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    包裝飲用水中糞便性鏈球菌之檢驗



    錄入時(shí)間:2010-11-19 9:49:23 來(lái)源:百度

         本檢驗方法適用于包裝飲用水(包括已包裝礦泉水)中糞便性鏈球菌(Fecal Streptococci)之檢驗。

    器具及材料:

    1、干熱滅菌器:玻璃用具等之滅菌用,其內部中心溫度能達170℃以上,并維持

         該溫度1小時(shí)以上者。


    2
    、高壓滅菌釜:培養基及稀釋液等不能干熱滅菌之材料及用具等之滅菌用,

         常以121℃( 15 1b/in2,1kg/cm2或一大氣壓)滅菌15分鐘以上。


    3
    、培養皿:內徑50mm85mm,深度約為12mm14mm,內外面應平坦,

          無(wú)氣泡,刮傷或其它缺點(diǎn)                            

    4、吸管:通常使用者為10ml1ml,應有0.1 ml之刻度!

    5、培養箱:能維持內部溫差在±1℃以?xún)日摺?SPAN lang=EN-US>

    6、水。耗芫S持水溫溫差在±1.℃以?xún)日摺?SPAN lang=EN-US>


    7
    、薄膜過(guò)濾裝置:可放置薄膜過(guò)濾之漏斗及真空固定支架基座,漏斗應具無(wú)菌性

           或可滅菌性。


    8
    、濾膜孔徑0.45um化纖維過(guò)濾薄膜(水質(zhì)檢驗用有格子,已滅菌)或同極品,

           適用于薄膜過(guò)濾裝置者。
     

    培養基:

     1.KF鏈球菌洋菜培養基(KF Streptococcus agar              

    蛋白(Proteose peptone 10g
    酵母抽出物(Yeast extract 10g
    氯化鈉(NaCl 5g
    三偶氮鈉(Sodium azide NaN3 0.4g
    甘油磷酸鈉(Sodiumglycerophosphate 10g
    麥芽糖(Maltose 20g
    乳糖(Lactose 1g
    臭甲酚紫(Bromcresol purple 0.015g
    洋菜(agar 20g
    蒸餾水 1000ml 

    秤取各成分(或適量之商業(yè)制品)溶于蒸餾水或去離子水中,

                 加熱溶解洋菜,待完全溶解后,繼續加熱5分鐘,冷卻至50℃

                 60℃,加1ml1%氯化三酚基雙偶氮(2,3,5-triphenylterazoliumchloride

                 最后pH值為7.20.2,分裝于培養皿中。

     
    2.
    牛膽汁七葉靈洋菜培養基(Bile esculin agar          

    牛肉抽出物(Beef extract 3g
    蛋白(Peptone 5g
    七葉靈(Esculin 1g
    牛膽汁(Oxgall 40g
    檸檬酸鐵(Ferric citrate 0.5g
    洋菜(agar 15g
    蒸餾水 1000ml            

           秤取各成分(或適量之商業(yè)制品)溶于蒸餾水中或去離子水中,

           加熱至沸騰并使完全溶解后,于121℃15分鐘,最后pH值為6.60.2,

                 分裝于培養皿中。

    3.腦心浸出液(Brain-heart infusion,BHI 

    牛腦浸出物(Calf brain infusion 200g
    牛心浸出物(Beef heart infusion 250g
    蛋白(Protepose Peptone 10g
    葡萄糖(Dextrose 2g
    氯化鈉(NaCl 5g
    磷酸氫二鈉(Na2HPO4 2.5g
    蒸餾水 1000ml            

     秤取各成分(或適量之商業(yè)制品)溶于蒸餾水或去離子水中,加熱使完全溶解后,分裝于試管中,于121℃15分鐘,最后值為7.40.2。


    試劑

    1.30%過(guò)氧化氫試劑

    2.革蘭氏染色液(Gram,s stain solution:

    革蘭氏染色液組包括哈克氏結晶紫液(Hucker,s crystal violet),革蘭氏碘液,革蘭氏脫色劑及革蘭氏復染液(Safranin

    取樣:用以滅菌之容器或無(wú)菌袋盛取水樣品,取檢體量為100ml,若污染情形嚴重時(shí),則可采10ml每一檢體至少做二重復。

    過(guò)濾:以減壓過(guò)濾方式,將檢體過(guò)濾之孔徑為0.45 um 濾膜上。

    培養:經(jīng)第2.4節過(guò)濾后之薄膜,取出放置在置有KF鏈球菌洋菜培養基之培養皿上,倒置,放入培養箱,在35℃培養48小時(shí)。

    計數:經(jīng)培養后,觀(guān)察有否菌落生成,若有按紅或粉紅之菌落,是為典型菌落,挑選35個(gè)典型菌落進(jìn)行確認試驗,照確認試驗所得之結果一確定之比例計算出糞便性鏈球菌之估計值,以CFU/100ml表示。

     

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