花卉組織培養基技術(shù)
錄入時(shí)間:2010-11-9 10:36:53
來(lái)源：360圖書(shū)館
1、花卉組織培養的應用價(jià)值
花卉組織培養，就是分離花卉植物體的一部分，如莖類(lèi)、莖段、葉、花、幼胚等，在無(wú)菌試管，并配合一定的營(yíng)養、激素、溫度、光照等條件，使其產(chǎn)生完整植株。由于其條件可以嚴格控制，生長(cháng)迅速，1-2個(gè)月即為一個(gè)周期，因此在花卉植物的生產(chǎn)上有重要應用價(jià)值。
快速大量繁殖方面：對一些難繁殖的名貴品種花卉及一些短期內大量急需生產(chǎn)的花卉，應用很廣。蘭花、菊花、唐菖蒲等花卉利用腋芽增生，短期得到大量植株。非洲紫羅蘭可通過(guò)葉片，水仙可通地鱗片，誘導產(chǎn)生不定芽，來(lái)達到大量繁殖的目的。
花卉育種方面：百合、鳶尾等許多花卉可以進(jìn)行遠緣雜交，由于生理代謝等方面的原因，常使雜種胚早期敗育，因而得不到雜種植物。而在試管中進(jìn)行胚培養，可使其順利生長(cháng)，得到遠緣雜種。此外還可采用愈傷組織誘變、花粉培養等多種方法，來(lái)進(jìn)行花卉育種。
培育無(wú)病毒苗方面：菊花、唐菖蒲、水仙、郁金香、大麗花等一大批花卉靠無(wú)性繁殖法繁殖，病毒逐代傳遞積累，危害日趨嚴重。而分離花卉植物0.1-0.5毫米大小的生長(cháng)點(diǎn)，培養得到的基本上是無(wú)病毒苗。因此這一技術(shù)已在花卉無(wú)病毒苗的培育中廣泛應用。
2、花卉組織培養對實(shí)驗室及設備的要求
花卉組織培養是在人工控制的條件下培養花卉，是一種花卉現代工廠(chǎng)化生產(chǎn)新技術(shù)，所以其對實(shí)驗室及設備有一定的要求。
實(shí)驗室方面
①化學(xué)實(shí)驗室：主要承擔配制培養基的任務(wù)。要求具有各種化學(xué)藥品試劑、各種玻璃器皿、稱(chēng)量天平等。
②洗滌室：主要進(jìn)行玻璃器皿的洗滌，要求有自來(lái)水裝置，同時(shí)有烘箱，以便洗后烘干。
③滅菌室：主要進(jìn)行培養基和用具的消毒。要有高壓滅菌鍋，具有水源和電源。
④接種室：是花卉材料分離、消毒接種和轉移的場(chǎng)所。要求密閉、清潔、整齊、裝有紫外燈，能隨時(shí)滅菌。有的也可用接種箱或超凈工作臺代替。
⑤培養室：是花卉材料培養生長(cháng)的地方。要求清潔，保溫好，室溫均勻一致，并有絕熱、防火性能。
設備方面
①天平：供配制培養基時(shí)稱(chēng)量藥品和激素用。大量元素用普通天平；微量元素和激素用分析天平。
② 酸度計：測定培養基的pH用。
③高壓滅菌鍋：是供培養基和器械用具滅菌用。
④烘箱：洗凈的玻璃器皿干燥滅菌用。
⑤蒸餾水制造裝置：得到純凈水供培養用。
⑥冰箱：供貯放母液和植物材料用。
⑦接種箱或超凈工作臺：為植物材料接種或轉移的操作場(chǎng)所。
⑧空調機：控制室溫用。
3、花卉組織培養對培養基的要求
培養基是花卉植物組織培養中十分重要的基質(zhì)，目前應用的有好多種，但其主要成分大體相同，主要成分是水，其他還有大量元素、微量元素、維生素、生長(cháng)調節物質(zhì)、蔗糖和瓊脂等。
目前花卉組織培養中應用最多的為MS培養基。其組成是在配制1升（1000毫升）培養基時(shí)，加硝酸銨1.65克、硝酸鉀1.9克、氯化鈣0.44克、硫酸鎂0.37克、磷酸二氫鉀0.17克、碘化鉀0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸鎂22.3毫克、硫酸鋅3.6毫克、鉬酸鈉0.25毫克、硫酸銅0.025毫克、氯化鈷0.025毫克、硫酸鐵27.8毫克、蔗糖30克和瓊脂7克。其他生長(cháng)調節物質(zhì)要根據花卉的種類(lèi)和培養目的而確定。MS培養基中大量元素濃度過(guò)高，為此常采用1/2、1/4大量元素濃度作培養用，這樣生長(cháng)效果列好。
配制培養基前要準備好三角瓶、試管、燒杯、量筒、吸和等玻璃器皿，預先稱(chēng)好藥品。配制時(shí)先將瓊脂溶化，再加入在水中深解的各種營(yíng)養元素和蔗糖，然后用氫氧化鈉或鹽酸調整培養基的pH，一般掌握在5.7左右。以后可分注到養瓶中，蓋好瓶蓋。培養基配好要經(jīng)高壓滅菌。冷卻后放到培養室預培養3天，如沒(méi)有雜菌污染，才可進(jìn)行花卉材料的接種。
4、花卉組織培養的過(guò)程
花卉植物組織培養即無(wú)菌培養，也就是要求培養的材料不帶有雜菌。從田間或溫室等地切取花卉材料時(shí)，應選擇健壯無(wú)病蟲(chóng)母株，取幼嫩、分生能力強的部位，以利生長(cháng)。
取來(lái)的材料雖經(jīng)選擇，外部總還有不少雜菌。為此，接種前應進(jìn)行表面滅菌。通常先用自來(lái)水沖洗十幾分鐘，有泥的應刷去。沖洗干凈后，用70%的酒精浸泡10-15秒鐘消毒。接著(zhù)用無(wú)菌水（經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水）沖洗兩次，再用10%的漂白粉澄清液浸泡20分鐘消毒，最后用無(wú)菌水沖洗3-4次。帶有茸毛不易濕潤消毒的材料可加些洗衣粉。上述操作皆應在接種箱或超凈工作臺等無(wú)菌環(huán)境條件進(jìn)行。經(jīng)過(guò)表面滅菌的材料，用無(wú)菌濾紙將水吸掉。再用解剖刀切取所需部位，通常幾毫米大小，培
育無(wú)病毒苗則應在1毫米以下，然后用解剖針或槍式鑷子將材料接種到培養瓶上培養。工具用完即應在95%酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具帶菌造成交叉污染。操作時(shí)應穿工作服、戴工作帽，事先洗凈手，后再用酒精棉擦試一遍。
5、花卉組織培養材料的培養和移植
花卉材料接種后放到培養室培養。培養室是花卉材料培養生長(cháng)的場(chǎng)所，一般幾到十幾平方米皆可。高度約2米左右，空間小，可節省控溫能源。培養材料放在培養架上培養。培養架可有木材或金屬制成，有4-5層，每層高40-50厘米，日光燈裝在上方。架長(cháng)1.2米左右，與40瓦日光燈長(cháng)一致，寬80-90厘米。每一層可裝兩支日光燈，這樣培養時(shí)的照度約為3000勒克斯。培養室的溫度大多采取晝夜恒溫培養，保持在25℃±2℃，也有采取晝夜變溫培養的，夜晚溫度可低些，這應根據花卉生長(cháng)需
要而定。每天日光燈照明12-16小時(shí)。
花卉試管苗由于人工提供各方面優(yōu)越條件，一般生長(cháng)發(fā)育好，根系也多，可往往由于沒(méi)掌握其特性，造成移栽時(shí)成活率不高。這是因為試管苗在瓶中濕度很高的條件下培養，人為提供蔗糖等碳源，花卉材料是處一起異養生活狀態(tài)，可以說(shuō)比溫室生長(cháng)的花卉還要嬌嫩得多。而突然從瓶中移到土壤讓其過(guò)自養生活，往往由于變化太劇烈而造成損傷甚至死亡。為此，花卉試管苗開(kāi)始移出時(shí)，仍應罩上玻璃瓶，或蓋上薄膜袋（上開(kāi)幾個(gè)小孔），1周后去掉。有噴霧條件則更理想。開(kāi)始7-10天要遮蔭，以后逐漸見(jiàn)陽(yáng)光。移植基質(zhì)以沙與蛭石各半為好，要排水、通風(fēng)好，隔一天澆一次營(yíng)養液。這樣逐步鍛煉，讓其適應環(huán)境。2-3周后經(jīng)馴化鍛煉苗即可移至培養土中栽植。
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