葡萄糖氯化鈉注射液細菌內毒素檢查方法的研究

1　實(shí)驗材料

　　細菌內毒素國家標準品(批號981，9000 EU/支，中國藥品生物制品檢定所)，鱟試劑(0.5 EU^．ml^-1，0.1 ml^．支^-1，生產(chǎn)廠(chǎng)：①廈門(mén)鱟試劑廠(chǎng)，批號980622。②湛江海洋生物制品廠(chǎng)，批號980417。③湛江安度斯生物有限公司，批號981111)。葡萄糖氯化鈉注射液(本院制劑室及唐山吉祥藥業(yè)生產(chǎn))，細菌內毒素檢查用水(批號97-1S，10 ml^．支^-1，中國藥品生物制品檢定所)。

2　方法及結果

2.1　鱟試劑靈敏度復核試驗　所用鱟試劑均進(jìn)行靈敏度復核。以細菌內毒素檢查用水將細菌內毒素國家標準品稀釋成不同濃度，按文獻^［1］方法進(jìn)行操作，觀(guān)察結果，計算各鱟試劑靈敏度實(shí)測值(λc)，結果均符合藥典規定。見(jiàn)表1。

表1　三個(gè)不同廠(chǎng)生產(chǎn)的鱟試劑靈敏度復核試驗結果.

注：λ＝0.5 EU^．ml^-1

2.2　細菌內毒素限值的確定　根據藥品細菌內毒素限值L＝K/M^［2］，K為細菌內毒素的致熱閾，為5 EU^.kg^-1.h^-1；M為熱原檢查劑量，葡萄糖氯化鈉注射液為10 ml^.kg^-1.h^-1；計算結果L＝0.5 EU^.ml^-1。
2.3　干擾試驗最大有效稀釋倍數　L值確定后，根據所用鱟試劑的標示靈敏度(λ)確定樣品稀釋倍數。最大有效稀釋倍數MVD＝L/λ，本實(shí)驗采用λ為0.5 EU^.ml^-1的鱟試劑，因此，葡萄糖氯化鈉注射液MVD＝1，即采用原液不必稀釋。
2.4　干擾試驗　用供試品將細菌內毒素國家標準品稀釋成1，0.5，0.25，0.125 EU^.ml^-14個(gè)濃度的溶液，采用3個(gè)不同廠(chǎng)生產(chǎn)的鱟試劑分別進(jìn)行干擾試驗，具體操作步驟按文獻［1］的方法，觀(guān)察結果并計算λc值，按中國藥典規定，若0.5 λ≤λc≤2λ(λ=0.5 EU^.ml^-1)，則證明供試品對BET無(wú)干擾。結果見(jiàn)表2。

表2　葡萄糖氯化鈉注射液干擾試驗

2.5　對照試驗　按照文獻［1］方法對本院制劑室生產(chǎn)的3批葡萄糖氯化鈉注射液進(jìn)行熱原檢查，結果均符合規定。將本院制劑室和唐山吉祥藥業(yè)生產(chǎn)的葡萄糖氯化鈉注射液各3批按文獻方法^［3］分別進(jìn)行細菌內毒素檢查，見(jiàn)表3。

表3　葡萄糖氯化鈉注射液兩種細菌內毒素檢查方法對照試驗結果

注：+—表示陽(yáng)性結果；-—表示陰性結果

3　討　論

　　采用3個(gè)不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的鱟試劑分別進(jìn)行葡萄糖氯化鈉注射液細菌內毒素干擾試驗，從表2可以看到，結果基本一致，其中湛江安度斯生產(chǎn)的鱟試劑干擾試驗結果與靈敏度復核結果完全相同，測得λ_c值均在不干擾范圍之內，故葡萄糖氯化鈉注射液的BET采用其中任一廠(chǎng)生產(chǎn)的鱟試劑均可。本實(shí)驗證實(shí)葡萄糖氯化鈉注射液對BET無(wú)干擾作用，所以，選擇λ=0.5 EU^.ml^-1的鱟試劑直接進(jìn)行BET即可。
　　由表3可知，本院制劑室和唐山吉祥藥業(yè)生產(chǎn)的葡萄糖氯化鈉注射液分別進(jìn)行細菌內毒素檢查，其結果與熱原檢查結果均一致。因此，葡萄糖氯化鈉注射液采用細菌內毒素檢查法替代熱原檢查法是可行的。

作者單位：劉曉紅（唐山063000唐山市工人醫院）　
　　　　　李治田（唐山063000唐山市工人醫院）　
　　　　　王新華（唐山063000唐山市工人醫院）

參考文獻：

［1］中國藥典1995年版.二部.1995：附錄76.
［2］黃清泉，夏振民.藥品細菌內毒素檢查的試驗設計.中國藥學(xué)雜志，1997，32(2)：72.
［3］中國藥典1995年版1998年增補本.1998：142.

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