雙歧桿菌及靈芝孢子對胃腸菌群失調的預防

【關(guān)鍵詞】  胃腸疾��； 細菌，厭氧； 靈芝； 小鼠； 腸道菌群失調； 雙歧桿菌； 靈芝孢子

　�。�Abstract］ Objective: To investigate the preventive effects of bifidobacterium, Ganoderma lucidium spore and their combination in alteration of intestinal flora of mouse. Methods: Mice were given orally with bifidobacterium, Ganoderma spore or combination of the both for 7 days. Then, intragastric administration was carried out with lincomycin to the mice for other 7 days. The microbe colonies obtained from the rectum shaped stool were counted. Result：1. Colony numbers of aerobian and anaerobian in experimental groups were bigger than those in intestinal flora disorder group （P<0.01）; 2. Aerobian colony numbers in high dosage bifidobacterium group did not differ from that of control group（P>0.05）; 3. Anaerobian colony number in high dosage of G.lucidium spore group did not differ from that of control group（P>0.05）; Aerobian colony numbers in middle and low dosage of G.lucidium spore groups did not differ from that of control group（P>0.05）; 4. Anaerobian colony number in high dosage of combination group did not differ from that of control group（P>0.05）.Conclusion: bifidobacterium,G. lucidium spore and their combination have preventive effects on alteration of intestinal flora in mouse.

　�。�Key words］ gastrointestinal diseases; bacteria,anaerobic; ganoderma lucidum; mice; alteration of intestinal flora; bifidobacterium; Ganoderma spore

　　腸道菌群是由種類(lèi)繁多的大量微生物組成的復雜的生態(tài)系統，與宿主的生長(cháng)、發(fā)育、物質(zhì)代謝和衰老等有密切關(guān)系。目前，臨床上有許多因素可以導致菌群失調，抗生素的不合理使用就是其中之一。長(cháng)期大量使用廣譜抗生素不僅能抑制或殺死致病菌，而且也能作用于對抗生素敏感的正常菌群［1,2］。目前，微生態(tài)制劑在預防治療急慢性感染性腹瀉、抗生素相關(guān)性腹瀉、腸易激綜合征、根除幽門(mén)螺旋桿菌輔助治療等療效較為肯定［3］。2006年8月～ 2007年6月對雙歧桿菌、靈芝孢子及聯(lián)合制劑預防菌群失調作用效果進(jìn)行了研究，報告如下。

　　1  材料與方法

　　1.1  主要試劑全破壁純赤靈芝孢子膠囊0.3 g/顆，雙歧桿菌膠囊0.3 g/顆，香港盈康科技控股國際有限公司生產(chǎn)。鹽酸林可霉素注射液0.6 g（2 ml），福建省福清藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

　　1.2  實(shí)驗動(dòng)物昆明種清潔級小白鼠，體重（20±2）g，由貴州省實(shí)驗動(dòng)物中心提供。

　　1.3  實(shí)驗設備恒溫培養溫箱，厭氧箱，超凈工作臺,營(yíng)養肉湯培養基，MRS培養基。

　　1.４  方法

　　1.4.1  動(dòng)物分組及給藥 

　　取昆明種清潔級小鼠110只，隨機分為靈芝預防高、中、低劑量組；雙歧預防高、中、低劑量組；聯(lián)合預防高、中、低劑量組及正常對照組、菌群失調組。每組10只，雌雄各半。藥物處理及給藥：靈芝預防組給予靈芝孢子粉，用無(wú)菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625 g·ｋｇ-1·d-1。雙歧預防組給予雙歧桿菌活菌制劑，用無(wú)菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為7.5、3.75、1.875 g·ｋｇ-1·d-1。聯(lián)合預防組給予靈芝孢子粉及雙歧桿菌活菌制劑，用無(wú)菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為5、2.5、1.25 g·ｋｇ^-1·d^-1。連續給藥7 d。除正常對照組外，給予其余各組鹽酸林可霉素注射液500 mg·ｋｇ^-1·d^-1,連續灌胃7 d。于停藥第15天，分別進(jìn)行檢測。

　　1.4.2  動(dòng)物處理及標本采集 

　　頸椎脫臼處死小鼠，無(wú)菌試管提前稱(chēng)重并編好序號。取直腸成型糞便3份,置無(wú)菌試管內封口、稱(chēng)重（總重量減空試管重量即糞便重量）后,每管按10 %稀釋度加入適量NS充分混勻,10-1～10-9連續10倍倍比稀釋,每稀釋度取0.01 ml,依次接種于MRS培養基及肉湯培養基表面，MRS培養基置于厭氧培養箱培養。按細菌活菌計數方法選擇10-5、10-6、10-7有氧培養平板,10-6、10-7、10-8厭氧培養平板計數［4］。

　　1.5  統計學(xué)處理

　　菌落記數結果取lg對數,以x ±s表示。數據分析采用SPSS11.1統計軟件包，配對t檢驗。

　　2  結果

　　2.1  菌群定量分析結果

　　正常菌群組與菌群失調組菌群定量分析結果見(jiàn)表1。由表１可以看出經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃7 d后，菌群失調組需氧及厭氧培養菌落記數均明顯少于正常對照組（P＜0.01）。觀(guān)察發(fā)現菌群失調小鼠排稀便，多精神不振，毛發(fā)有不同程度黏濕，說(shuō)明模型小鼠腸道內微生物種群平衡遭到明顯破壞,出現菌群失調癥。表1  正常對照組與菌群失調組菌群數（略）
　　2.2  靈芝預防組菌群定量檢測見(jiàn)表2。由表2 可以看出各劑量預防組不同程度的預防了由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01）。但靈芝對需氧菌的預防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預防效果隨劑量增大而增大，具體原因有待進(jìn)一步研究。中、低劑量組需氧菌較正常對照組無(wú)統計學(xué)差異（P＞0.05），高劑量組厭氧菌較正常對照組無(wú)統計學(xué)差異（P＞0.05），說(shuō)明服用靈芝孢子能預防菌群失調導致的細菌數量減少。
2.3  雙歧桿菌預防組菌群定量檢測見(jiàn)表3。由表3 可以看出不同劑量的雙歧桿菌制劑不同程度的預防了由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜ 0.01）。對需氧菌的預防效果隨劑量增加而增大，高劑量組需氧菌較正常組無(wú)統計學(xué)差異（P＞0.05），說(shuō)明服用雙歧桿菌制劑能預防菌群失調導致的細菌數量減少。表2  靈芝預防組菌群定量檢測（略）

　　2.4  聯(lián)合制劑預防組菌群定量檢測見(jiàn)表4。不同劑量的聯(lián)合制劑不同程度的預防了由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01），預防效果隨劑量增大而增大。聯(lián)合高劑量組厭氧菌落數與正常對照組比較差異無(wú)顯著(zhù)性（P＞0.05）。表3  雙歧桿菌預防組菌群定量檢測（略）表4  聯(lián)合預防組菌群定量檢測（略） 

　　3  討論　　

　　在正常人和動(dòng)物腸道內各菌群間按一定比例組合，互相制約，互相依存，在質(zhì)和量上形成一定的生態(tài)平衡。若機體的內外環(huán)境發(fā)生某些變化，導致細菌繁殖顯著(zhù)超過(guò)正常值的40%以上，則引起腸道食物的分解紊亂，進(jìn)而出現腸菌群失調癥狀，臨床上表現為急性或慢性腹瀉。保護正常菌群的生態(tài)環(huán)境，提高機體免疫力能有效的防治菌群失調［1］。靈芝孢子是靈芝生長(cháng)成熟期從菌蓋彈射出來(lái)極其細小的孢子，為靈芝的生殖細胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)，可以提高小鼠細胞免疫和體液免疫水平，增強巨噬細胞吞噬功能以及體內抗體的產(chǎn)生［5～7］。本實(shí)驗發(fā)現，靈芝孢子能預防由林可霉素造成的菌群數量減少（P＜0.01），但靈芝對需氧菌的預防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預防效果隨劑量增大而增大。提示，靈芝孢子可能具有一定的預防菌群失調作用�！　�

　　腸道微生態(tài)平衡的維持還依賴(lài)于腸道優(yōu)勢菌雙歧桿菌的作用。雙歧桿菌是非致病性的、能抵抗胃酸和腸道酶類(lèi)消化、能附著(zhù)于小腸上皮并能調節黏膜免疫反應的微生物。雙歧桿菌的細胞壁可以粘附于腸黏膜上皮細胞阻止致病菌的入侵，同時(shí)通過(guò)多種方式抑制有害菌的生長(cháng)［8］。目前認為雙歧桿菌通過(guò)代謝產(chǎn)生大量的乳酸和乙酸,降低腸道的pH及Eh值, 改善局部微環(huán)境, 促進(jìn)腸菌群失調的恢復［9］。某些雙歧桿菌合成的小分子量親脂分子具有明顯的抗菌活性，可以抑制細菌進(jìn)入細胞內，甚至殺滅細胞內的細菌［10］。本實(shí)驗中，雙歧桿菌對需氧菌群失調的預防作用隨劑量增大而提高，且高劑量預防組需氧菌群數較正常對照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）；對厭氧菌群失調的預防作用未觀(guān)察到明顯劑量依賴(lài)關(guān)系，提示雙歧桿菌可能對腸道需氧菌群失調的預防作用強于對厭氧菌群失調的預防作用。將兩藥合用發(fā)現，無(wú)論對需氧菌群和厭氧菌群的菌落數都隨劑量增大而增大，聯(lián)合高劑量組厭氧菌落數與正常組差異無(wú)顯著(zhù)性（P＜0.05）�！　�

　　綜上所述,本研究證實(shí)，赤靈芝孢子和雙歧桿菌是一種較為有效的預防菌群失調劑,聯(lián)合使用效果優(yōu)于單獨使用，但無(wú)統計學(xué)意義。其在糾正腸道菌群失調過(guò)程中的具體療效及功能成分,需要進(jìn)一步研究。4 

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