痢疾桿菌L型致病性研究

錄入時(shí)間:2010-11-22 10:08:20 來(lái)源：CNKI

摘　要：目的　探討痢疾桿菌L型的致病作用。方法　將痢疾桿菌誘導為穩定L型，用灌胃法感染C₅₇BL／6小鼠，觀(guān)察小鼠的發(fā)病情況，并對死亡小鼠行細菌L型分離及組織學(xué)檢查。本試驗共分三組：A組原菌組，B組L型組，C組生理鹽水組。結果　A、B兩組對小鼠均有致病性，以全身中毒癥狀為主，沒(méi)有腹瀉癥狀，B組較A組發(fā)病慢，癥狀輕，組織學(xué)檢查無(wú)明顯差異，兩組均于腸腔中分離出相應菌。結論　痢疾桿菌L型仍有致病性，致病能力較原菌弱。
　　關(guān)鍵詞：痢疾桿菌L型　致病性
　　有關(guān)細菌L型的致病性雖眾說(shuō)不一，但越來(lái)越多的證據表明細菌L型有一定的致病性。目前已經(jīng)動(dòng)物試驗證明的有金葡菌L型、鏈球菌L型、傷寒桿菌L型、結核桿菌L型及鉤體L型等，痢疾桿菌L型變后有無(wú)致病性尚未見(jiàn)報道。本文將痢疾桿菌及其L型人工感染C₅₇BL／6小鼠，觀(guān)察其對動(dòng)物的致病作用，現將結果報告如下。
　　1　材料與方法
　　1.1　菌種　痢疾桿菌D₁₅由福建醫科大學(xué)提供，D₁₅為帶有R質(zhì)粒，有菌毛的菌株。D₁₅L型系本室用平板紙片法（每片含氨芐青霉素500μg）誘導而獲得的穩定株。實(shí)驗用菌液濃度為10億／ml。
　　1.2　培養基　中國藍平板及本室研制的腸道桿菌L型平板。
　　1.3　實(shí)驗動(dòng)物及分組　C₅₇BL／6小鼠由安徽醫大實(shí)驗動(dòng)物科提供。取8周齡20～25g健康小鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組：A組10只，感染細菌組，B組10只感染細菌L型組，C組10只為鹽水對照組。
　　1.4　動(dòng)物接種　采用灌胃法。A組每只每次灌入痢疾桿菌菌液0.5ml，B組每只每次灌入痢疾桿菌L型0.5ml，C組每只每次灌入生理鹽水0.5ml。
　　1.5　實(shí)驗觀(guān)察　感染后觀(guān)察各組動(dòng)物的發(fā)病情況，死亡后觀(guān)察腸道病變，細菌及細菌L型分離，重要器官如腸、心、肝、腦、肺、腎、膽囊的病理學(xué)檢查。
　　2　結果
　　2.1　大體觀(guān)察　A、B兩組于灌胃24h后相繼出現精神不振、聳毛、畏縮、不食等癥狀，B組癥狀較A組出現稍晚，癥狀較輕，但兩組均未出現腹瀉癥狀。此后實(shí)驗組小鼠相繼死亡，至第10天全部處死，對照組無(wú)一發(fā)病及死亡，A、B兩組小鼠死亡時(shí)間見(jiàn)表1。
　　小鼠死亡后即于無(wú)菌條件下解剖，觀(guān)察重要組織器官病變，A、B兩組均見(jiàn)有明顯的腸充血、水腫、積液，其中A組2例見(jiàn)有肺充血，B組1例肺充血，2例肝充血、腫大。
　　2.2　病原學(xué)檢查　無(wú)菌取死亡小鼠的腸液行痢疾桿菌及其細菌L型培養，結果見(jiàn)表2。
表1　A、B兩組不同時(shí)間死亡的小鼠數
　　table 1　Numeber of mice died during course of infection

組別	n	第2天	第3天	第4天	第6天	第9天	第10天^*
groups		2nd d	3rd d	4th d	6th d	9th d	10th d
A	10	2	0	0	1	2	5
B	10	0	1	1	0	0	8
合計	20	2	1	1	1	2	13

　　* 第10天為被處死鼠的只數
　　The number of mice to be killed on the 10th day
表2　A、B兩組小鼠細菌檢測結果
　　table 2　The results of bacteria detection in A、B groups mice

組別	n	細菌培養陽(yáng)性	L型培養陽(yáng)性
groups		the positive of bacteria culture	The positive of bacteria L－form culture
A	10	6	4
B	10	3	7
合計	20	9	11

　　2.3　組織學(xué)檢查　取死亡小鼠的心、肝、腦、肺、腎、腸、膽囊組織切片病理檢查，心、腦、肺、腎未見(jiàn)明顯的病理學(xué)改變，其中A組2例、B組3例肝細胞出現不同程度的壞死，B組1例見(jiàn)有膽囊上皮細胞瘤樣增生（見(jiàn)封三，圖1），A、B兩組腸切片均見(jiàn)有粘膜下間質(zhì)性炎，有淋巴細胞、單核細胞浸潤及粘膜下淋巴濾泡形成（見(jiàn)封三，圖2）。
李鳳云等：痢疾桿菌Ｌ型致病性研究
　　li Fenyan et al. Study on pathogenicity of Shigella dysenteriac L-forms
　　3　討論
　　3.1　痢疾是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，治療不當�？赊D為慢性，慢性菌痢可能與痢疾桿菌在藥物等因素作用下轉為L型有關(guān)。一般認為細菌L型有一定致病性，但致病性較弱，可引起慢性反復發(fā)作性感染，其急性發(fā)作可能與L型菌回復為原菌有關(guān)。本文將痢疾桿菌與痢疾桿菌L型等量分別感染小鼠，雖未見(jiàn)小鼠出現腹瀉，但有精神萎靡、食欲不振等癥狀出現，說(shuō)明痢疾桿菌及其L型對小鼠均有一定的致病作用，以全身中毒癥狀為主。發(fā)病后兩組小鼠均相繼死亡，A組于感染后第2天即死亡2只，第6天死亡1只，第9天死亡2只，而B組則于感染后第3天死亡1只，第4天死亡1只，其余8只于第10天處死，從死亡時(shí)間及死亡小鼠數量上看，A組小鼠死亡較快較多，說(shuō)明細菌型較L型毒力大。
　　3.2　細菌變?yōu)?SPAN lang=EN-US>L型后，許多性狀亦發(fā)生改變，如形態(tài)、染色、生化反應、培養特性等均與原菌不同。至于L型菌致病因素有無(wú)改變則尚有爭議，有認為L型菌仍產(chǎn)毒，但產(chǎn)毒量較原菌少，且毒力弱，亦有認為細菌變?yōu)?SPAN lang=EN-US>L型后失去產(chǎn)毒能力^［1］。痢疾桿菌為革蘭氏陰性菌，主要靠?jì)榷舅刂虏�，而內毒素存在于細胞壁中，細菌變�(yōu)?SPAN lang=EN-US>L型后細胞壁不同程度的缺損或丟失，內毒素量會(huì )相應減少，本組資料亦證實(shí)這一點(diǎn)，即L型感染組較細菌感染組小鼠的發(fā)病較慢，死亡時(shí)間較長(cháng)，死亡只數較少。
　　3.3　痢疾桿菌在腸道的致病主要依靠菌毛對粘膜上皮細胞的粘附，繼而穿入粘膜上皮細胞內及粘膜固有層內繁殖而引起炎癥^［2］。本文兩組感染后小鼠均見(jiàn)有明顯的腸充血、水腫、積液，細菌組充血水腫更劇烈，鹽水對照組無(wú)此現象。從A、B兩組腸壁中均查出痢疾桿菌及L型，A組中有4只分出L型，可能為細菌在體內免疫因素作用下轉變?yōu)?SPAN lang=EN-US>L型，B組中有3只分出細菌型，則可能為部分復原菌。
　　3.4　痢疾桿菌浸入血流者罕見(jiàn)，本文兩組小鼠于感染后雖出現全身癥狀，但從心、肝、脾、肺、腎、腦等組織中均未分離到該菌，說(shuō)明細菌及其L型變后，侵襲力均低。至于肉眼所見(jiàn)的肝、肺充血現象應為內毒素所致。
　　3.5　有關(guān)細菌L型與腫瘤的關(guān)系已見(jiàn)有不少報道^［3～5］，認為細菌變?yōu)?SPAN lang=EN-US>L型后失去細胞壁的與無(wú)壁病毒相似，可進(jìn)入細胞，與細胞DNA整合后導致細胞癌變，腫瘤的發(fā)病機制十分復雜，可能是多因素的共同作用，其中感染，尤其是慢性感染可能是一個(gè)誘發(fā)細胞癌變的因素。本文L型感染組發(fā)生膽囊上皮細胞瘤樣增生1例，細菌組及對照組無(wú)，因例數少，且無(wú)有力的證據，目前尚不能得出痢疾桿菌L型有致瘤作用的結論，此問(wèn)題有待今后進(jìn)一步深入研究。
　　　參考文獻
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