抗真菌藥，但對深部真菌抑殺效果的廣譜性研究不多〔1〕，特別是對青霉菌、申克氏孢子絲菌等MIC、MBC的研究未見(jiàn)報道.本文就3種藥物對臨床可見(jiàn)6個(gè)屬的8種65株深部真菌的抑菌、殺菌作用進(jìn)行了對比實(shí)驗.
1 實(shí)驗材料
1.1 菌種
白色念珠菌14珠、熱帶念株菌10珠、類(lèi)星形念珠菌4株、新型隱球菌10株、青霉菌10株、毛霉菌4株、煙曲菌3株、申克氏孢子絲菌10株，由南京皮膚病研究所真菌室、沈陽(yáng)軍區總醫院檢驗科提供.
1.2 藥物
大蒜素注射液、大蒜油注射液(沈陽(yáng)軍區總醫院藥劑科)；大扶康注射液9008602(美國輝瑞公司).
1.3 培養基
沙氏瓊脂(SDA)培養基：1%蛋白胨、1%葡萄糖、2.2%瓊脂、0.5%氯化鈉、蒸餾水配制，調整pH為5.0～6.0，高壓滅菌后備用.
2 方法與結果
2.1 真菌接種量的確定
用沙氏瓊脂培養基將大蒜油注射液倍比稀釋為100 μg/mL至3.1 μg/mL 6個(gè)濃度，移入平皿中，從每屬中隨機選取1株，用生理鹽水以鏡檢計數方式配成1×107 cfu/mL、1×106 cfu/mL、1×105 cfu/mL、1×104 cfu/mL 4種濃度的菌懸液，分別接種于含不同藥物梯度的沙氏培養基中.另做不含藥物的培養基，接種菌懸液，作為生長(cháng)菌的空白對照.于
2.2 體外培養時(shí)間-MIC曲線(xiàn)
將大蒜油注射液倍比稀釋為100 μg/mL至3.1 μg/mL 6個(gè)濃度，移入平皿和試管，從每屬中重新隨機選取1株，分別接種105 cfu/mL的菌懸液.同時(shí)做不含藥物的培養基接種菌懸液，作空白對照.于
體外培養時(shí)間-MIC曲線(xiàn)顯示：藥物的MIC，在溫度、接種量相同時(shí)，隨著(zhù)培養時(shí)間的延長(cháng)而增大并趨于穩定.為了得到穩定的MIC，熱帶念珠菌、毛霉菌、煙曲菌至少需培養4 d，新型隱球菌、青霉菌、申克氏孢子絲菌分別需培養5、6、7 d.
Tab.1 The influence of the fungi concentration on MIC(μg/mL)of the garilic oil injection
|
Species |
Fugni concentration/cfu．mL-1 | |||
|
1×107 |
1×106 |
1×105 |
1×104 | |
|
Candida albicans |
12.5 |
6.2 |
6.2 |
3.1 |
|
Cryptococcus neoforman |
50 |
25 |
12.5 |
6.2 |
|
Penicillium |
25 |
12.5 |
12.5 |
3.1 |
|
Mucor |
＞100 |
100 |
100 |
50 |
|
Aspergillus fumigatus |
100 |
50 |
25 |
25 |
|
Sporothrix schenckii |
25 |
12.5 |
6.2 |
3.1 |
2.3 沙氏瓊脂培養基法測定MIC
用沙氏瓊脂培養基以倍比稀釋法將大蒜素、大蒜油、大扶康分別配制成100 μg/mL至0.8 μg/mL的8個(gè)濃度的藥物梯度，移入平皿和試管中，用生理鹽水把各真菌菌株以鏡檢計數方式配成1×105 cfu/mL的菌懸液，熱帶念珠菌、新型隱球菌、申克氏孢子絲菌接種于平皿培養基中；青霉菌、毛霉菌接種于試管斜面培養基中.另做不含藥物的培養基接種菌懸液，作空白對照.樣品于
Tab.2 The MICs(μg/mL) of allitridi,garlic oil and diflucan against pathogenic fungi
|
Species |
Allitridi |
Garilic oil |
Diflucan | ||||||
|
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 |
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 |
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 | |
|
Candida albicans(14) |
3.1～25 |
6.2 |
25 |
3.1～25 |
6.2 |
25 |
0.8～6.2 |
3.1 |
6.2 |
|
Candida tropicalis(10) |
6.2～25 |
12.5 |
25 |
25～50 |
25 |
50 |
25～50 |
25 |
50 |
|
Candida stellatoidea(4) |
25～100 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
100～＞100 |
/ |
/ |
|
Crytococcus neoformans(10) |
12.5～25 |
25 |
25 |
6.2～50 |
25 |
50 |
6.2～50 |
25 |
50 |
|
Penicillium(10) |
6.2～25 |
12.5 |
25 |
6.2～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Mucor(4) |
25～50 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Aspergillus fumigatus(3) |
25～100 |
/ |
/ |
25～50 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Sprothrix schenckii(10) |
6.2～25 |
25 |
25 |
3.1～25 |
25 |
25 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
2.4 沙氏瓊脂培養基法測定MBC
以倍比稀釋法將大蒜素、大蒜油、大扶康三種藥物分別稀釋為100 μg/mL至3.1 μg/mL 6個(gè)濃度，接種濃度為1×105 cfu/mL的菌懸液，同時(shí)做空白對照，置
|
Species |
Allitridi |
Garilic oil |
Diflucan | ||||||
|
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 |
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 |
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 | |
|
Candida albicans(14) |
12.5～50 |
25 |
25 |
12.5～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Candida tropicalis(10) |
25～100 |
25 |
100 |
25～100 |
50 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Candids stellatoidea(4) |
50～100 |
/ |
/ |
50～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Crytococcus neoformans(10) |
25～100 |
50 |
100 |
25～100 |
100 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Penicillium(10) |
25～100 |
50 |
100 |
6.2～100 |
50 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Mucor(4) |
50～＞100 |
/ |
/ |
50～＞100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Aspergillus fumigatus(3) |
50～100 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Sporothrix schenckii(10) |
12.5～50 |
25 |
50 |
6.2～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
3 討論 藥物的MIC、MBC在培養溫度相同時(shí)，與接種菌懸液的濃度、培養時(shí)間有關(guān)，應選擇適當的接菌量和達到準確穩定的MIC、MBC觀(guān)察時(shí)間.
大扶康對白色念珠菌有較強的抑制作用，但對臨床分離的類(lèi)星形念珠菌卻無(wú)作用，說(shuō)明這種菌株對大扶康不敏感，對熱帶念珠菌、新型隱球菌也有較好的抑制作用〔2〕，對其他真菌無(wú)抑制作用，并且MBC＞100 μg/mL.大扶康是通過(guò)影響細胞P450固醇合成酶，破壞真菌細胞膜而抑制真菌的生長(cháng).大蒜素、大蒜油對真菌的作用機理雖尚不清楚，但對本試驗的65株深部真菌都有不同程度的抑制、殺滅作用，說(shuō)明他們具有廣譜的抑真菌和殺真菌作用，為臨床使用大蒜素、大蒜油及制劑提供了依據.大蒜油含有多種有效成分，其中含量較高的為二烯丙基三硫化物( CH2CH —CH2—S—S—S—CH2— CHCH2 )〔5〕，即大蒜素.提示，臨床在不明確何種真菌的嚴重感染情況下，大扶康、大蒜素或大蒜油注射液合用，可發(fā)揮藥物的各自作用特點(diǎn)，得到較好療效.
作者：顏鳴 戴華
作者：沈陽(yáng)軍區總醫院
參考文獻
1 唐整，李榮玲，王端禮，等.5-FC、二性霉素B、大蒜素、中藥對煙曲霉的抑菌試驗.中皮膚科雜志，1986，19(6)：335～336
2 戴自英.實(shí)用抗菌藥物學(xué).上海：上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1992.252～253
3 郎彝江，張光遠.大蒜有效成分的研究.中草藥，1981，12(1)：4～5
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