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顯微技術(shù)是微生物檢驗技術(shù)中最常用的技術(shù)之一。顯微鏡的種類(lèi)很多，在實(shí)驗室中常用的有：普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡和電子顯微鏡等。而在食品微生物檢驗中最常用的還是普通光學(xué)顯微鏡。
一、普通光學(xué)顯微鏡的結構和基本原理：
1.結構：
光學(xué)顯微鏡是由光學(xué)放大系統和機械裝置兩部分組成。光學(xué)系統一般包括目鏡、物鏡、聚光器、光源等；機械系統一般包括鏡筒、物鏡轉換器、鏡臺、鏡臂和底座等。
標本的放大主要由物鏡完成，物鏡放大倍數越大，它的焦距越短。焦距越小，物鏡的透鏡和玻片間距離（工作距離）也小。油鏡的工作距離很短，使用時(shí)需格外注意。目鏡只起放大作用，不能提高分辨率，標準目鏡的放大倍數是十倍。聚光鏡能使光線(xiàn)照射標本后進(jìn)入物鏡，形成一個(gè)大角度的錐形光柱，因而對提高物鏡分辨率是很重要的。聚光鏡可以上下移動(dòng)，以調節光的明暗，可變光闌可以調節入射光束的大小。
顯微鏡用光源，自然光和燈光都可以，以燈光較好，因光色和強度都容易控制。一般的顯微鏡可用普通的燈光，質(zhì)量高的顯微鏡要用顯微鏡燈，才能充分發(fā)揮其性能。有些需要很強照明，如暗視野照明、攝影等，常常使用鹵素燈作為光源。
2.原理：
顯微鏡的放大效能（分辨率）是由所用光波長(cháng)短和物鏡數值口徑?jīng)Q定，縮短使用的光波波長(cháng)或增加數值口徑可以提高分辨率，可見(jiàn)光的光波幅度比較窄，紫外光波長(cháng)短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接觀(guān)察。所以利用減小光波長(cháng)來(lái)提高光學(xué)顯微鏡分辨率是有限的，提高數值口徑是提高分辨率的理想措施。要增加數值口徑，可以提高介質(zhì)折射率，當空氣為介質(zhì)時(shí)折射率為1，而香柏油的折射率為1.51，和載片玻璃的折射率（1.52）相近，這樣光線(xiàn)可以不發(fā)生折射而直接通過(guò)載片、香柏油進(jìn)入物鏡，從而提高分辨率。顯微鏡總的放大倍數是目鏡和物鏡放大倍數的乘積，而物鏡的放大倍數越高，分辨率越高。
二、普通顯微鏡的使用方法
1、低倍鏡觀(guān)察
先將低倍物鏡的位置固定好，然后放置標本片，轉動(dòng)反光鏡，調好光線(xiàn)，將物鏡提高，向下調至看到標本，再用細調對準焦距進(jìn)行觀(guān)察。除少數顯微鏡外，聚光鏡的位置都要放在最高點(diǎn)。如果視野中出現外界物體的圖像，可以將聚光鏡稍微下降，圖像就可以消失。聚光鏡下的虹彩光圈應調到適當的大小，以控制射入光線(xiàn)的量，增加明暗差。
2、高倍鏡觀(guān)察
顯微鏡的設計一般是共焦點(diǎn)的。低倍鏡對準焦點(diǎn)后，轉換到高倍鏡基本上也對準焦點(diǎn)，只要稍微轉動(dòng)微調即可。有些簡(jiǎn)易的顯微鏡不是共焦點(diǎn)，或者是由于物鏡的更換而達不到共焦點(diǎn)，就要采取將高倍物鏡下移，再向上調準焦點(diǎn)的方法。虹彩光圈要放大，使之能形成足夠的光錐角度。稍微上下移動(dòng)聚光鏡，觀(guān)察圖像是否清晰。
3、油浸鏡觀(guān)察
油浸鏡的工作距離很小，所以要防止載皮片和物鏡上的透鏡損壞。使用時(shí)，一般是經(jīng)低倍、高倍到油浸鏡。當高倍物鏡對準標本后，再加油浸鏡觀(guān)察。載玻片標本也可以不經(jīng)過(guò)低倍和高倍物鏡，直接用油浸鏡觀(guān)察。顯微鏡有自動(dòng)止降裝置的，載玻片上加油以后，將油浸鏡下移到油滴中，到停止下降為止，然后用微調向上調準焦點(diǎn)。沒(méi)有自動(dòng)止降裝置的，對準焦點(diǎn)的方法是從顯微鏡的側面觀(guān)察，將油浸鏡下移到與載玻片稍微接觸為止，然后用微調向上提升調準焦點(diǎn)。
使用油浸鏡時(shí)，鏡臺要保持水平，防止油流動(dòng)。油浸鏡所用的油要潔凈，聚光鏡要提高到最高點(diǎn)，并放大聚光鏡下的虹彩光圈，否則會(huì )降低數值口徑而影響分辨率。無(wú)論是油浸鏡或高倍鏡觀(guān)察，都宜用可調節的顯微鏡燈作光源。
三、普通顯微鏡的保養
顯微鏡是精密貴重的儀器，必須很好地保養。顯微鏡用完后要放回原來(lái)的鏡箱或鏡柜中，同時(shí)要注意下列事項：
1、觀(guān)察完后，移去觀(guān)察的載玻片標本。
2、用過(guò)油浸鏡的，應先用擦鏡紙將鏡頭上的油擦去，再用擦鏡紙蘸著(zhù)二甲苯擦拭2—3次，最后再用擦鏡紙將二甲苯擦去。
3、轉動(dòng)物鏡轉換器，放在低倍鏡的位置。
4、將鏡身下降到最低位置，調節好鏡臺上標本移動(dòng)器的位置，罩上防塵套。
鏡頭的保護最為重要。鏡頭要保持清潔，只能用軟而沒(méi)有短絨毛的擦鏡紙擦拭。擦鏡紙要放在紙盒中，以防沾染灰塵。切勿用手絹或紗布等擦鏡頭。物鏡在必要時(shí)可以用溶劑清洗，但要注意防止溶解固定透鏡的膠固劑。根據不同的膠固劑，可選用不同的溶劑，如酒精、丙酮和二甲苯等，其中最安全的是二甲苯。方法是用脫脂棉花團蘸取少量的二甲苯，輕擦，并立即用擦鏡紙將二甲苯擦去，然后用洗耳球吹去可能殘留的短絨。目鏡是否清潔可以在顯微鏡下檢視。轉動(dòng)目鏡，如果視野中可以看到污點(diǎn)隨著(zhù)轉動(dòng)，則說(shuō)明目鏡已沾有污物，可用擦鏡紙擦拭接目的透鏡。如果還不能除去，再擦拭下面的透鏡，擦過(guò)后用洗耳球將短絨吹去。在擦拭目鏡或由于其他原因需要取下目鏡時(shí)，都要用擦鏡紙將鏡筒的口蓋好，以防灰塵進(jìn)入鏡筒內，落在鏡筒下面的物鏡上。
四、顯微計數
利用血球計數器在顯微鏡下直接計數是一種常見(jiàn)的微生物計總數的方法。因為計數器載片和蓋片間的容積一定，所以可以根據顯微鏡下觀(guān)察到的微生物數目來(lái)計算單位體積內微生物總數。
血球計數器是一只特制載玻片。載片上有兩個(gè)方格網(wǎng)，每一方格網(wǎng)共分九個(gè)大方格，其中間的一個(gè)大方格用來(lái)做微生物計數，所以又稱(chēng)為計數室。計數室的刻度一般有兩種，一種是每個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，每中方格又分成25個(gè)小方格。另一種是一個(gè)大方格分25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格，不論哪一種，一個(gè)大方格，都等分成（25×16或16×25）400個(gè)小方格。因為每個(gè)大方格邊長(cháng)為
立方毫米。測出每個(gè)中方格菌數，就可以算出一個(gè)大方格的菌數，由此推算出1毫升菌液內所含的菌數。
一個(gè)大方格是16個(gè)中方格時(shí)，應當數4角4個(gè)中方格（即100個(gè)小方格）的菌數，一個(gè)大方格是25個(gè)中方格時(shí)，除取4角4個(gè)中方格外，還要數中央一個(gè)中方格（即為80個(gè)小方格）的菌數。
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