微生物肥料實(shí)驗用培養基技術(shù)條件（附錄）

 

附　錄　A
（規范性附錄）
　常用培養基配方

A.1　營(yíng)養瓊脂

A.1.1　成分

蛋白胨 10.0 g

牛肉膏 3.0 g

氯化鈉(NaCl) 5.0 g

瓊脂 18.0 g

蒸餾水 1000 mL

pH 7.2～7.5

A.1.2　配制要點(diǎn)

將各種成分溶解于蒸餾水內，調節pH，再加瓊脂，加熱溶化后分裝。121℃高壓滅菌30min。

A.1.3　用途

適用于一般細菌培養和保藏。

A.2　芽孢桿菌培養基

A.2.1　成分

蛋白胨 5.0 g

牛肉膏 3.0 g

土壤浸出液 250 mL

蒸餾水 750mL

瓊脂 18.0 g

A.2.2　配制要點(diǎn)

土壤浸取液：土壤50g，加水200mL，121℃滅菌1h，過(guò)濾補水至250mL。

其他同A.1.2

A.2.3　用途

適用于芽孢桿菌的保藏。

A.3　阿須貝氏（Ashby）培養基

A.3.1　成分

磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.2 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2 g

氯化鈉(NaCl)  0.2 g

碳酸鈣(CaCO3) 5.0 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

硫酸鈣(CaSO4·2H2O) 0.1 g

瓊脂 18.0 g

蒸餾水 1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.3.2　配制要點(diǎn)

同A.1.2

A.3.3　用途

用于固氮菌的培養。

A.4　根瘤菌培養基YM

A.4.1　成分

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O) 0.5 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2 g

氯化鈉(NaCl) 0.1 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

酵母膏 1.0 g

0.5%剛果紅溶液 5 mL

瓊脂 18.0 g

蒸餾水 1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.4.2　配制要點(diǎn)

將各種營(yíng)養成分溶解于蒸餾水內，調節pH后，加入剛果紅溶液。再加瓊脂，加熱溶化后分裝。121℃高壓滅菌30min。

A.4.3　用途

適用于根瘤菌的培養。

A.5　根瘤菌培養基= 2 * ROMAN II

A.5.1　成分

酵母粉 1.0 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

土壤浸出液 200 mL

瓊脂 15.0 g

蒸餾水 800 mL

pH 7.2

A.5.2　配制要點(diǎn)

土壤浸出液：土壤50g，加水200mL，121℃滅菌1h，過(guò)濾補水至200mL。

其他同A.1.2

A.5.3　用途

適用于根瘤菌的保藏和培養。

A.6　硅酸鹽細菌培養基

A.6.1　成分

蔗糖（C12H22O11） 5.0 g

磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 2.0 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.5 g

碳酸鈣(CaCO3) 0.1 g

三氯化鐵(FeCl3·6H2O) 0.005 g

瓊脂 18.0 g

蒸餾水 1 000 mL

pH 7.5～8.0

A.6.2　配制要點(diǎn)

先將三氯化鐵配制成5‰的溶液，按量加入，其他同A.1.2

A.6.3　用途

適用于硅酸鹽細菌的培養。

A.7　固氮（莖瘤）根瘤菌培養基

A.7.1　成分

乳酸鈉（C3H5O3Na） 10.0 g

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O) 1.67 g

磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.87 g

氯化鈉(NaCl)  0.05 g

氯化鈣(CaCl2)  0.04 g

三氯化鐵(FeCl3·6H2O) 0.004 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.1 g

酵母膏 1.0 g

瓊脂 18.0g

蒸餾水 1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.7.2　配制要點(diǎn)

先將三氯化鐵配制成4‰的溶液按量加入，其他同A.1.2。

A.7.3　用途

適用于莖瘤根瘤菌的培養。

A.8　馬丁培養基

A.8.1　成分

磷酸二氫鉀(KH2PO4) 1.0 g

葡萄糖(C6H12O6·H2O) 10.0 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.5 g

蛋白胨 5.0 g

1%孟加拉紅水溶液 3.3 mL

氯霉素  0.1 g

瓊脂 18.0 g

蒸餾水 1 000 mL

A.8.2　配制要點(diǎn)

將營(yíng)養成分用蒸餾水溶解后，按量加入1%孟加拉紅水溶液，氯霉素先用少量乙醇溶解后加到培養基中。再加瓊脂，加熱溶化后分裝。115℃高壓滅菌20min。

A.8.3　用途

適用于真菌的培養。

A.9　高氏合成一號瓊脂

A.9.1　成分

硝酸鉀(KNO3) 1.0 g

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O) 0.5 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O)   0.5 g

氯化鈉(NaCl)   0.5 g

硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O) 0.01 g

可溶性淀粉(C6H10O5)n  20.0 g

重鉻酸鉀（K2Cr2O7） 0.1 g

瓊脂 18.0 g

蒸餾水 1 000 mL

pH  7.2～7.4

A.9.2　配制要點(diǎn)

淀粉用少量冷水調成糊狀,加熱溶解后加入。再加瓊脂，加熱溶化后分裝，121℃高壓滅菌30min。重鉻酸鉀配制成溶液?jiǎn)为殰缇�，使用時(shí)再加入到培養基中。

A.9.3　用途

適用于放線(xiàn)菌的培養。

A.10　聯(lián)合固氮菌培養基

A.10.1　成分

D-葡萄糖酸鈉(C6H10NaO7) 5.0 g

磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.4 g

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O) 0.1 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O)  0.2 g

酵母膏  1.0 g

氯化鈉(NaCl)  0.1 g

氯化鈣(CaCl2)  0.02 g

三氯化鐵(FeCl3·6H2O)  0.01 g

鉬酸鈉（Na2MoO4） 0.002 g

瓊脂  18.0 g

蒸餾水  1 000 mL

pH 6.8～7.0

A.10.2　配制要點(diǎn)

將氯化鈣配、鉬酸鈉分別配制成2‰的溶液，按量加入，其他同A.1.2。

A.10.3　用途

適用于固氮螺菌的培養。

A.11　馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基

A.11.1　成分

馬鈴薯  200 g

葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g

瓊脂  18.0 g

蒸餾水   1 000 mL

A.11.2　配制要點(diǎn)

稱(chēng)取去皮馬鈴薯200g切塊，放入水中煮沸30min，然后用雙層紗布過(guò)濾取汁，再加葡萄糖和瓊脂，溶化后補足水至1000mL，115℃滅菌20min。

A.11.3　用途

適用于酵母菌的培養。

A.12　麥芽汁瓊脂

A.12.1　成分

12波林麥芽汁（Brix） 1 000 mL

瓊脂   18.0 g

pH  5.4

A.12.2　配制要點(diǎn)

將麥芽汁調至12波林的糖度，調節pH，加入瓊脂，加熱溶化后分裝。115℃高壓滅菌20min。

A.12.3　用途

適用于酵母菌的培養和保藏。

A.13　乳酸細菌培養基（MRS）

A.13.1　成分

蛋白胨  10.0 g

牛肉膏   10.0 g

酵母膏     5.0 g

檸檬酸氫二銨[(NH4)2C6H6O7]    2.0 g

葡萄糖(C6H12O6·H2O)   20.0 g

吐溫80       1.0 g

乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）  5.0 g

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O)    2.0 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O)     0.58 g

硫酸錳(MnSO4·H2O)   0.25 g

瓊脂       18.0 g

蒸餾水     1 000 mL

pH    6.2～6.6

A.13.2　配制要點(diǎn)

將各種成分溶解于蒸餾水內，調節pH，再加瓊脂，加熱溶化后分裝。121℃高壓滅菌20min。

A.13.3　用途

適用于乳酸菌的培養。

A.14　光合細菌培養基= 1 * ROMAN I

A.14.1　成分

酵母粉     3.0 g

蛋白胨    3.0 g

硫酸鎂(MgSO4·7H2O)   0.5 g

氯化鈣（CaCl2）     0.3 g

蒸餾水  1 000 mL

pH   6.8～7.0

A.14.2　配制要點(diǎn)

同A.1.2。

A.14.3　用途

適用于光合細菌的培養。

A.15　光合細菌培養基= 2 * ROMAN II

A.15.1　成分；

溶液= 1 * ROMAN I

氯化鈣（CaCl2） 75 mg

乙酸鈉（CH3COONa）   1.6 g

煙酸   40 mg

氯化鈉(NaCl)     1.5 g

生物素  40 mg

酵母膏    2.0 g

硫胺素     40 mg

氯化鎂(MgCl2)  200 mg

乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Fe）溶液    5 mL

微量元素溶液    1 mL

蒸餾水     800mL

溶液= 2 * ROMAN II

磷酸二氫鉀(KH2PO4)    600 mg

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O)   1.18 g

蒸餾水      200 mL

將溶液= 1 * ROMAN I、溶液= 2 * ROMAN II分別于121℃高壓滅菌15min，冷卻后將溶液= 1 * ROMAN I、溶液= 2 * ROMAN II混勻。

微量元素溶液：

乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2Na2O8·2H2O）  2.0 g

硼酸（H3BO3）100 mg

氯化鋅（ZnCl2） 100 mg

高鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O）  20 mg

氯化銅（CuCl2）         10 mg

硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)   2.0 g

氯化鈷（CoCl2·6H2O）  100 mg

氯化錳（MnCl2·4H2O） 100 mg

氯化鎳（NiCl2·6H2O）  20 mg

亞硒酸鈉（Na2SeO3） 1 mg

蒸餾水    1 000 mL

乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Fe）溶液:

乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Na2）  20.0 g

硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)   20.0 g

蒸餾水  1 000 mL

A.15.2　配制要點(diǎn)

乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Fe）溶液需要通氣過(guò)夜，維生素類(lèi)物質(zhì)要過(guò)濾除菌后按量加入到培養基中。。

A.15.3　用途

適用于光合細菌的培養。

A.16　乳糖膽鹽發(fā)酵培養基(用于大腸菌群初步發(fā)酵)

A.16.1　成分

蛋白胨  20.0 g

豬膽鹽    5.0 g

乳糖    10.0 g

0.04%溴甲酚紫溶液  25.0 mL

蒸餾水   1 000 mL

pH    7.2～7.4

A.16.2　配制要點(diǎn)

將各種成分溶解于蒸餾水內，調節pH，然后加入溴甲酚紫溶液，分裝到試管中，并放入小倒管。115℃高壓滅菌15min。

A.16.3　用途

用于乳糖發(fā)酵實(shí)驗。

A.17　伊紅美藍瓊脂

A.17.1　成分

蛋白胨  10.0 g

乳糖  10.0 g

磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O)   2.0 g

2%伊紅水溶液   20.0 mL

0.65%美藍水溶液  10.0 mL

瓊脂  20.0 g

蒸餾水  1 000 mL

pH  7..2～7.4

A.17.2　配制要點(diǎn)

將蛋白胨、乳糖、磷酸鹽溶解于蒸餾水內，調節pH，加入瓊脂，加熱溶解，分裝。115℃高壓滅菌15min備用。伊紅和美藍溶液分別在121℃下高壓滅菌20min。使用時(shí)加入已滅菌的伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。

A.17.3　用途

用于大腸菌群的分離培養。

A.18　乳糖發(fā)酵培養基

A.18.1　成分

蛋白胨  20.0 g

乳糖   10.0 g

0.04%溴甲酚紫溶液  25.0 mL

蒸餾水  1 000 mL

pH   7.2～7.4

A.18.2　配制要點(diǎn)

將各種營(yíng)養成分溶解于蒸餾水內，調節pH，然后加入溴甲酚紫溶液，分裝至試管，并放入小倒管。115℃高壓滅菌15min。

A.18.3　用途

用于大腸菌群驗證實(shí)驗。

 

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