草莓組織培養

一、草莓的形態(tài)特征和生物學(xué)特性
草莓（Fragaria　spp．）為重要的漿果植物，栽培分布很廣，其總產(chǎn)量在漿果類(lèi)中僅次于葡萄，居世界第二位。草莓果實(shí)柔軟多汁，含豐富的糖、酸、礦物質(zhì)，維生素等。草莓可鮮食，也可加工成果醬，果酒等。其顏色鮮艷，是良好的配餐食品。
草莓繁殖容易，結果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光溫室，使草莓的成熟期大大縮短，從每年的11月份到次年的6月份，都有新鮮草莓上市，填補了水果的淡季市場(chǎng)。
（1）形態(tài)特征　草莓屬多年生草本植物，植株矮小，呈半平臥叢狀生長(cháng)，根系為須根系，在土壤中分布較淺。草莓的莖呈短縮狀，分地上和地下部分，地上短縮莖節間極短，節密集，其上密集輪生葉片，葉腋部位著(zhù)生腋芽。地下短縮莖為多年生，是貯存營(yíng)養物質(zhì)的器官，也可發(fā)育成不定根。匍匐莖是草莓的特殊地上莖，是其營(yíng)養繁殖器官，莖細，節間長(cháng)，一般座果后期發(fā)生。葉屬于基生三出復葉，呈螺旋狀排列，在當年生新莖上總葉柄部與新莖連接部分，有兩片托葉頂端膨大，圓錐形且肉質(zhì)化。離生雄蕊20～35枚。雌蕊離生，呈螺旋狀排列在花托上，數目從60～600不等。花序為二歧聚傘花序至多歧聚傘花序。果實(shí)為假果，主要是花托膨大肉質(zhì)化形成，瘦果以聚合果形式生于花托上。果實(shí)成熟時(shí)果肉紅色，粉紅色或白色。
（2）生物學(xué)特性 　草莓根系在土壤溫度達到2℃時(shí)開(kāi)始活動(dòng)，在10℃時(shí)開(kāi)始形成新根，根系生長(cháng)的最適溫度為15～20℃，秋季溫度降低到7～8℃時(shí)生長(cháng)減弱。春季氣溫達5℃時(shí)植株開(kāi)始萌芽，莖葉開(kāi)始生長(cháng)。草莓是喜光植物，但又比較耐蔭。光照充足，植物生長(cháng)旺盛，葉片顏色深，花芽發(fā)育好，能獲得較高的產(chǎn)量。相反光照不良，植株生長(cháng)勢弱，葉柄及花序柄細。葉片色淺，花朵小，果實(shí)小，著(zhù)色不良。草莓的根系分布較淺，加上植株矮小，而葉片則較大，因此蒸發(fā)量大。在整個(gè)生長(cháng)季節，葉片幾乎都在不斷地進(jìn)行老葉死亡、新葉發(fā)生的過(guò)程，葉片更新頻繁。這些特點(diǎn)，決定了草莓對水分要求較高。但在不同的生長(cháng)發(fā)育時(shí)期，對水分的要求不同。開(kāi)花期土壤的含水量應不低于最大田間持水量的70%。果實(shí)膨大及成熟期土壤含水量應不低于80%，而秋季9、10月份，土壤持水量達60%即可，草莓不耐澇，要求土壤既有充足的水分供應，又要有良好的通氣條件。草莓對土壤適應性強，在各種土壤上都能生長(cháng)。但由于是淺根性作物，要求肥沃、疏松、透水、通氣的中性、微酸性或微堿性土壤。
二、栽培方法 (Cultivation Methods)
在自然條件下，草莓用匍匐莖分株法繁殖,這種方法繁殖系數高，保持了母本的優(yōu)良性狀。在繁殖圃設1m寬行距，50～60cm株距定植，從5月到9月均可繁殖。圃?xún)缺ＷC肥水供應，保持土壤濕潤、疏松，減少結果量。匍匐莖發(fā)生后，將其向母株四周拉開(kāi)，排列均勻，并在偶數節上壓土促發(fā)根系，每條匍匐莖上可形成3～5個(gè)壯實(shí)的子幼苗，待莖苗長(cháng)到3～4片葉時(shí)可以移出，作為定植苗用。移出時(shí)每株小苗靠母株一側的匍匐莖留2cm長(cháng)剪斷，另一側齊根剪斷。起出的苗可進(jìn)行假植，假植寬度以15×15cm為宜，假植深度以根和葉柄分界線(xiàn)埋入土壤1cm為宜，假植后要做好管理工作。
三、　草莓的脫毒苗培養(Culture　of　Disinfected Seedling )
1．熱處理脫毒
將草莓植株在40～41℃溫度下處理4～6周，然后取微莖尖培養。
2．微莖尖脫毒
（1）初代培養　取草莓生長(cháng)健壯的母株或匍匐莖上的頂芽，用自來(lái)水流水沖冼2～4h，然后剝去外層葉片，在無(wú)菌條件下，用0.5%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，并不停地攪動(dòng)促進(jìn)藥液的滲透。在無(wú)菌條件和解剖顯微鏡下剝取莖尖分生組織，以帶有1個(gè)葉原基的莖尖為好。0.2mm的莖尖無(wú)病毒率可達到100%，但接種后的成活率下降，并延長(cháng)培養時(shí)間。莖尖分離后，迅速接入培養基MS+BA0.25+NAA0.25或White+IAA0.1中。培養條件為22～25℃，日照16～18h/d，光強3000Lx。經(jīng)2～3個(gè)月的培養，可生長(cháng)分化出芽叢，一般每簇芽叢含20～30個(gè)小芽為適。注意在低溫和短日照下，莖尖有可能進(jìn)入休眠，所以較高的溫度和充足的光照時(shí)間必須保證。
（2）繼代培養　把芽叢割成芽叢小塊，轉入MS培養基中，令其長(cháng)大，以利分株，待苗長(cháng)大到1～2cm時(shí)，可將芽叢小塊分成單株，再轉入前述的分化培養基中，又會(huì )重復上述過(guò)程，達到擴大繁殖的目的。
（3）生根培養　在培養基中加入NAA 1mg/L或IBA 1mg/L，使發(fā)根整齊，由于草莓地下部分生長(cháng)加快，發(fā)根力較強，也可將具有兩片以上正常葉的新莖從試管中取出進(jìn)行試管外生根。
（4）馴化　用鑷子把草莓苗從試管瓶中取出，洗掉根系附帶的瓊脂培養基。事先備好8×8cm或6×6cm的塑料營(yíng)養缽，內裝等量的腐殖土和河砂。栽前壓實(shí)，澆透水，用竹簽在缽中央打一小孔，將試管苗插入其中，壓實(shí)苗基部周?chē)�基質(zhì)，栽后輕澆薄水，以利幼苗基部和基質(zhì)密合。
栽后的試管苗要培養在濕度較大的空間內，一般加設小拱棚保濕，并經(jīng)常澆水，以增加棚內濕度，以見(jiàn)到塑料薄膜內表面分布均勻的小水珠為宜。約過(guò)7～10d 后。當檢查有一定的根系生出，可逐漸降低濕度和土壤含水量，進(jìn)入正常幼苗的生長(cháng)發(fā)育管理階段。
四、花藥培養 (Pollen Culture)
花藥培養操作簡(jiǎn)單，因經(jīng)愈傷組織途徑，再分化得到的即為無(wú)病毒苗，所以可免去病毒鑒定工作。
1．取材與培養
取花粉發(fā)育單核期的花蕾，置于潔凈培養皿中，內放一層濾紙，滴蒸餾水數滴保濕。將處理放入3～4℃冰箱中低溫保存3～4d。經(jīng)預處理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分鐘，取出放入新配制的飽和漂白粉上清液中消毒10min，用無(wú)菌水沖冼3次。然后在超凈工作臺上剝取花藥，立即接種�；ǚ郯l(fā)育時(shí)期可采用醋酸洋紅壓片簽定，培養基為MS+2.4－D 0.4 +IAA2。去分化階段培養條件為24～26℃，10h/d,1500Lx，20d后可產(chǎn)生乳白色的愈傷組織。
2．植株分化
將誘導出的花藥愈傷組織轉移至1/2 MS基本培養基中，添加GA 0.5，BA 0.5和三十烷醇4mg/L。愈傷組織經(jīng)培養后很快轉綠，以后微帶淡紫紅色，15d后在表面分化出半球形小突起，轉為綠色。20天后分化出幼葉、幼莖，并有不少突起物，以后陸續分化出新梢。 
五、草莓無(wú)病毒苗的鑒定(Identification of Disinfected Seedling)
草莓花藥培養得到的為無(wú)病毒苗，而用生長(cháng)點(diǎn)培養得到的植株，則必須經(jīng)過(guò)病毒鑒定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用于生產(chǎn)。
1．草莓病毒的種類(lèi)
草莓病毒主要有四種，為斑駁病毒，皺葉病毒，脈結病毒和輕型黃邊病毒。斑駁病毒在EMC指示植物上表現不整齊的黃色小斑點(diǎn)；皺葉病毒在指示植物UC—1上產(chǎn)生不整齊的小斑點(diǎn)，以及不整齊的葉脈，葉柄暗褐色；脈結病毒在指示植物EMC上表現小葉向后反轉成風(fēng)車(chē)狀，尖端卷曲，葉脈成帶狀褪綠；輕型黃邊病毒在EMC指示植物產(chǎn)生紅葉，數日即枯。
2．草莓病毒的鑒定方法
因草莓的病毒在通過(guò)汁液接種時(shí)不感染，所以通常采用小葉嫁接法來(lái)進(jìn)行鑒定。
首先從被鑒定的草莓上采集長(cháng)成不久的新葉，除去兩邊的小葉，中央的小葉帶1～1.5cm的葉柄，把它削成楔形作接穗。而指示植物則除去中間的小葉，在葉柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用線(xiàn)把接合部位包扎好。為了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。為保證成活，在二周內，可罩上塑料袋，置于半見(jiàn)光的場(chǎng)所。約經(jīng)兩周時(shí)間，撤去塑料袋。若帶有病毒，嫁接后1～2個(gè)月，在新展開(kāi)的葉、匍匐莖或老葉上會(huì )出現病癥。
六、草莓無(wú)病毒苗的繁殖和利用(Propagation and Utilization)
1．防止蚜蟲(chóng)的危害
草莓無(wú)病毒苗的繁殖重要的是要防止無(wú)病毒苗的再度污染。由于草莓病毒主要是蚜蟲(chóng)傳播的，所以要搞好防蚜蟲(chóng)工作。傳播草莓病毒的主要有草莓莖蚜、桃蚜和棉蚜。其中分布最廣泛的是草莓莖蚜，莖蚜的身體著(zhù)生有釘狀的毛，可以寄生在寄主的全株各個(gè)部位上。草莓病毒通過(guò)蚜蟲(chóng)吸吮汁液而得到傳播，短時(shí)間即可完成。防治時(shí)可使用馬拉松乳劑，氧化樂(lè )果乳劑等接觸殺蟲(chóng)劑，防治期在5～6月和9～10月，特別是9～10月一次，可防止蚜蟲(chóng)的越冬。 
為保證種苗的無(wú)病毒，在原種種苗生產(chǎn)階段，應在隔離網(wǎng)室中進(jìn)行。傳播草莓病毒的蚜蟲(chóng)較小，可以通過(guò)大于1mm網(wǎng)眼，故應采用0.4～0.5mm大小的規格，其中以300號防蟲(chóng)網(wǎng)為好。
2．繁殖程序及提高繁殖率的措施
草莓無(wú)毒苗的繁殖程序可分五步，包括病毒鑒定生產(chǎn)出無(wú)毒苗、原種種苗培養、原種種苗繁殖、良種種苗繁殖，生產(chǎn)用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔離室中進(jìn)行，后一步露地進(jìn)行。為提高無(wú)病毒母株的繁殖株數可采用赤霉素處理和摘蕾的方法。赤霉素處理用5ppm的濃度，每株5ml，在5月上旬和6月上旬分兩次進(jìn)行。摘蕾可減輕母株的營(yíng)養負擔，促使匍匐莖的大量發(fā)生，田間地每一株可繁殖150～200株。
3．生產(chǎn)管理工作
母株必須保證每株有大于3.3m2的營(yíng)養面積。再是注意匍匐莖排列位置，不要交錯重疊，不利采苗，采苗也要適時(shí)進(jìn)行。無(wú)論秋季或春季種植，繁殖床必須要進(jìn)行土壤消毒，小面積可用蒸氣劑料混合消毒，可防治草莓萎縮病、根腐病、萎凋病等的發(fā)生。
隔離繁殖圃通常施緩效性肥料，每公畝用3t肥；為促使匍匐莖發(fā)生，要經(jīng)常灌水。

 

上一篇：培養基成分對彭澤貝母愈傷組織增殖及生物堿含量的影響

下一篇：蘋(píng)果的組織培養