MS培養基配制中的五點(diǎn)注意

1 母液配制必須嚴格分類(lèi)

配制高濃度的母液是植物組織培養的基本功。配制母液的目的，除了多次取用、節省實(shí)驗準備的時(shí)間外，還有抑制雜菌生長(cháng)的作用。高濃度的母液能夠有效地抑制細菌與霉菌的生長(cháng)，加上低溫環(huán)境 ( 4℃) ，能夠大大增加培養基的存放時(shí)間( 一年左右 ) 。一般而言，培養基中的各個(gè)成分可以按照表1的分類(lèi)方式配成母液。 

表 1

注：“ 母液倍數”為筆者建議 ，具體濃度應以具體用量為準。 

按照表 1的要求，每一個(gè)“分類(lèi)別”為一瓶母液，按照相應的成分配制好后，4℃避光保存，用時(shí)按照母液倍數進(jìn)行稀釋即可。

母液分類(lèi)的依據，是要避免MS培養基中某些成分發(fā)生沉淀反應。例如，如果將全部的大量元素混合在一起配制， 則KH₂PO₄和CaCl₂ 易產(chǎn)生Ca₃( PO₄)₂沉淀，而CaC1₂和 MgSO₄ 將生成CaSO₄ 沉淀。 

除上述成分外，還必須加上蔗糖、瓊脂以及激素，才構成用于組織培養的MS培養基。 

2 激素的溶解方法

MS培養基中常用的激素，如2,4 - D、NAA、6-BA，也要配制成 10～20倍母液，這樣便于稱(chēng)量(激素的用量極小，給稱(chēng)量造成不便)，且可以多次取用。激素的配制與一般的藥品不同，需要助溶劑。

如要配制 10 mL的 1mg／mL 2，4- D母液，則應稱(chēng)取0.01g 2，4 - D固體，置于小燒杯中， 再以 1～3 mL的95％乙醇(或 0.1 mo l／L NaOH) 溶解，最后緩慢加入蒸餾水定容。即每加入1 mL蒸餾水，立即攪拌均勻，使白色沉淀消失。重復數次，直至定容 。

一般而言，生長(cháng)素類(lèi)物質(zhì)2,4-D、 N AA) 要用95％乙醇(或0.1 mo l／L NaOH)助溶，而細胞分裂素類(lèi)物質(zhì)(如6-BA)要用0.1 mo l／L的HC1助溶。助溶劑的用量一定要小，不能因其溶解效果好而過(guò)量使用，否則將影響培養基的質(zhì)量(改變培養基成分或 pH值) 。配制好的激素要常溫避光保存，盡快使用(盡量不超過(guò)一個(gè)月)。將激素母液保存在 4 ℃冰箱中， 希望獲得較長(cháng)的保存時(shí)間。但事實(shí)上這種做法是不可取的，因為激素在低溫環(huán)境中易析出沉淀，影響使用效果。                                                   

3 危險藥品的使用與保管

盡管組織培養技術(shù)已經(jīng)相當成熟，也很普及，但該技術(shù)并不安全。除注意滅菌鍋、超凈臺等大型儀器的使用安全外 ，最重要的當屬危險藥品的使用與保管。原則上，MS培養基中任何一種藥品都有一定的危險性�，F只把最突出、最需要預防的藥品注釋如下。

( 1 ) NH₄NO₃、 KNO₃ 

此兩種藥品為易爆品，取用時(shí)一定要輕拿輕放，保存在陰涼處。另外，目前NH4NO3，的購買(mǎi)受到一定的限制，也可以考慮使用其他培養基，如N₆或B₅培養基，無(wú) NH₄ NO₃成分，亦為組織培養所常用。

(2) EDTA- Na₂ 、CoC1₂、 2，4-D 此三種藥品為致癌物，配制時(shí)要帶膠皮手套，或兩層塑料手套。EDTA-Na為金屬螯合劑，有一定的粘性；CoCl₂能夠導致基因突變，遺傳學(xué)實(shí) 驗中也常用其作為致突變劑；2，4 - D是高效農藥，對人的皮膚有傷害作用。

4 熱水定容原則

在母液、激素、蔗糖、瓊脂都加入后，很多人習慣用微波爐或電磁爐加熱溶解培養基(特別是瓊脂) 。培養基熔化后，由于水分的蒸發(fā)，會(huì )造成體積的減少，從而需要定容。這時(shí)一定要用熱水(60℃左右) 進(jìn)行定容，切忌用冷水(30℃以下)，否則培養基中局部的瓊脂將凝 固，造成營(yíng)養成分濃度不均。 

5 關(guān)于調節 p H

適合的p H保證了營(yíng)養成分的正常發(fā)揮，也決定了培養基的硬度(偏酸則過(guò)軟，偏堿則過(guò)硬，都不利于組織的生長(cháng)) ，故要十分留意。對于MS 培養基而言，只要各個(gè)成分按照用量精確加入，并且在熔化培養基時(shí)加熱時(shí)間適合( 平均100 mL培養基加熱60～90s ， 保證完全熔化的同時(shí)，盡量限制加熱時(shí)間) ，則培養基的pH自然地將處于最適范圍內。調解 pH時(shí)最好用電子pH計，以保證精確度。pH試紙的誤差較大，要小心調節�？梢詫�pH調到比最適值小一些，因為培養基在滅菌后，p H將變大。 

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