SS培養基有效保存期內的質(zhì)量控制

錄入時(shí)間:2010-11-1 9:12:25 來(lái)源：浙江預防醫學(xué)

為了給臨床微生物檢驗提供方便，提高工作效率和檢測質(zhì)量，我們對制備的沙門(mén)-志賀菌培養基(簡(jiǎn)稱(chēng)SS培養基)進(jìn)行保存期實(shí)驗研究，現將結果報告如下。

材料與方法

1 材料購入的SS干燥培養基，按分值計算法檢定培養基質(zhì)量；判定標準，見(jiàn)表1。

表 1 SS培養基合格分值

項目	大腸埃希菌	痢疾志賀菌	鼠傷寒沙門(mén)菌
菌落直徑分值	≥10.000	≥10.000	≥10.000
菌落差分值	≥2.595	≥-1.825	≥0.355
生長(cháng)率分值	≥5.000	≥5.000	≥5.000
小計分值	≥27.595	≥13.175	≥15.355
總分值	≥56.125

2 方法按使用說(shuō)明稱(chēng)取SS干燥培養基，置于三角燒瓶中，加入蒸餾水，加熱煮沸至泡沫消失，冷卻至50℃～60℃，在生物安全柜內傾注入已滅菌的一次性使用塑料平皿中，用包裝袋密封包裝，置于普通冰箱內，備用。將指示菌菌種管打開(kāi)，分別接種于營(yíng)養肉湯中，于 37℃培養18—24 h 。取一接種環(huán)營(yíng)養肉湯菌懸液，接種在營(yíng)養瓊脂上，37℃培養l 8～2 4 h 。挑取單個(gè)菌落，置于營(yíng)養肉湯中，制成懸液，然后作l0-6稀釋?zhuān)?/SPAN>10稀釋度菌懸液置于被檢定培養基平板和對照1號培養基上，用L棒涂布在整個(gè)培養基表面 (使菌落控制在50—100cfu／皿范圍內) 。置于37℃培養24h 。計數菌落數，測量每個(gè)菌落直徑(精確至0.02mm) ，計算平均菌落直徑。

結果

1 菌落直徑和生長(cháng)率 新配制的SS培養基，分別接種3株指示菌，分別測量菌落直徑和生長(cháng)率。在新配制的培養基上；大腸埃希菌平均菌落直徑為1.0 4 m m，生長(cháng)率為11.7％；痢疾志賀菌平均菌落直徑為2.06 m m，生長(cháng)率為70.2％；鼠傷寒沙門(mén)菌平均菌落直徑為2.35mm，生長(cháng)率為101.2％。當在 4℃冰箱內密封保存10 W后；大腸埃希菌平均菌直徑增大為1.81m m，生長(cháng)率上升為51.4 ％；痢疾志賀菌平均菌落直徑縮小為1.33mm，生長(cháng)率下降為56.2％；鼠傷寒沙門(mén)菌平均菌落直徑縮小為1.77 mm，生長(cháng)率下降為 88.5 ％。見(jiàn)表 2 。表 2 指示菌在 S S培養基上菌落直徑和生長(cháng)率

觀(guān)察時(shí)間	大腸埃希菌		痢疾志賀菌		鼠傷寒沙門(mén)菌
觀(guān)察時(shí)間	菌落直徑（mm）	生長(cháng)率（%）	菌落直徑（mm）	生長(cháng)率（%）	菌落直徑（mm）	生長(cháng)率（%）
第1天	1.04	11.7	2.06	70.2	2.35	101.2
第1周	1.20	11.6	2.10	68.9	2.25	100.3
第2周	1.22	12.5	2.08	68.8	2.26	99.9
第3周	1.25	13.2	1.98	68.3	2.18	99.6
第4周	1.28	13.9	1.88	67.8	2.20	98.4
第5周	1.37	13.9	1.76	66.2	2.13	98.5
第6周	1.38	14.3	1.78	66.4	2.10	97.9
第7周	1.44	34.7	1.62	65.5	2.02	97.3
第8周	1.42	36.2	1.64	62.1	1.94	96.5
第9周	1.59	47.9	1.50	58.5	1.88	90.1
第10周	1.81	51.4	1.33	56.2	1.77	88.5

2 菌落直徑分值和生長(cháng)率 新配制的SS培養基采用分值計算法鑒定培養基，質(zhì)量總分值為 100.87，其中大腸埃希菌小計分值為39.45；痢疾志賀菌小計分值為 33.76；鼠傷寒沙門(mén)菌小計分值為27.66。在4℃冰箱內存放至第6周，總分值為63.89，放至第7周，總分值降至4 9.34 < 56.125 ，見(jiàn)表 3 。

表 3 指示菌在 SS培養基上菌落直徑分值和生長(cháng)率分值

觀(guān)察時(shí)間	大腸埃希菌			痢疾志賀菌			鼠傷寒沙門(mén)菌			總分值
觀(guān)察時(shí)間	菌落直徑分值	生長(cháng)率分值	分值小計	菌落直徑分值	生長(cháng)率分值	分值小計	菌落直徑分值	生長(cháng)率分值	分值小計	總分值
第1天	19.25	5.87	39.45	20.39	5.58	33.76	16.31	5.03	27.66	100.87
第1周	11.11	5.90	30.51	21.14	5.44	27.75	13.91	4.77	19.85	78.11
第2周	15.18	5.29	33.9	20.76	5.43	27.26	14.15	4.65	20.02	81.18
第3周	14.50	5.38	33.16	18.90	5.37	24.84	12.23	4.56	17.61	75.61
第4周	13.82	5.19	32.14	17.04	5.32	22.42	12.71	4.21	17.94	72.40
第5周	11.79	5.16	29.62	14.80	5.16	19.43	8.63	4.24	13.44	62.49
第6周	11.56	5.03	29.22	15.18	5.14	19.88	10.31	4.06	14.79	63.89
第7周	10.20	-1.51	21.02	12.20	5.06	16.02	8.39	3.89	12.30	49.34
第8周	10.66	-1.99	21.09	12.57	4.68	16.12	6.48	3.65	9.85	47.05
第9周	6.81	-5.75	12.64	9.96	4.28	12.41	5.04	1.77	6.13	31.18
第10周	1.83	-6.87	5.44	6.30	4.03	8.14	2.40	1.31	2.47	16.06

討論本次實(shí)驗的 3株指示菌在 4 ℃冰箱內存放不同時(shí)間的培養基的菌落直徑和生長(cháng)率結果表明，隨著(zhù)存放時(shí)間的延長(cháng)，菌落直徑縮小和生長(cháng)率下降，但很難判定培養基的質(zhì)量?jì)?yōu)劣。

本次實(shí)驗選用質(zhì)量合格的SS培養基 (總分值100.87>56.125 ，其中大腸埃希菌分值為39.45>27.595，痢疾志賀菌分值33.76>13.175，鼠傷寒沙門(mén)菌分值27.66>15.355 ) ，配制一批平板，密封存放在4℃冰箱內，每隔一周用 3株指示菌鑒定，采用分值計算法計算質(zhì)量分值，實(shí)驗結果表明：在 4℃條件下密封存放 6 W，質(zhì)量仍達到合格分值 (63.89>56.125)要求，但鼠傷寒沙門(mén)菌的分值自第5周起，質(zhì)量分值己小于合格分值(13.44<15.335 ) 。存放第 7周時(shí) ，質(zhì)量總分值已降至49.34 ，屬不合格質(zhì)量分值，從3株指示菌的質(zhì)量分值顯示，大腸埃希菌和鼠傷寒沙門(mén)菌的分值均未達到質(zhì)量合格分值，而痢疾志賀菌的質(zhì)量分值仍為合格。從菌落直徑分值和生長(cháng)率分值的結果表明，當指示菌的質(zhì)量分值不合格時(shí)，首先出現不合格是生長(cháng)率分值。實(shí)驗結果表明制備好的SS培養基在 4℃冰箱內存放 6 W，對腸道致病菌的分離鑒定無(wú)不良影響。

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