論沙門(mén)氏菌的檢測方法

沙門(mén)氏菌是食品微生物中致病菌的一種，下面介紹幾種檢測沙門(mén)氏菌的方法。 

1、傳統的培養方法

用于沙門(mén)氏菌分析的傳統方法是食物樣品分步增菌，以增加病原的可檢出率，共有如下四步： ( 1 )預增菌，將樣品加到培養基中，溫度37℃，使那些“致傷”的細菌復蘇及使所有微生物生長(cháng)。( 2 ) 選擇增菌，使沙門(mén)氏菌生長(cháng)而使肉湯中同時(shí)存在的微生物數量減少，目前選擇性培養基有3種類(lèi)型：連四硫基鹽肉湯、硒酸鹽胱氨酸肉湯和 RV培養基。( 3 )分離，即選擇性培養物在含一種或多種抑制非沙門(mén)氏菌生長(cháng)制劑的瓊脂平板上劃線(xiàn)培養，然后對平板上肉眼可見(jiàn)的特征性菌落進(jìn)行確認。并對該菌落分離物進(jìn)行生化和血清學(xué)檢測，以 做出鑒定。

2、 以核酸為基礎的方法

所有的細胞都含有DNA和RNA這樣唯一一類(lèi)可攜帶信息的大分子，所以用它作為檢測的標靶。 標靶通常是一個(gè)特異性核酸序列，它可通過(guò)以補體核酸分子作為探針來(lái)檢出。探針需要加附適當的標記，此法應用的探針含有放射性同位素標記的傷寒沙門(mén)氏菌DNA片段， 其敏感性高，經(jīng)約48小時(shí)的增菌步驟后， 檢測極限可達1 08個(gè)細菌／m l 。目前，以核酸雜交為基礎的第二代技術(shù)——比色計目前也已發(fā)展起來(lái)，此法依賴(lài)于沙門(mén)氏菌核糖體 RNA( rRNA) ——核糖體發(fā)育過(guò)程中儲存的核酸成分的檢測。核糖體是細胞蛋白質(zhì)合成器的一部分，每個(gè)細菌細胞中存在5000 ~ 20000個(gè)復制體，而相比之下染色體 DNA復制體僅 2 ~10個(gè)。 這種天然富含r RNA標靶序列的情況使得用無(wú)輻射計檢測成為可能，同時(shí)又保持了與放射性同位素方法相當 或更高的敏感性。 

3、以抗體為基礎的檢測方法

利用抗原——抗體反應的特異性，進(jìn)行細菌的鑒別和血清學(xué)定性。細菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在，使得人們可以建立一些快速方法來(lái)檢測以食品為載體的病原。廣泛采用的是以雙位點(diǎn)ELISA技術(shù)即夾心ELISA為基礎的方法。此法是指以固定在固體基質(zhì)上的“捕捉”抗體來(lái)捕捉目標抗原，經(jīng)洗滌除去未結合的成分，加入第二種酶標抗體，此者結合在捕捉到的抗原的不同位點(diǎn)上，第二次洗滌后加入酶作用基質(zhì)，并令其與顏色成分反應，然后用分光光度法即很容易檢測到目標抗原。采用微量滴定板作為固態(tài)基質(zhì)使反應形式標準化，并促成其自動(dòng)化。

ELISA法檢出沙門(mén)氏菌的極限范圍在105-106個(gè)細胞／ml，因此，要得出可靠的結果，食物樣品首先必須進(jìn)行預增菌、選擇性增菌，通常還要在含有D一甘露糖的肉湯( M肉湯) 中進(jìn)行后增菌，以促進(jìn)鞭毛發(fā)育。標準的ELISA法樣品制備，經(jīng)40 ~ 48 小時(shí)的孵育才能完成。目前國內口岸系統已應用微量板ELISA法對進(jìn)出口動(dòng)物產(chǎn)品進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢測。該法采用預先包被了沙門(mén)氏菌( A- E群) 單克隆抗體的微量板，加入經(jīng)增菌處理的樣品，反應后再加入一定的指示劑， 作用畢后用酶標儀測定OD值來(lái)判定結果，微量板ELI SA法樣品制備過(guò)程分三步，共耗時(shí)24小時(shí)。( 1 ) 選用營(yíng)養肉湯進(jìn)行預增菌6小時(shí)，使“致傷”、冷凍的沙門(mén)氏菌復蘇。( 2)使用選擇性培養基RV進(jìn)行增菌14小時(shí)，使沙門(mén)氏菌大量繁殖，同時(shí)抑制其它雜菌生長(cháng)。(3) 使用營(yíng)養肉湯( 蛋白胨水) 進(jìn)行后增菌4小時(shí)，使沙門(mén)氏菌的數量大大增加。 

4、快速檢測方法

(1)平板檢測方法。第一階段，在小孔內加入樣品和抗體聯(lián)合物，孵育期間，沙門(mén)氏菌抗原和包被抗體形成了一種復合物：包被單克隆抗體——沙門(mén)氏菌抗原——抗體聯(lián)合物。洗滌后，通過(guò)每孔加入基質(zhì)溶液 ( 過(guò)氧化脲) 和色素原溶液( 四甲基氨基丙苯) 來(lái)顯示上述復合物 ：酶催化色素原的氧化，結果產(chǎn)生藍色。加入反應終止液終止催化反應，并使反應混合物酸化，顏色由藍變黃。( 2 ) 卡片檢測法。 此法以單步免疫反應即夾心型免疫色譜反應為基礎。反應固相包括一塊用“抗沙門(mén)氏菌抗體——染料”偶合物浸透的染料襯墊和一張薄膜條，抗沙門(mén)氏菌抗體就固定在薄膜的反應區上。增菌后，增菌肉湯用移液管加到樣品小孔內并令其吸收， 如樣品存在沙門(mén)氏菌抗原，它們會(huì )與偶合物作用，然后依次遷移到膜上，與固定在膜上反應區的抗體結合，在反應窗上呈現一條色帶。最后結果可在 5 ~ 7秒內讀取。 

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