不同配方培養基對小刺猴頭子實(shí)體多糖含量的影響

【摘要】  目的：考察不同配方培養基對小刺猴頭子實(shí)體多糖含量的影響。方法：選擇木屑、玉米芯以及麥麩皮為主要原料組成3種不同配方。結果：以78%玉米芯為主的配方，小刺猴頭子實(shí)體多糖含量較高，不同配方之間多糖含量比較有顯著(zhù)差異。結論：該結果為進(jìn)一步的制劑開(kāi)發(fā)提供了很好的理論依據。

【關(guān)鍵詞】  小刺猴頭 培養基 多糖 含量

　　小刺猴頭菌Hericium caput-medusae(Bull.expr)pers.系多孔菌目猴頭菌科真菌，具有與猴頭菌相類(lèi)似的藥理作用及臨床功效［1-4］。目前已有以小刺猴頭發(fā)酵浸膏為原料治療慢性胃炎的制劑應用于臨床［5］。我們在以前研究的基礎上，對小刺猴頭子實(shí)體多糖在化學(xué)結構，藥理作用等方面進(jìn)行了系統的研究。結果表明：小刺猴頭子實(shí)體多糖可明顯抑制胃竇及胃體粘膜的萎縮變薄，增加胃蛋白酶消化活性，降低血清胃泌素含量。而對于小刺猴頭菌不同配方培養基對多糖含量的影響則未見(jiàn)報道。為使小刺猴頭子實(shí)體的栽培工作規范化以及質(zhì)量可控，我們對此進(jìn)行了研究分析，現報道如下：

　　1  材料與方法

　　1.1  供試菌種  小刺猴頭79001菌株由本所藥用真菌研究室提供，母種采用PDA培養基，原種用棉籽殼培養基，1200紫外分光光度計，試劑均為分析純。

　　1.2  培養基配方  試驗設3個(gè)培養基配方，各配方原料組成見(jiàn)表1,每個(gè)配方3次平行試驗，含量測定結果用均值±標準差表示，采用組間t檢驗判斷差異的顯著(zhù)性，統計軟件SPSS11.0。

　　表1  不同培養基配方原料組成（略）

　　1.3  栽培方法  選新鮮、無(wú)霉、無(wú)蟲(chóng)的培養基原料，按配方稱(chēng)重，清水浸泡24h，瀝水后加輔料充分拌勻，使含水量為65%-70%，聚丙烯袋裝料，126℃滅菌1.5h，無(wú)菌操作接種，20-24℃下發(fā)菌，定期觀(guān)察菌絲生長(cháng)及污染情況，當菌絲體生長(cháng)到袋料的1/2-2/3時(shí)，移入14-24℃的出菇間，常規管理出菇，子實(shí)體成熟后及時(shí)采收。

　　1.4  多糖含量測定  3.5��二硝基水楊酸比色法［6］

　　1.4.1  對照品溶液的制備  精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品適量，加水制成每ml含1mg的溶液。

　　1.4.2  標準曲線(xiàn)的制備  精密量取葡萄糖對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6ml，分別置于25ml量瓶中，加水補至2.0ml，分別精密加入3.5—二硝基水楊酸試液1.5ml混勻，以2ml蒸餾水和1.5ml 3.5-二硝基水楊酸混合試劑為空白，沸水浴5min,冷卻至室溫，再分別加入21.5ml蒸餾水，搖勻。于520nm波長(cháng)處比色，經(jīng)線(xiàn)性回歸得回歸方程：A=1.0200C-0.0740 (r=0.9999，n=3)。結果顯示含量在0.2mg-1.6mg范圍內線(xiàn)性關(guān)系良好。

　　1.4.3  供試品溶液的制備［7］  取1、2、3號配方小刺猴頭子實(shí)體干燥粉末各10g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，加水100ml，加熱回流提取1h，離心，如此重復提取1次，離心液合并，濃縮后移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取4ml，加乙醇20ml，攪拌，離心，沉淀加水溶解，置50ml量瓶中，稀釋至刻度。

　1.4.4  精密度試驗  取對照品溶液，重復測定5次，RSD為0.15%。

　　1.4.5  穩定性試驗  取供試品溶液，間隔一定時(shí)間，在8h內測定5次，RSD為1.46%,表明供試品溶液在8h內穩定性良好。

　　1.4.6  重現性試驗  取同一批號小刺猴頭子實(shí)體5份，分別制備供試品溶液，測定吸光度，RSD為1.35%，表明樣品重現性良好。

　　1.4.7  加樣回收率試驗  取已知含量的樣品供試液3份，每份精密加入一定量的葡萄糖對照品，依法測定，結果見(jiàn)表2。

　　表2  加樣回收率測定（略）

　　1.5  測定方法

　　1.5.1  總糖的測定  精密吸取供試品溶液2ml置25ml量瓶中，加6N鹽酸8ml，置沸水浴中加熱30min，冷卻至室溫，加一滴酚酞指示劑，用20%氫氧化鈉中和至微紅色，加蒸餾水至刻度，搖勻、過(guò)濾。精密吸取1ml按標準曲線(xiàn)項下方法測定，根據測得的吸光度值，按回歸方程計算含量。

　　1.5.2  還原糖的測定  精密量取供試品溶液5ml置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。精密量取1ml按標準曲線(xiàn)項下方法測定，根據回歸方程計算含量。多糖含量(%)按總糖含量(%)減去還原糖含量(%)計算。

　　2  結果與分析

　　2.1  多糖測定結果  不同配方培養基得到的小刺猴頭子實(shí)體多糖測定結果，見(jiàn)表3。

　　表3  不同配方培養基多糖測定結果（略）

　　注：與1號配方比較**P＜0.01；與3號配方比較△P＜0.05，△△P＜0.01。
    　　
　　以上結果表明，2號配方無(wú)論是從粗多糖重、多糖的百分含量以及多糖重方面與1號和3號相比均差異顯著(zhù)，因此選擇2號配方為小刺猴頭子實(shí)體栽培的基礎配方。此結論尚需在進(jìn)一步的規�；�生產(chǎn)中通過(guò)大樣本來(lái)加以驗證，以便為有關(guān)制劑的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)打下良好基礎。

　　3  討論
    　　
　　以玉米芯為主料的培養基，小刺猴頭菌發(fā)菌快，菌絲潔白、粗壯、濃密，生長(cháng)迅速，子實(shí)體形狀優(yōu)良，生物轉化率高，更重要的是其有效成分多糖含量高�！　�

　　玉米芯富含纖維素，為小刺猴頭菌提供了充足的碳源，且其持水性強，通氣性好，有利于菌絲生長(cháng)，尤其是玉米芯質(zhì)地較為疏松，更利于菌絲體分解、轉化和吸收�！　�

　　玉米芯來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，且此法可消耗大量農副產(chǎn)品，一舉多得。

【參考文獻】
  　�。�1］李 悅,陳 巖.復方猴頭沖劑治療慢性胃炎114例療效分析［J］.山東醫藥,1994,34(9):62.

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　�。�6］張惟杰.糖復合物生化研究技術(shù)［M］.2版.杭州:浙江大學(xué)出版社,1999:10.

　�。�7］國家藥典委員會(huì )編.中華人民共和國藥典［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:57.

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