SS 瓊脂的質(zhì)量控制及測試技術(shù)

SS瓊脂不僅可對接種標本同時(shí)分離沙門(mén)菌和志賀菌，而且對大腸桿菌及其它非腸道致病菌有較強的抑制作用，因而，仍然是目前應用最廣泛的一種選擇性腸道菌培養基。但由于配制培養基所用原材料( 蛋白胨、膽鹽等)的質(zhì)量及其標準化問(wèn)題尚未得到全面解決，如僅按國家標準提供的配方投料生產(chǎn)或配制，培養基的質(zhì)量往往達不到要求。為此，無(wú)論是實(shí)驗室自制SS瓊脂，還是從培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家直接購買(mǎi)商品化的干燥培養基，在使用之前都必需作適當的質(zhì)量鑒定，以確保實(shí)驗室的工作質(zhì)量。關(guān)于SS瓊脂的質(zhì)量控制項目，因實(shí)驗室條件及用于常規工作還是實(shí)驗研究等性質(zhì)不同而有所選擇�，F將我們在工作實(shí)踐中選擇應用的質(zhì)量控制項目及有關(guān)測試技術(shù)介紹如下： 

1  SS瓊脂質(zhì)量鑒定綜合參考指標

SS瓊脂的質(zhì)量綜合參考指標為：

①加熱溶解后不得有肉眼可見(jiàn)不溶物存在，培養基傾注平皿凝固后應看清五號字體；

②凝固后SS瓊脂用接種環(huán)劃線(xiàn)應不破裂；

③pH值7.0±0.2 ；

④志賀菌生長(cháng)率大于 40％，菌落呈無(wú)色透明，直徑不小于1.5mm；

⑤沙門(mén)菌生長(cháng)率大于70％，菌落呈無(wú)色透明或帶黑心(硫化氫陽(yáng)性菌株)，直徑不小于 1.8mm；

⑥大腸桿菌菌落呈桃紅色(或有紅色中心)，不透明。對大腸桿菌的抑制率應大于85％；

⑦金黃色葡萄球菌被抑制。

2  SS瓊脂質(zhì)量控制指標的測試

2.1  感官指標的測試   按規定比例將稱(chēng)取定量的SS瓊脂粉(或自制SS瓊脂的各成份， 以下同) 加入 pH 6.4～7.0之間的蒸餾水攪拌均勻加熱溶解后，對光觀(guān)察透明度及不溶物；將瓊脂傾注平皿，凝固后置于五號字體上觀(guān)察字體筆劃是否清晰并對光觀(guān)察平皿色澤，用接種環(huán)在表面劃線(xiàn)觀(guān)察是否破裂。

2.2  pH值測定    將SS瓊脂粉按比例加入 pH 7.0的蒸餾水，在室溫下充分攪拌均勻，使除瓊脂及檸檬酸鐵以外的成份全部溶解，放置10min 取上清液用酸度計測定其pH值。 

2.3 腸道致病菌生長(cháng)率測定  分別取鼠傷寒沙門(mén)菌(50013 )、副傷寒沙門(mén)菌(50073 )、宋內氏志賀菌(51334 )、福氏志賀菌(51302 )、大腸桿菌( ATCC25922 )、金黃色葡萄球菌(ATCC25923 )的6h肉湯培養物，以生理鹽水稀釋至相當于0.5號麥氏比濁管濃度，再稀釋至含菌量為1000cfu/ml左右。取此菌液0.1 ml，用L棒均勻涂布于待測試SS平皿和對照試驗的營(yíng)養瓊脂平皿上(每份5個(gè)平皿)，置36℃培養24h，計數菌落數并計算細菌生長(cháng)率。

細菌生長(cháng)率=試驗平皿內的平均菌落數/對照平皿內的平均菌落數×100％  

2.4 抑菌試驗

2.4.1  大腸桿菌抑制率試驗   除大腸桿菌取代腸道致病菌外，其余操作與2.3相同。

抑菌率=1-（試驗平皿內的平均菌落數/對照平皿內的平均菌落數×100％ ）

2.4.2金黃色葡萄球菌抑制試驗  挑取金黃色葡萄球菌的6h肉湯培養物1環(huán)，劃線(xiàn)接種于待測SS瓊脂置36℃培養24h，觀(guān)察有無(wú)金黃色葡萄球菌生長(cháng)。

2.5 菌落色澤觀(guān)察及直徑測定    將試驗菌株( 鼠傷寒沙門(mén)菌、副傷寒沙門(mén)菌、宋內氏志賀菌、福氏志賀菌、大腸桿菌) 劃線(xiàn)接種于待測SS瓊脂，置36℃，24h培養后，以肉眼對光觀(guān)察菌落色澤，用測微尺法測量單個(gè)菌落區的具有代表性的5個(gè)單個(gè)菌落直徑，取其平均值。

簡(jiǎn)易的測微尺測量菌落直徑的方法為：將裝有測微尺的顯微鏡10×目鏡置于解剖鏡目鏡筒中，以油標卡尺置于解剖鏡載物臺，調節視野至刻度清晰，使目鏡測微尺與卡尺分格相平行重疊記錄卡尺lmm相當于測微尺的格數，移去尺，將待測菌落平皿置于視野中，使測微尺通過(guò)菌落直徑，量取被測菌落直徑所占測微尺的格數。

菌落直徑( mm ) = 被測菌落直徑所占測微尺的格數/卡尺 l mm相當于測微尺的格數

3 討論

3.1  SS瓊脂干粉的保質(zhì)期通常為2年，由于瓊脂粉的保質(zhì)期也是2年，因此，如果培養基廠(chǎng)家生產(chǎn)SS瓊脂培養基所用的是即將到期的瓊脂，則該SS瓊脂粉的保質(zhì)期將必然受到影響，尤其是凝膠強度指標。如果SS瓊脂粉的水分含量高( >6％) 或包裝不密閉，其保質(zhì)期將更加無(wú)法得到保證。

3.2  SS瓊脂加熱溶解后，宜全部?jì)A注平皿，因為反復加熱溶解不僅使水份過(guò)多揮發(fā)，而且會(huì )使SS瓊脂的質(zhì)量受到影響，對于當天未用完的SS平皿，可用塑料袋包扎后置于4～10℃冰箱內貯存7天以上，不影響對腸道致病菌的分離效果。

3.3 制備SS瓊脂用水的質(zhì)量要求，有關(guān)文獻的記載并不一致，在實(shí)際工作中蒸餾水、純凈水均有使用。作者認為，pH6.4～7.0之間的蒸餾水、純凈水均可使用。pH過(guò)高或過(guò)低，特別是某些“ 純凈水” 的pH值可低至5.5以下等均不宜用于制備SS瓊脂。 

3.4 硫化氫陽(yáng)性菌株在 SS瓊脂上的反應遠不及WS、HE瓊脂等。主要表現在H₂S陽(yáng)性菌株菌落黑色中心出現遲緩及黑色中心區域較小。據報道目前國內市售的商品化SS瓊脂在24h內出現H₂S陽(yáng)性者為50％，其余50％需36h后出現。因此，在不影響SS瓊脂對腸道致病菌分離效果的前提下，適當調正配方，使H₂S陽(yáng)性菌株在24h內出現陽(yáng)性，對絕大多數沙門(mén)菌的分離具有一定的實(shí)用價(jià)值。 

3.5 腸道菌的菌落直徑已成為考核SS瓊脂的公認的質(zhì)量指標之一。某些培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家的SS瓊脂上志賀菌菌落直徑達5mm以上，大腸桿菌菌落直徑達3.2mm以上，對腸道菌幾乎沒(méi)有任何抑制性，這種SS瓊指的選擇性極差。作者認為，沙門(mén)菌、志賀菌的菌落直徑能達到1.2mm以上即可，單純的過(guò)于追求菌落直徑，并無(wú)實(shí)際意義，而應當將腸道致病菌的生長(cháng)率及對大腸桿菌的抑制率作為主要考核指標。

3.6大腸桿菌菌落在SS瓊脂上的膽汁酸沉淀問(wèn)題，已引起培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家及檢驗界人士的普遍關(guān)注，單個(gè)大腸菌菌落出現膽汁酸沉淀，將影響對腸道致病菌的檢出效果，可采取提高 SS瓊脂中所用原料膽鹽的質(zhì)量或使用混合膽鹽來(lái)解決這一問(wèn)題。 

3.7 有關(guān)文獻對 SS瓊脂上腸道致病菌的菌落色澤的描述很不統一。具體有：無(wú)色透明菌落、 灰白色菌落、無(wú)色半透明菌落、透明微黃色菌落等。由于菌落色澤與培養基的成份、培養時(shí)間、觀(guān)察條件等均有一定關(guān)系，因此，對有關(guān)菌落的色澤及透明度，沒(méi)有必要過(guò)于強調某一具體描述的要求。 

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