1.微生物學(xué)檢驗 采取病兔或死兔的空腸、回腸、盲腸內容物、腸黏膜或糞便等作被檢病料。
涂片鏡檢：將被檢材料直接涂片，作革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)有革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，一般很少見(jiàn)到芽孢。
分離培養：將病料接種于熟肉培養基，置37℃溫箱培養，或接種于DS培養基，亦可置37℃溫箱培養。5~6小時(shí)后培養基變得很混濁，并產(chǎn)生大量氣體。在有氣體出現時(shí)(一般在4～6小時(shí))進(jìn)行傳代(2~3次)可獲純培養物�；蛘邔z驗材料直接接種于鮮血瓊脂平皿培養基，或葡萄糖鮮血瓊脂平皿培養基，或乳糖牛奶卵黃瓊脂平皿培養基，置于厭氧罐中于37℃溫箱培養24小時(shí)。魏氏梭菌在鮮血瓊脂或葡萄糖鮮血瓊脂平皿上，形成圓形、凸起的單個(gè)菌落，大小2~4毫米，呈半透明、表面光滑、邊緣整齊；有些菌株，菌落中心凹陷，表面呈放射性條紋狀，邊緣呈鋸齒狀。菌落周?chē)霈F雙溶血圈。在乳糖—牛奶—卵黃瓊脂平皿上，菌落周?chē)拖旅娉霈F乳濁帶。由于發(fā)酵乳糖，菌落周?chē)始t色暈環(huán)，但表面不形成虹彩層。最后根據典型菌落特征，挑取菌落，接種于鮮血斜面培養基，供以下各種特性檢驗之用。
鏡檢：涂片后進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性、粗大桿菌，很少見(jiàn)有芽孢。
生化反應：將純培養物接種于糖、醇類(lèi)等生化反應培養基。魏氏梭菌能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等，靛基質(zhì)陰性，硫化氫陽(yáng)性。
牛奶培養基：能迅速發(fā)酵牛奶中的乳糖，呈一種特有的強烈的凝固產(chǎn)氣反應。
2.動(dòng)物接種試驗 小白鼠毒力試驗：將18~24小時(shí)液體純培養物接種18~22克體重的小白鼠，每只鼠腹腔注射0.5毫升，觀(guān)察3日。如小白鼠死亡，即進(jìn)行細菌分離培養及涂片鏡檢，予以證實(shí)。
家兔試驗：將18～24小時(shí)液體純培養物接種家兔，或固體純培養物用滅菌生理鹽水洗下接種家兔，每只兔耳靜脈注射0.5毫升，10分鐘后撲殺家兔，置37℃溫箱5～8小時(shí)后體內充滿(mǎn)氣體，腹部膨脹。剖檢：各臟器內有許多氣泡，尤以肝臟為甚，俗稱(chēng)“海綿肝”或“泡沫肝”，然后以肝臟作細菌培養及染色鏡檢。
3.毒素檢驗 小白鼠致死試驗如下：
腸內毒素試驗：將病兔或死兔的空腸、回腸、盲腸內容物用滅菌生理鹽水作成倍稀釋(如腸道內容物很稀可不必稀釋)，經(jīng)8000轉/分、15分鐘，或3000轉/分、1小時(shí)離心沉淀，取上清液或經(jīng)過(guò)濾器除菌的液體接種小白鼠，每只鼠尾靜脈注射0.2～0.5毫升，達一個(gè)致死量以上時(shí)，30分鐘內即死亡；發(fā)病后30分鐘而不死亡者，將很快恢復正常。小白鼠體重小的，敏感度高，毒素量大，致死時(shí)間將縮短。
培養物毒素測定：將待檢菌株接種于DS培養基或熟肉培養基，置37℃下培養12～18小時(shí)，培養物再經(jīng)8000轉/分、15分鐘，或3000轉/分、1小時(shí)離心沉淀，取上清液接種小白鼠。每只鼠尾靜脈注射0.2毫升，或腹腔注射0.5毫升，一般在30分鐘內死亡，需觀(guān)察3日。
豚鼠皮膚試驗：離心待檢菌株培養物，取其上清液(方法同小白鼠)，并用生理鹽水作適當稀釋?zhuān)⑸潆嗍蟊巢?皮內)0.05毫升，陽(yáng)性者在注射后10~15分鐘內即出現紅腫反應。
腫脹反應可持續到次日，測量的紅腫直徑為0.8～1.5厘米。檢樣注射后30分鐘內，給豚鼠靜脈注射2.5％伊文斯藍l毫升，1小時(shí)后陽(yáng)性反應部位出現藍色環(huán)狀。嚴格控制注射檢樣與注射伊文斯藍間隔時(shí)間，因間隔時(shí)間不同對藍色反應的大小有影響。
家兔皮膚壞死試驗：離心待檢菌株液體培養物，取其上清液，注射于家兔腹部皮內，每個(gè)注射點(diǎn)注射0.05~0.2毫升，觀(guān)察注射部位，陽(yáng)性者先發(fā)生水腫后出現壞死現象，需觀(guān)察3日。
溶血試驗：離心待檢菌株的液體培養物，取其上清液0.5毫升，加入小試管內，再加0.5％綿羊紅細胞懸液0.5毫升，混勻，置37℃水浴箱內，經(jīng)30分鐘、60分鐘和120分鐘和24小時(shí)觀(guān)察溶血情況，陽(yáng)性者于60分鐘內發(fā)生溶血。
4.中和試驗 離心待檢菌株液體培養物，取其上清液，或離心腸內容物上清液0.5毫升(應含有2～5個(gè)最小致死量)，加入標準各型混合血清或分型血清0.5毫升，混合。另設待檢上清液加等量生理鹽水混合，置37℃溫箱內作用(中和)30～40分鐘，將上述各種混合物分別接種小白鼠，每只鼠腹腔注射0.5毫升或尾靜脈注射0.2毫升，觀(guān)察小白鼠有無(wú)死亡。根據注射后對小白鼠的保護作用確定毒素型。
5.對流免疫電泳 瓊脂凝膠板以pH8.6、0.05~0.1摩/升的巴比妥緩沖液配制的1％瓊脂澆成。在6厘米× 9厘米的玻板上，加上述瓊脂10毫升，冷凝后打孔，孔徑3毫米，孔距4~5毫米。離心待檢菌株液體培養物，取其上清液，或離心腸內容物，取其上清液，作被檢抗原，分別加入瓊脂板一排孔內。另一排孔內加診斷血清。加樣后，置電泳槽上，以6～7伏/厘米的穩定電壓電泳45~60分鐘。在相應的抗原、抗體孔之間出現白色月牙形沉淀帶，為陽(yáng)性反應。如沉淀帶不清晰時(shí)，可在密閉容器內于37℃置數小時(shí)，以增加清晰度。
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