微量接種菌落計數法測定抗生素后效應的影響因素探討

  [摘要］　目的:探討微量接種菌落計數法測定抗生素后效應(PAE)的影響因素。

        方法:通過(guò)實(shí)驗比較離心洗滌法和稀釋法消除藥物的差異、確定接種區域最 適宜的菌落數范圍以及氯化三苯四氮唑(TTC)的適宜濃度，并結合文獻對其他有關(guān)影響因素進(jìn)行評述。

      結果:兩種除藥方法所測得的PAE無(wú)明顯差異。接種區域菌落數以選擇10～10 0 cfu為宜。TTC的適宜濃度為10 μg^．ml^-1。

結論:應用微量接種菌落計數法測定PAE時(shí)應控制有關(guān)影響因素。

［ABSTRACT］　OBJECTIVE：To investigate factors affecting det ermination of PAE.METHODS：Using micro-inoculation colony counting method,compar ison with method for removal of drug,the optimal counts range of cfu from inocul ation and MIC of TTC were made.Other factors,which could affect PAE,have been re viewed.RESULTS：There were no significant variations between washing an d dilution method for removal of drug.TTC at the concentration of 10 μg^．ml ^-1 was the optimal.10～100 cfu in the counting area was preferred.CONCLUSIONS：When using micro-inoculation colony counting metho d to investigate the PAE,the optimal condition should be controlled.

 抗生素后效應(Postantibiotic effect,PAE)是評價(jià)抗菌藥物藥效學(xué)和制定給藥方案的重要 指標之一。PAE的測定常在體外進(jìn)行。我們曾建立了微量接種菌落計數法測定PAE^［1］ ，此法簡(jiǎn)便易行。關(guān)于PAE的影響因素，國內外已有評述^［2.3］，本文主要通過(guò)實(shí)驗并結合文獻對微量接種菌落計數法測定PAE的幾個(gè)主要影響因素進(jìn)行探討，為在一般醫院條件下開(kāi)展PAE的研究提供參考。

1　關(guān)于細菌與抗菌藥物的接觸

　　細菌與抗菌藥物接觸是產(chǎn)生PAE的基本前提�？咕�藥物的種類(lèi)、藥物濃度、細菌接觸量、接觸時(shí)間等均可影響體外PAE的測定結果。眾所周知，不同種類(lèi)抗菌藥物的作用機制不同，對同一類(lèi)細菌的PAE值也不同^［2～4］，同一類(lèi)抗菌藥物的不同藥物對細菌的PAE值也有 明顯差異^［5.6］。
　　PAE值與抗菌藥物濃度有著(zhù)一定的關(guān)系^［3］。一般而論，氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)藥物與PAE呈濃度依賴(lài)性，β-內酰胺類(lèi)藥物僅呈部分濃度依賴(lài)性，而有的抗菌藥物僅在高于MIC 以上才可產(chǎn)生PAE，如大環(huán)內酯類(lèi)抗生素。據報道^［4］，應用菌落計數法測定不同濃 度(1MIC～16MIC)的7種抗菌藥物對大腸埃希氏菌的PAE。其中，四環(huán)素、氯霉素、利福平在接近MIC時(shí)可產(chǎn)生PAE，隨著(zhù)濃度增高，在8MIC時(shí)PAE達最大值；氨芐西林在高達8MIC時(shí)才出現PAE，在濃度增高時(shí)PAE值不再增大；而慶大霉素在2MIC時(shí)才測得PAE，在較高濃度時(shí)，由 于其快速而強大的殺菌作用會(huì )導致測定失敗。因此，在進(jìn)行PAE測定時(shí)，應根據各類(lèi)藥物安 排不同的藥物濃度(一般應從1/2MIC開(kāi)始遞增)，以探討PAE與藥物濃度的相關(guān)性。
　　關(guān)于抗菌藥物與細菌接觸時(shí)間，一般認為接觸時(shí)間越長(cháng)，PAE值越大。常采用接觸時(shí)間為1 h 或2 h。有人認為，細菌接觸抗菌藥物的濃度較接觸時(shí)間更為重要^［3］。
　　PAE可因接觸的菌量不同而有所改變，因此，控制試驗菌的濃度是重要的。多數研究資料表 明，菌液濃度10⁶ cfu^．ml^-1為宜。試驗可按以下操作：試驗菌種轉種于MH肉湯(MHB)中37℃培育過(guò)夜，菌懸液于580 nm波長(cháng)處測定吸光度，使吸光度控制在0.25左右，此 菌懸液濃度約為10⁸ cfu^．ml^-1。以MHB稀釋10倍后，取1.0 ml加入9.0 ml 含抗菌藥物的MHB中，其最終濃度即為10⁶ cfu^．ml^-1。

2　關(guān)于抗菌藥物的消除

　　抗菌藥物與細菌接觸一定時(shí)間后需予以消除�？咕�藥物的消除是測定PAE的重要步驟之一。 常用離心洗滌法、稀釋法或酶滅活法^［3］。據報道^［4］，稀釋法與離心洗滌法對青霉素G作用于金葡菌ATCC 6538P，以及酶滅活法與稀釋法對氨芐西林作用于肺炎鏈球菌的PAE的影響，均未發(fā)現明顯差異。我們探討了離心洗滌法和稀釋法對PAE測定的影響，以慶大霉素(1，4MIC)與大腸埃希氏菌ATCC 25922、金葡菌ATCC 25923接觸1 h， 分別以上述兩種方法消除藥物，按微量接種菌落計數法描記細菌生長(cháng)曲線(xiàn)，并計算PAE值。 

注：^*1TTC在瓊脂平板中的濃度，^*2表內數字表示生長(cháng)受抑制的菌株 數。

表 2　接種菌落數對菌液濃度測定的影響( ±s,n=8)

注：^*1由實(shí)測菌落數及稀釋倍數計算得出的ATCC 25923待測菌液的濃度。

參考文獻：
［1］　崔潔，王宏斌，李志光等.微量接種菌落計數法測定抗生 素后效應［J］.中國醫院藥學(xué)雜志，1999，19(2)：83
［2］　Vogelman BS,Craig WA.Pos tantibiotic effects ［J］.J Antimicrob Chemother,1985,15(1):37
［3］　王浴生.抗生素后效應及其臨床意義［J］.中國抗生素雜志，1996，21(4)：306
［4］　Bundtzen RW,Gerber AU,Cohn DL,et al.Postantibiotic suppression of bacteri al growth ［J］.Rev Infect Dis,1981,3(1):28
［5］　方翼，王睿.β-內酰胺類(lèi)藥物抗生素后效應研究概述［J］.中國醫院藥學(xué)雜志，19 98，18(4)：170
［6］　周亮.喹諾酮類(lèi)抗菌后效應［J］.中國醫院藥學(xué)雜志，1998，18(2)：76

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