產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)是一種革蘭氏陽(yáng)性、產(chǎn)生芽胞、嚴格厭氧及形成特殊莢膜的梭狀桿菌,是梭狀芽胞菌屬中的主要成員之一[9,11]。該菌廣泛存在于自然界的水源、土壤及人和動(dòng)物腸道之中 [1,2,3]。研究發(fā)現,該菌至少可以產(chǎn)生15種以上的毒素[11],但目前僅有5~6種毒素,即α、β、ε、ι毒素及腸毒素(CPE)、β2毒素等被認為是該菌的主要致病性毒素。其中CPE和β2毒素是人食物中毒及胃腸疾病的重要致病因子[10]。
根據產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生四種致死性毒素(α、β、ε、ι毒素)的能力,將其分為五種類(lèi)型,即A、B、C、D、E型[7]。
表1. 產(chǎn)氣莢膜梭菌的毒素分型
Atpha Beta Epsilon Iota
A + - - -
B + + + -
C + + - -
D + - + -
E + - - +
A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起人的食物中毒和氣腫疽的主要病原體,亦可引起動(dòng)物的壞死性腸炎和腸毒血癥[18,19];C型產(chǎn)氣莢膜梭菌可以引起人的壞死性腸炎以及各種動(dòng)物的腸毒血癥;B型和D型產(chǎn)氣莢膜梭菌主要存在于動(dòng)物的腸道中,作為一種條件致病菌可引起動(dòng)物發(fā)生腸毒血癥;E型產(chǎn)氣莢膜梭菌通常很難從動(dòng)物體內分離,偶爾可以從犬或貓的腸道中分離,其致病性目前不是十分清楚。
產(chǎn)氣莢膜梭菌是繼沙門(mén)氏菌、葡萄球菌后引起食物中毒的又一重要的病原菌。由于它存在廣泛,因而傳播也比較容易。其中部分A型產(chǎn)氣莢膜梭菌還產(chǎn)生一種在生物醫學(xué)上具有重要意義的毒素,即腸毒素(CPE),該毒素致病性很強,并可引起人的食物中毒[12]。根據美國疾病控制中心(CDC)的統計資料,在1993~1997年之間,CPE陽(yáng)性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒的病例,僅次于沙門(mén)氏菌和葡萄球菌引起的食物中毒病例,約占食物中毒病例總數的4~10% [13]。目前的最新統計數據表明,每年美國由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒人數在250,000左右,其中約有十人死亡,每年造成的經(jīng)濟損失在1.2億美元左右[15]。流行病學(xué)調查發(fā)現,平均每起由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒事件的暴發(fā),通常涉及50~100人。有些嚴重的食物中毒暴發(fā)甚至涉及到上千人。當食品在加工或烹調時(shí),由于加熱不充分,以及在冷凍貯藏過(guò)程中,操作不當,該菌常?梢源婊钣谑称分,一旦人們食入污染的食品,產(chǎn)氣莢膜梭菌就進(jìn)入體內,并在腸道內繁殖形成芽胞,產(chǎn)生CPE。該毒素導致腸粘膜上皮細胞的損傷,從而引起人的食物中毒[3]。
在過(guò)去十幾年的研究中,人們還發(fā)現CPE陽(yáng)性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌與幾種人的非食源性腹瀉有密切的關(guān)系[8]。目前已從病人的糞便中分離出CPE陽(yáng)性的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌,并將其確定為人的抗生素相關(guān)性腹瀉的病原體[4,,6]。有些學(xué)者通過(guò)對人食物中毒的CPE陽(yáng)性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌和人的抗生素相關(guān)性腹瀉的CPE陽(yáng)性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的cpe基因進(jìn)行比較,結果發(fā)現cpe基因序列相同,但該cpe基因位置可存在于細菌染色體上也可以存在于細菌的質(zhì)粒上,當cpe基因位于細菌染色體上時(shí),該種CPE陽(yáng)性產(chǎn)氣莢膜梭菌可以引起人的食物中毒,而cpe基因位于細菌質(zhì)粒上時(shí),引起人的非食源性腹瀉[7,14]。
正確區分不同菌型的產(chǎn)氣莢膜梭菌對判定和診斷人與動(dòng)物的疾病十分重要。以往我們鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌的菌型時(shí),通常采用經(jīng)典的動(dòng)物體內中和試驗的方法 [12],但這些方法操作繁瑣,而且常常受到實(shí)驗動(dòng)物來(lái)源和品質(zhì)的影響,從而出現誤判。同時(shí)由于某些產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)過(guò)長(cháng)期人工培養和保存后,往往會(huì )失去某些生物學(xué)特性,影響檢測的結果。因此,研制和推廣具有靈敏、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)的產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗方法勢在必行,而且將具有很大的實(shí)踐意義。文其乙等建立了一系列的PCR方法,用來(lái)對產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行基因分型、亞基因分型及對CPE陽(yáng)性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的cpe基因定位。這些方法可以大大提高產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗工作的質(zhì)量和工作效率,具有快速、簡(jiǎn)便、準確、易推廣等優(yōu)點(diǎn)。
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