摘要: 目的 查清直飲水中費氏耶耳森氏菌對直欽水質(zhì)量的影響。方法 采用細菌分離、微生物生化系統鑒定。結果 從直飲水中檢出費氏耶耳森氏菌。結論 加強設備的維護,確保各項工藝的正常運行,為社會(huì )提供優(yōu)質(zhì)的放心產(chǎn)品。
關(guān)鍵詞: 直飲水;費氏耶耳森氏菌;產(chǎn)品質(zhì)量
2007年8月,對某直飲水廠(chǎng)進(jìn)行常規衛生細菌檢測,發(fā)現菌落總數1 CFU/mL,大腸菌群0MPN/100 mL,屬正常范圍。肉湯增菌培養48 h無(wú)菌生長(cháng),但72 h肉湯變濁,檢出費氏耶耳森氏菌。
1 材料和方法[1]1·1 材料1·1·1 營(yíng)養肉湯、SS瓊脂、麥康凱瓊脂、革蘭氏染色液、腸桿菌科細菌生代寫(xiě)論文化編碼鑒定管、三糖鐵(均由浙江、湖南行政主管部門(mén)核發(fā)生產(chǎn)許可證的企業(yè)生產(chǎn),在有效期內使用)。1·1·2 克氏雙糖鐵按GB 4789·28—2003[1]配制。1·2 方法1·2·1 分離培養:本菌生長(cháng)溫度為30~37℃,但在22~29℃才能使本菌的某些特性出現。4℃時(shí)能保存和繁殖。本菌傳代時(shí)間長(cháng),最短亦需40min左右。在SS或麥康凱瓊脂上于25℃經(jīng)24 h培養,菌落細小,至48 h直徑才增大成0·5~3·0mm。菌落圓整、光滑、濕潤、扁平或稍隆起,透明或半透明;在麥康凱瓊脂上菌落淡黃色,如若微帶紅色,則菌落中心的紅色常稍深。本菌在肉湯中生長(cháng)呈均勻混濁,一般不形成菌膜。1·2·2 細菌鑒定:用杭州天和微生物試劑有限公司腸桿菌科細菌生化編碼鑒定管進(jìn)行鑒定。
2 結果2·1 生物學(xué)特征本菌為革蘭氏陰性桿菌或球桿菌,大小為1~3·5μm×0·5~1·3μm,多單個(gè)散在,有時(shí)排列成短鏈或成堆。本菌不形成芽胞,無(wú)莢膜,有周鞭毛;但其鞭毛在30℃以下培養條件形成,溫度較高時(shí)即喪失,因此表現為30℃以下有動(dòng)力,而35℃以上則無(wú)動(dòng)力。2·2 生化鑒定特征2·2·1 檢查經(jīng)1天培養的麥康凱平板,排除紅色或粘液狀菌落,挑取直徑1~2 mm偏平、無(wú)色或淡粉紅色,具有紅色中心整個(gè)邊緣明顯無(wú)色的小菌落。用接種針將所選菌落穿刺接種于賴(lài)氨酸精氨酸鐵瓊脂(LAIA)管、尿素瓊脂管、膽汁七葉甙管,室溫培養48 h。在LAIA中的培養物會(huì )產(chǎn)生堿性斜面,酸性底層,不產(chǎn)生氣體和H2S(KA--)的反應,被認為是尿素酶陽(yáng)性的可疑耶氏菌。將LAIA斜面上的培養物劃線(xiàn)接種于厭氧卵黃瓊脂(AEY),置室溫培養。使用AEY上的生長(cháng)物進(jìn)行純度檢查、脂肪酶反應(2~5 d)、氧化酶試驗、革蘭氏染色和生化試驗的接種。將AEY上的菌落接種于生化試驗培養基,置室溫培養3 d。2·2·2 刮取一滿(mǎn)環(huán)(直徑3 mm)符合SN 0174—1992[2]的典型或可疑耶氏菌特性的改良克氏雙糖鐵瓊脂斜面培養物,接種于裝有1 mL Rustigian氏尿素培養基(改良法)的直徑10 mm長(cháng)為100 mm(3)試管中,手振搖5~6 s后于25℃培養,每隔30 min觀(guān)察1次,培養觀(guān)察至4 h。2·2·3 將尿素酶試驗陽(yáng)性的改良克氏雙糖鐵瓊脂斜面培養物按SN 0174—1992所列生化項目(尿素酶試驗除外)進(jìn)行生化試驗,25℃培養,氨基酸脫羧酶試驗培養24~30 h,其他生化試驗陰性結果的應培養觀(guān)察4 d。2·2·4 改良的克氏雙糖鐵瓊脂培養結果按表1要求,初步判斷為非小腸結腸炎耶爾森氏菌。表1 改良克氏雙糖鐵瓊脂培養結果初步判斷方法初判結果斜面底層產(chǎn)氣硫化氫可疑小腸結腸炎耶爾森氏菌A A - -非小腸結腸炎耶爾森氏菌A A + + 注:K:產(chǎn)堿,A:產(chǎn)酸;+陽(yáng)性反應;-陰性反應;(+)偶見(jiàn)少量小氣2·3 經(jīng)進(jìn)一步生化鑒定,比對SN 0174—1992[2]關(guān)于耶爾森氏菌屬近緣菌的鑒別規定,最后判定為費氏耶爾森氏菌。
3 討論3·1 耶爾森氏菌為兼性厭氧菌,生長(cháng)溫度為-1~48℃,能在反復冷凍、緩化下存活。由于該菌可在4℃下進(jìn)行冷增菌,因此保存在4~5℃冰箱中的食品具有被污染的危險。該菌要求較高的水活度,最低水活度為0·95,pH接近中性,較低的耐鹽性。對加熱、消毒劑敏感�？刂埔疇柹暇年P(guān)鍵因素包括適當的蒸煮或巴氏滅菌,適宜的食品處理以防止二次污染。進(jìn)行水處理、合理使用消毒劑等控制措施。在該廠(chǎng)正常生產(chǎn)的情況下直飲水中檢出耶耳森氏菌屬,說(shuō)明該廠(chǎng)水源也被本菌污染,生產(chǎn)中的消毒滅菌對該菌只起到損傷作用沒(méi)有完全殺死,本菌屬在水中仍然存在,并不斷復蘇、繁殖,在1個(gè)月的保質(zhì)期里容易再次污染水源。3·2 耶爾森氏菌屬分布很廣,可存在于生的蔬菜、乳和乳制品、肉類(lèi)、豆制品、沙拉、牡蠣、蛤和蝦中。也存在于環(huán)境中,如湖泊、河流、土壤和植被等。已從家畜、狗、貓、山羊、灰鼠、水貂和靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物的糞便中分離出該菌。在港灣周?chē)?SPAN lang=EN-US>,許多鳥(niǎo)類(lèi)包括水禽和海鷗可能是帶菌者。耶耳森氏菌屬有許多菌種是致病菌。耶爾森氏菌作為一種食源性疾病的有關(guān)特性了解較多,其在世界范圍內已爆發(fā)多起,食品和飲水受到污染往往是爆發(fā)胃腸炎的重要原因。本菌雖不致病,但仍然值得高度關(guān)注。
參考文獻:
[ 1 ] GB 4789.28—2003,食品衛生微生物學(xué)檢驗染色液、培養基和試劑[S].
[ 2 ] SN 0174—1992,出口食品小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗方法[S].
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