丁酸梭菌活菌制劑對腸道菌群影響的研究

錄入時(shí)間:2010-11-22 10:01:38 來(lái)源：維普資訊

摘要　通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗和人體試食試驗，對丁酸梭菌活菌制劑一泰平片對腸道菌群的影響進(jìn)行了研究。結果表明：受試對象腸道內的雙歧桿菌的數量增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)，乳桿菌的數量增加，差異有顯著(zhù)性(p≤0.05)。說(shuō)明丁酸梭菌活菌制劑一泰平片具有一定的增殖腸道內有益菌和抑制有害菌的作用。
　　關(guān)鍵詞：丁酸梭菌　腸道菌群
　　丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是1933年由日本的宮入近治博士首先發(fā)現并報告的。其活菌制劑作為整腸劑在日本使用已有50年。我們對丁酸梭菌活菌制劑一泰平片對小鼠及人的腸道菌群的影響進(jìn)行了實(shí)驗研究。
　　1　材料與方法
　　1.1　樣品　由深圳醫藥保健品進(jìn)出口有限公司金華分公司提供的泰平片，經(jīng)測定每片含丁酸梭菌活菌數為0.4×10⁵CFU／g。
　　1.2　實(shí)驗動(dòng)物　由中國藥品生物制品檢定所實(shí)驗動(dòng)物中心提供的健康成年雄性BALB／c小鼠40只(批準號：京動(dòng)管制字1994經(jīng)081號)，體重18g～22g。
　　1.3　受試人群　1個(gè)月內未患過(guò)胃腸疾病、未服用過(guò)抗生素類(lèi)藥物、未服用過(guò)微生態(tài)制劑；血液、尿、便常規檢查及肝功能檢查，心率、血壓、心電圖、B超(肝、膽、脾、腎)檢查，指標全部正常的30名志愿者，年齡25歲～60歲，男女各半。
　　1.4　實(shí)驗方法
　　1.4.1　樣品中丁酸梭菌活菌計數　無(wú)菌稱(chēng)取25g樣品，加入225ml無(wú)菌生理鹽水中混勻，10倍稀釋。選擇合適的稀釋度，接種于TPY培養基。37℃48h～78h，厭氧培養，計數丁酸梭菌。
　　1.4.2　腸道菌群檢驗方法　雙歧桿菌：BBL培養基，37℃48h～72h厭氧培養；乳桿菌：LBs培養基，37℃48h培養；腸桿菌：EMB培養基，37℃24h培養；腸球菌：疊氮鈉-結晶紫-七葉苷培養基，37℃24h培養；擬桿菌：Bd培養基，37℃48h厭氧培養；產(chǎn)氣莢膜梭菌：TSC培養基，37℃24h厭氧培養；丁酸梭菌：TPY培養基，37℃48h厭氧培養。樣品稀釋液：自制。
　　1.4.3　動(dòng)物試驗　泰平片人體推薦量為每人每日3片，即每人0.9g／60kg·b.w,相當于0.015g/kg·b.w，小鼠等效劑量為人體推薦量的10倍，即每日0.15kg·b.w(中劑量)，上、下各設一個(gè)劑量組：0.45g／kg·b.w(高劑量)和0.075g/kg·b.w(低劑量)。選用40只雄性小鼠隨機分成4組，每組10只，其中1組為正常對照組，對滅菌稀釋液灌胃，灌胃量按0.2ml／10g·b.w計算，其余3組以泰平片混懸液灌胃，每日1次，連續7天，于給受試物最后一次24h后，無(wú)菌采取小鼠糞便0.1g～0.4g，置已稱(chēng)重的帶玻璃珠的干燥滅菌小試管中，再稱(chēng)重，計算出小鼠糞便重量，并加滅菌稀釋液，稀釋10倍，振蕩1分鐘，再依次10倍系列稀釋?zhuān)x擇合適的稀釋度，分別接種在各選擇性培養基上。
　　1.4.4　人體試食試驗　實(shí)驗采用自身對照。試食受試物前，收集受試者新鮮糞便于便盒中，立即送檢。定量稱(chēng)取標本，10倍稀釋并勻漿后，分別接種至各選擇性培養基，檢驗腸道菌群。受試者每日服用泰平片3片(每片重0.3g，相當于每日服用丁酸梭菌1.2×10⁵CFU)，連續10d。于給受試物最后一次24h后，再收集受試者新鮮糞便，檢驗腸道菌群。
　　2　結　果
　　2.1　泰平片中丁酸梭菌活菌計數結果見(jiàn)表1。
表1　泰平片中丁酸梭菌活菌計數(接種量為0.1ml)

稀釋度	平板1	平板2	平均數	結果 (CFU/g)
10^-3	14	10	12	1.2×10⁵
10^-4	1	2	1.5	1.5×10⁵

　　由表1可知，泰平片含丁酸梭菌活菌數為1.2×10⁵CFU/g。
　　2.2　泰平片對BALB／c小鼠體重的影響見(jiàn)表2。表2　試驗前后各組小鼠的體重及增長(cháng)值

組別	動(dòng)物數　　(只)	試驗前	試驗后	增長(cháng)值　　(g)
組別	動(dòng)物數　　(只)	體重(g)	體重(g)	增長(cháng)值　　(g)
陰性對照組	10	17.74±0.42	21.63±0.38	3.89±0.70
低劑量組	10	17.96±0.28	21.65±0.55	3.69±0.49
中劑量組	10	17.91±0.33	21.80±0.89	3.89±0.86
高劑量組	10	18.05±0.40	21.77±0.61	3.72±0.72

　　由表2可知，經(jīng)統計學(xué)處理，小鼠的初始體重在低、中、高劑量組和對照組間比較，差異無(wú)顯著(zhù)性(p≥0.05)。經(jīng)口給予小鼠不同劑量的受試物7天后，小鼠的體重增長(cháng)值在低、中、高劑量組和對照組間比較，差異無(wú)顯著(zhù)性(p≥0.05)，即泰平片對小鼠的體重增長(cháng)無(wú)影響。
　　2.3　泰平片對BALB／c小鼠腸道菌群調節的作用結果見(jiàn)表3。表3　泰平片對小鼠腸道菌群的影響(logcfu,x±SD,n=10)

細菌	正常對照組		低劑量組		中劑量組		高劑量組
細菌	灌服前	灌服后	灌服前	灌服后	灌服前	灌服后	灌服前	灌服后
腸桿菌	3.58±1.54	2.80±1.24	2.84±1.28	2.24±0.73	4.35±1.62	3.28±1.50	3.56±1.56	2.58±1.17
腸球菌	4.94±0.74	4.90±0.33	5.04±0.58	5.51±0.74	5.24±1.25	5.59±1.26	4.91±0.48	5.80±1.25^**
雙歧桿菌	8.47±0.51	8.78±0.33	8.85±0.35	9.26±0.51^△	8.83±0.51	9.26±0.60^△	8.71±0.30	9.42±0.50^**△△
乳桿菌	7.39±1.04	8.25±0.65	6.87±0.79	8.55±0.73^**	7.70±1.18	8.93±0.34^**△△	7.60±1.06	8.90±0.44^**△

　　 *與灌服受試物前比較(自身對照)　p≤0.05　△與正常對照組(灌服稀釋液后)比較p≤0.05
　　**與灌服受試物前比較(自身對照)　p≤0.01　△△與正常對照組(灌服稀釋液后)比較p≤0.01　　由表3可知，正常對照組灌服樣品稀釋液前后，小鼠腸道菌群數量無(wú)明顯變化，差異無(wú)顯著(zhù)性(p≥0.05)。經(jīng)口給予小鼠受試物后，小鼠腸道內的腸桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌數量發(fā)生改變。低劑量組與灌服受試物前比較，乳桿菌的數量明顯增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)；中劑量組與灌服受試物前比較，乳桿菌的數量明顯增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)，高劑量組與灌服受試物前比較，雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌的數量明顯增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)。
　　低劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數量明顯增加，差異有顯著(zhù)性(p≤0.05)；中劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數量明顯增加，差異有顯著(zhù)性(p≤0.05)，乳桿菌的數量明顯增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)；高劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數量明顯增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)，乳桿菌的數量明顯增加，差異有顯著(zhù)性(p≤0.01)。
　　2.4　泰平片對人體腸道菌群調節的作用結果見(jiàn)表4。
表4　泰平片對人體腸道菌群的影響(logcfu,x±SD，n=30)

	腸桿菌	腸球菌	擬桿菌	產(chǎn)氣莢膜梭菌	雙歧桿菌	乳桿菌	丁酸梭菌
服用前	6.75±1.13	5.35±1.13	8.25±1.64	1.94±1.19	8.21±0.96	6.97±0.98	＜3
服用后	7.00±0.92	5.56±1.78	9.78±0.58^**	1.96±1.25	9.75±0.47^**	8.45±0.68^**	4.97±0.38

　　 *服用受試物后與服用受試物前比較　p≤0.05，**服用受試物后與服用受試物前比較 p≤0.01　　由表4可知，受試人群服用泰平片，腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數量差異無(wú)顯著(zhù)性(p≥0.05)，雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌的數量明顯增加，差異有極顯著(zhù)性(p≤0.01)。服用前，取糞便標本10^-2稀釋液0.1mL接種于TPY培養基，均未檢出丁酸梭菌，服用后，全部糞便標本均檢出丁酸梭菌。說(shuō)明受試人群腸道內菌群發(fā)生了有益的變化。
　　2.4　受試者自覺(jué)癥狀觀(guān)察　服用泰平片后，部分受試者有排氣增多的現象，部分受試者的排便狀況有所改善，未見(jiàn)有不良反應。
　　3　討　論
　　丁酸梭菌是革蘭陽(yáng)性厭氧芽孢菌，在人體腸道內是非常住菌，其芽孢對外界不利因素的抵抗力較強，由丁酸梭菌芽孢制成的微生態(tài)制劑耐貯存。日本對丁酸梭菌的生物學(xué)特性、生理功能做過(guò)大量的研究。將其作為微生態(tài)調節劑使用已有50年。泰平片是含有丁酸梭菌活菌的微生態(tài)制劑，給小鼠灌服后，腸道內雙歧桿菌和乳桿菌的數量明顯增加。同樣在人體試食試驗中，每日服用3片泰平片后，腸道菌群發(fā)生了有益的變化：糞便中的有益菌雙歧桿菌和乳桿菌的數量明顯增加，腸球菌、腸桿菌以及有害菌產(chǎn)氣莢膜梭菌的數量無(wú)明顯變化。

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