植物組織培養的方法和步驟

一、培養材料的采集 

    組織培養所用的材料非常廣泛，可采取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉，有時(shí)也利用花粉粒和花藥，其中根尖不易滅菌，一般很少采用。 

    對于木本花卉來(lái)說(shuō)，闊葉樹(shù)可在一、二年生的枝條上采集，針葉樹(shù)種多采種子內的子葉或胚軸，草本植物多采集莖尖。 

    在快速繁殖中，最常用的培養材料是莖尖，通常切塊在0.5厘米左右，如果為培養無(wú)病毒苗而采用的培養材料通常僅取莖尖的分生組織部分，其長(cháng)度在0.1毫米以下。 

二、培養材料的消毒 

（一）先將材料用流水沖洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無(wú)菌紗布或吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。 

（二）在無(wú)菌壞境中將材料放入70％灑精中浸泡30－60秒。 

（三）再將材料移入漂白粉的飽和液或0.01％升汞水中消毒10分鐘。 

（四）取出后用無(wú)菌水沖洗三、四次。 

三、制備外植體 

    將已消毒的材料，用無(wú)菌刀、剪、鑷等，在無(wú)菌的環(huán)境下，剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，這就是外植體。在操作中嚴禁用手觸動(dòng)材料。 

四、接種和培養 

（一）接種　 

　　在無(wú)菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養基上，每瓶接種4－10個(gè)。 

（二）封口　 

　　接種后，瓶、管用無(wú)菌藥棉或蓋封口，培養皿用無(wú)菌膠帶封口。 

（三）溫度　 

　　培養基大多應保持在25℃左右，但要因花卉種類(lèi)及材料部位的不同而區別對待。 

（四）增殖　 

    外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴大繁殖系數，需要繼代培養。把材料分株或切段轉入增殖培養基中，增殖培養基一般在分化培養基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個(gè)月左右后，可視情況進(jìn)行再增殖。 

（五）根的誘導　 

    繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒(méi)有根，必須轉到生根培養基上進(jìn)行生根培養。1個(gè)月后即可獲得鍵壯根系。 

五、組培苗的練苗移栽 

    試管苗從無(wú)菌到光、溫、濕穩定的環(huán)境進(jìn)入自然環(huán)境，必須進(jìn)行煉苗。一般移植前，先將培養容器打開(kāi)，于室內自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來(lái)水把根系上的營(yíng)養基沖洗干凈，再栽入已準備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98％左右），但基質(zhì)不宜過(guò)濕，以防爛苗。

 

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