氨基酸
氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位.不同種類(lèi)的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養液提供,這幾種氨基酸稱(chēng)為必需氨基酸.其中谷氨酰胺是細胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時(shí),細胞生長(cháng)不良而死亡.因此,各種培養液中都有較大量的谷氨酰胺.但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置于
碳水化合物
碳水化合物是細胞生長(cháng)主要能量來(lái)源,其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分.主要有葡萄糖,核糖,脫氧核糖,丙酮酸鈉和醋酸等.
無(wú)機鹽
培養液中無(wú)機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡.此外,通過(guò)提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調節細胞膜功能.培養液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素, 細胞通?赡褪260mOsm/kg 320 mOsm/kg.標準培養液的滲透壓在此范圍內波動(dòng).特別注意:向培養液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì )明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì).向培養液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調節鈉離子濃度.
緩沖系統
大多數細胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是,細胞培養最適pH值隨培養的細胞種類(lèi)不同而不同.成纖維細胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4).由于多數培養液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進(jìn)行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡.如果氣相或培養箱空氣中CO2濃度設定在5%,培養液中NaHCO3的加入量為
常昂貴,在高濃度時(shí)對一些細胞可能有毒.HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(
維生素
在細胞培養中,盡管血清是維生素重要來(lái)源, 但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長(cháng).
其它成分
在一些較為復雜的培養液中還包括其它一些成分.如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養液,使用時(shí)還需要補加丙酮酸鈉和2-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-Me).2-Me 對細胞生長(cháng)有很重要的作用.有人認為它相當于胎牛血清,有直接刺激細胞增殖作用.2-Me的活性部分是硫氫基,其中一個(gè)重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽,能誘導細胞的增殖,為非特異性的激活作用.同時(shí)避免過(guò)氧化物對培養細胞的損害.另一個(gè)重要作用是促進(jìn)分裂原的反應和DNA合成,增加植物凝集素(PHA)對淋巴細胞的轉化作用,已廣泛應用于雜交瘤技術(shù),另外,也開(kāi)始用于一些難以培養的細胞.2-Me是一種小分子還原劑,極易氧化.分子量為78.13,純的2-Me是一種無(wú)色有刺激味的液體,比重為1.110-1.120(Do20),常用終濃度為5×10
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