培養基母液的配制方法

1.了解無(wú)菌操作
2.掌握培養基母液的配制方法

二、實(shí)驗原理

配制培養及時(shí)，為了使用方便和用量準確，通常采用母液法進(jìn)行配制，即將所選培養基配方中各試劑的用量，擴大若干倍后再準確稱(chēng)量，分別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時(shí)按比例吸取母液進(jìn)行稀釋配制即可。

三、實(shí)驗器材和藥品

器材：電子天平、燒杯、容量瓶、細口瓶、藥勺、玻璃棒、電爐。
藥品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、煙酸、鹽酸吡哆醇(維生素B6)、鹽酸硫胺素 (維生素B1)、甘氨酸。

四、實(shí)驗步驟

1、大量元素母液的配制

各成分按照表1培養基濃度含量擴大10倍用天平稱(chēng)取，用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到 1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。到入細口瓶，貼好標簽保存于冰箱中。配制培養基時(shí)，每配1L培養基取此液100ml。

表1 MS培養基大量元素母液制備

注意：
(1) 配制大量元素母液時(shí)，某些無(wú)機成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學(xué)反應，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現象發(fā)生，母液配制時(shí)要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學(xué)藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時(shí)應注意先后順序。特別應將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯開(kāi)混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最后單獨加入，在溶解CaCl2·2H2O 時(shí)，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸騰，操作時(shí)要防止其溢出。

2、微量元素母液的配制

MS培養基的微量元素無(wú)機鹽由7種化合物（除Fe ）組成。微量元素用量較少，特別是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用電光天平稱(chēng)量，其它同大量元素。配制培養基時(shí)，每配制1L培養基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。

表2   MS培養基微量Ⅰ的配制

 表3   MS培養基微量Ⅱ的配制

 注意：
使用電子分析天平時(shí)注意不要把藥品撒到稱(chēng)盤(pán)上，用完以后，用吸耳球將天平內的臟物清理干凈。

3、鐵鹽母液的配制

鐵鹽不是都需要單獨配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來(lái)方便，又比較穩定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解，定容至1L。配制培養基時(shí)，配制1L取此液10ml。

表4 MS鐵鹽母液的配制

 注意：
在配制鐵鹽時(shí)，如果加熱攪拌時(shí)間過(guò)短，會(huì )造成FeS04和Na2-EDTA 鰲合不徹底，此時(shí)若將其冷藏，FeSO4會(huì )結晶析出。為避免此現象發(fā)生，配制鐵鹽母液時(shí)，FeSO4和Na2-EDTA 應分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調pH值至5 .5，室溫放置冷卻后，再冷藏。

4、有機母液的配制

MS培養基的有機成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養基中的有機成分原則上應分別單獨配制。配制直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱(chēng)量時(shí)用電子分析天平。配制培養基時(shí)，每配1L培養基取此液5ml。

注意：
由于維生素母液營(yíng)養豐富，因此貯藏時(shí)極易染菌。被菌類(lèi)污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養造成傷害，不宜再用。避免此現象發(fā)生的方法是:配制母液時(shí)用無(wú)菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無(wú)菌瓶中，或縮短貯藏時(shí)間。

表5   MS培養基有機物質(zhì)母液的制備

 5、激素母液配制

植物組織培養中使用的激素種類(lèi)及含量需要根據不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：

(1)配制生長(cháng)素類(lèi)，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，應先用少量95%乙醇或無(wú)水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。

(2)細胞分裂素，例如KT，應先用少量95%乙醇或無(wú)水乙醇加3~4滴1mol/L的鹽酸溶解，再用蒸餾水定容。

(3)配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。

注意：
所有的母液都應保存在0~4℃冰箱中，若母液出現沉淀或霉團則不能繼續使用

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