微生物肥料實(shí)驗用培養基技術(shù)條件

1　范圍

本標準規定了微生物肥料實(shí)驗室使用的培養基技術(shù)要求。

本標準適用于微生物肥料產(chǎn)品質(zhì)量檢驗、菌種培養與保藏用培養基的制備。

2　規范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

GB/T 19524.1-2004   肥料中糞大腸菌群的測定

NY 527-2002         光合細菌菌劑

3　術(shù)語(yǔ)和定義

培養基 medium

由人工配制的適合微生物生長(cháng)、代謝、繁殖和保存的營(yíng)養基質(zhì)。

4　培養基制備流程圖（略）

5　培養基選用原則

5.1　含有滿(mǎn)足所培養的微生物生長(cháng)必需的營(yíng)養物質(zhì)。

5.2　各種營(yíng)養物質(zhì)要有合適的比例和濃度�！�

5.3　有合適的pH范圍和一定的緩沖pH能力。

5.4　有一定的氧化還原電位和合適的滲透壓。

5.5　對于特殊用途的培養基，除遵循以上原則外，還應滿(mǎn)足以下要求：

5.5.1　在選擇培養基中，應加入利于目的微生物生長(cháng)而抑制其它微生物生長(cháng)的化學(xué)物質(zhì)。

5.5.2　菌種保藏培養基選用原則

5.5.2.1　對于產(chǎn)芽孢或孢子的菌種保藏培養基應以易產(chǎn)生芽孢或孢子為原則。

5.5.2.2　對于自養微生物的菌種保藏培養基應只使用無(wú)機鹽類(lèi)，不使用有機物。

5.5.2.3　對能利用無(wú)機氮源的微生物，其菌種保藏培養基中不宜使用有機氮源。

5.5.2.4　對營(yíng)養缺陷型微生物，其菌種保藏培養基中必須含有該缺陷所需的物質(zhì)。

5.5.2.5　對耐某種藥物的微生物，其菌種保藏培養基中應含有一定濃度的該種藥物。

6　要求

6.1　材料

6.1.1　用于配制培養基的化學(xué)試劑純度至少為化學(xué)純。

6.1.2　試劑出現顏色改變、沉淀、混濁、吸潮結塊的現象時(shí)，不宜使用。

6.1.3　天然原材料應質(zhì)量穩定，未發(fā)生霉變、生蟲(chóng)和變質(zhì)。

6.1.4　瓊脂凝固后應具有良好的透明度。

6.2　器皿

6.2.1　配制試劑所用的器皿應潔凈。

6.2.2　盛裝培養基的器皿應由對微生物無(wú)毒害并耐高溫的材料制成。

6.2.3　材料需加熱溶解時(shí)，可選用玻璃容器、搪瓷缸和不銹鋼容器等，禁用銅制、鋁制和鐵制容器。

6.3　棉塞或硅膠塞

6.3.1　不應使用脫脂棉制作棉塞。

6.3.2　使用棉塞或硅膠塞時(shí)，將其長(cháng)度的2/3塞入容器內。要求松緊適當，緊貼管壁。

6.3.3　滅菌時(shí)，棉塞外要加包牛皮紙或耐高溫透氣塑料薄膜，以防止滅菌時(shí)棉塞受潮或進(jìn)水。

6.4　培養基配制

6.4.1　材料稱(chēng)量

6.4.1.1　根據培養基配方，準確稱(chēng)取相應材料的量。

6.4.1.2　當配方中某種成分微量時(shí)，可預先將該成分配制成一定濃度的母液，然后按量加入。母液須低溫保存。

6.4.2　材料溶解

6.4.2.1　不溶于水的組分應在所需的溶劑中溶解后，再加入到培養基中。

6.4.2.2　非溶性組分，如CaCO3,應最后加入。

6.4.2.3　易形成沉淀的組分應分別溶解。

6.4.2.4　不易溶解的組分應做預處理。加熱溶解過(guò)程中一旦出現焦化現象時(shí)應棄用。

6.4.2.5　培養基中含有指示劑或有顏色的試劑時(shí)，應在培養基pH調節好之后再加入。

6.4.3　pH測定與調節

6.4.3.1　用精密pH試紙或酸度計測定培養基的pH。

6.4.3.2　培養基的pH用稀酸或稀堿溶液調節。調節過(guò)程中不可用酸堿溶液反復調節。

6.4.4　分裝

裝入三角瓶的培養基體積不應超過(guò)其容量的1/2，裝入試管的培養基體積為其容量的1/4～1/5。分裝過(guò)程中防止培養基粘附在瓶口或管口。

6.4.5　滅菌

6.4.5.1　高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌控制的條件為121℃、維持30min。當培養基中含有不耐高溫的組分時(shí)，可采用115℃、維持15min～30min。

6.4.5.2　過(guò)濾除菌

在無(wú)菌條件下，將待除菌溶液經(jīng)濾膜為φ≦0.2μm的細菌過(guò)濾器，達到除菌的目的。適用于易受高溫破壞、失活的物質(zhì)的滅菌，如維生素。

6.4.5.3　干熱滅菌

將待滅菌的器皿，用紙包好或放在特定的容器內，置于烘箱中，在160℃左右保持2h。適用于培養皿等玻璃器皿的滅菌。

6.4.6　平板和斜面的制備

在無(wú)菌條件下把冷卻至45℃左右的培養基倒入無(wú)菌培養皿內，平板厚度范圍控制在3mm～5mm。制備的斜面長(cháng)度不超過(guò)試管長(cháng)度的2/5。

6.5　培養基合格檢驗

6.5.1　檢查固體培養基濕度。培養基冷凝水過(guò)多或干燥出現裂痕時(shí)，均不能使用。

6.5.2　隨機抽取已滅過(guò)菌的培養基放入28℃～30℃培養箱中培養24h～48h，確定無(wú)菌生長(cháng)后方可使用。

6.6　培養基存放

培養基應放在冰箱4℃­～8℃保存。經(jīng)過(guò)存放的培養基使用前應進(jìn)行6.5的合格檢驗，合格后方可使用。

7　微生物肥料常用培養基配方、配制要點(diǎn)和用途

微生物肥料常用培養基配方、配制要點(diǎn)和用途參見(jiàn)附錄A。

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