完善細菌內毒素檢查法淺議

中國藥典1995年版收載了細菌內毒素檢查法，廣大藥學(xué)工作者積極探索該方法用于藥典未收載品種實(shí)行的可行性�，F將有關(guān)資料綜述如下，為推廣和完善細菌內毒素檢查法提供參考。
　　1　藥品種類(lèi)
　　試驗品種以大輸液及抗生素占大多數，生化藥品、中草藥制劑等很少，可能與這些藥品成分復雜，干擾因素多有關(guān)。
　　2　試驗方法
　　以凝膠法占絕大多數，主要原因是凝膠法為藥典收載，方法成熟，操作簡(jiǎn)便，而其它方法由于多種限制，尚未普及應用。
　　2.1　供試品陽(yáng)性對照　黃清泉^〔1〕認為應增加供試品陽(yáng)性對照，即在0.1 ml鱟試劑中加入用供試品溶液制成的2λ標準內毒素溶液。最終結果陰性對照呈陰性，陽(yáng)性對照和供試品陽(yáng)性對照均呈陽(yáng)性，試驗結果方有效。設陽(yáng)性對照是證明在試驗條件下所用鱟試劑的靈敏度符合規定；設陰性對照證明所用檢查用水中檢不出內毒素；設供試品陽(yáng)性對照則是證明試驗條件下供試品溶液不存在抑制因素。
　　2.2　試驗重現性差　同一品種不同實(shí)驗者所得結果不一致。如2 g/L環(huán)丙沙星注射液，杜氏^〔2〕稀釋一倍，胡氏^〔3〕則將樣品1∶6稀釋。張嘉麗^〔4〕認為葡萄糖氯化鈉注射液需1∶1稀釋?zhuān)�伊�?SUP>〔5〕未稀釋。蔡紅^〔6〕發(fā)現在鱟試劑均符合藥典規定前提下，同一品種生產(chǎn)廠(chǎng)家不同結果不同。筆者以為上述問(wèn)題的根源是鱟試劑標準化問(wèn)題。鱟試驗系統工程化^〔7〕(試劑標準化、鱟試驗儀測化、實(shí)驗室標準化、試驗器具優(yōu)化、操作規范化)對于提高該方法的整體應用水平，解決重現性差的問(wèn)題，將起重要作用。
　　2.3　檢品供試液pH值　高國政^〔8〕用動(dòng)態(tài)濁度法研究pH值對細菌內毒素測定的影響，比較TAL(東方鱟試劑)和LAL(美洲鱟試劑)的不同。結果顯示兩種鱟試劑回收曲線(xiàn)都呈現三個(gè)反應高峰，分別為pH5.20，pH7.83/pH6.23和pH10.55。樣品pH值6～8，實(shí)驗結果穩定；pH值≤3或≥12，試驗受到抑制。使用TAL，檢品pH預調在6.5～7.5，使用LAL，檢品pH應預調在6.2±0.1或6.7～7.8。
　　2.4　直接稀釋法^〔9〕　根據稀釋倍數計算出每支樣管需要加入藥品原液及溶解用水的體積(兩者之和為0.2 ml)，準確吸取混合，不必另外稀釋檢品，可以減少中間污染環(huán)節，操作亦簡(jiǎn)便易行。
　　2.5　藥品生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)控標準　侯慶源^〔10〕抽取出現散在熱原反應的生理鹽水，用細菌內毒素檢查法定量考察，發(fā)現內毒素濃度大于0.5 EU/ml(不合格)者占62.5%，而且樣本之間有明顯差異，提示可能與輸液瓶清除熱原效果差異及散在污染因素有關(guān)。

作者：徐紅琳，岳喜同

作者單位：山東省濟寧市第一人民醫院
　　參考文獻
　　1　黃清泉，夏振民.淺談細菌內毒素檢查法中的供試品陽(yáng)性對照.藥物分析雜志，1998，18(5)：353
　　2　陳桑雅.細菌內毒素檢查法在藥品檢驗中的應用進(jìn)展.現代應用藥學(xué)，1997，14(3)：29
　　3　胡漢昆，查仲玲，吳菁.鱟試劑用于乳酸環(huán)丙沙星注射液的細菌內毒素檢測.中國醫院藥學(xué)雜志，1998，18(3)：123
　　4　張嘉麗，王學(xué)年，焦志鐵，等.葡萄糖氯化鈉注射液內毒素檢查的研究.藥物分析雜志，1996，16(4)：262
　　5　伊斯云，張興永，余淑媛.細菌內毒素檢查和熱原檢查聯(lián)用檢驗葡萄糖氯化鈉注射液.中國醫院藥學(xué)雜志，1998，18(3)：125
　　6　蔡紅，王豫蓉，梁平.鱟試劑靈敏度對細菌內毒素限量檢查的影響初探.中國醫院藥學(xué)雜志，1998，18(2)：86
　　7　侯慶源，胡冠時(shí).鱟試驗系統工程化.中國醫院藥學(xué)雜志，1997，17(1)：27
　　8　高國政，顏錦.pH值影響細菌內毒素測定的實(shí)驗室研究.中國藥學(xué)雜志，1998，33(3)：163
　　9　孫淑清，劉玉華.鱟法測熱原供試品的直接稀釋法.中國醫院藥學(xué)雜志，1995，15(2)：92
　　10　侯慶源，趙雁鴻.對生理鹽水的內毒素定量分析考察.中國醫院藥學(xué)雜志，1997，17(9)：410
 

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