支原體培養技術(shù)

培養基：牛心湯復合培養基等。分離培養：無(wú)菌采取肺、肝、脾、腎組織，直接剪成小塊放在固體培養基上劃一直線(xiàn)，再用無(wú)菌鉑耳環(huán)在與其垂直方向劃線(xiàn)，或者將組織塊剪碎磨成勻槳，經(jīng)液體培養基連續系列稀釋后培養．若當液體材料為牛乳、排泄物、胎液等，可直接取0.2ML接種于液體培養基或取0.1ML接種于固體培養基。固體瓊脂平板置37攝氏度潮濕需氧條件或在５％二氧化碳下培養48-96h,用斜射光或放大25-40倍的立體顯微鏡檢查,若有特異菌落出現,應選取散在的單個(gè)菌落用無(wú)菌解剖刀切下小瓊脂塊,用巴氏吸管小心地將菌落和周?chē)�瓊脂吸�?/SPAN>,再將其移入盛有2-3ML的液體肉湯培養管培養48h,將其培養物通過(guò)0.45微升孔徑大小的濾膜過(guò)濾后作1:10和1:100稀釋,每一個(gè)稀釋液取0.05ML涂布于幾個(gè)瓊脂平板,即可得到純的支原體培養物。

牛心湯復合培養基：
　　牛心湯1000ml
　　蛋白胨10g
　　氯化鈉5ml
　　酵母提取液10ml
　　無(wú)菌馬血清200ml
　　1.25%醋酸鉈溶液20ml
　　青霉素200IU/ml

實(shí)驗 支MP 肺炎支原體培養實(shí)驗

一、標本采集

支原體常侵及人和動(dòng)物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取樣后放入2~3ml支原體液體培養基的小管中，或取其分泌液，若標本是組織塊，可在滅菌乳缽或玻璃勻漿后接種，取樣后應盡快接種培養。

二、分離培養

1、支原體固體培養基接種法 轉動(dòng)拭子將標本液體盡量擠出，用無(wú)菌滴管吸1~2滴接種在平皿上蓋好，用L棒涂抹或傾斜轉動(dòng)平皿使標本均勻分布，置37℃孵育。

2、支原體半固體培養基接種法 混種法：在制備半固體培養基時(shí)，培養基加熱溶化，溫度降至50℃時(shí)，添加動(dòng)物血清、酵母浸液及青霉素后混勻，待冷卻至37~40℃時(shí)，用無(wú)菌滴管吸取標本0.5~1ml加入培養基中，充分混勻，凝固后置37℃孵育。

3、穿刺接種法：方法同細菌接種法。

三、結果觀(guān)察
　　絕大多數支原體為兼性厭氧，少數在含10% CO₂和相對濕度80~90%的大氣環(huán)境中生長(cháng)良好。支原體生長(cháng)緩慢，多數于3~4d長(cháng)出菌落，少數于1~2w方長(cháng)出典型菌落，在平皿固體培養基上生長(cháng)的菌落呈"油煎蛋"狀，邊緣不整齊。

四、附錄
　　糖酵解培養基（肺炎支原體培養基）
　　基礎培養基 70ml
　　馬（或牛血清） 20ml
　　25%酵母浸液 10ml
　　0.4%酚紅 0.5ml
　　1%醋酸鉈 2.5ml
　　青霉素10000IU/ml 5.0ml
　　調pH 7.8
　　肺炎支原體培養很簡(jiǎn)單的，特別是液體培養，不需要防護！
　　配方上面的有點(diǎn)復雜而模糊，簡(jiǎn)單：
　　PPLO 21g（商品化買(mǎi)）
　　酵母粉 6g
　　馬血清 200ml（沒(méi)有的話(huà)用小牛血清代替）
　　L－半胱氨酸 0.3g
　　葡萄糖 10g
　　1%酚紅 4ml
　　AMP 若干（0.1－0.2g，多加點(diǎn)不影響）
　　有時(shí)還加SMZ和TMP！
　　ph要調的，大概在7.5－7.6之間吧！
　　酚紅可以高壓的！

上一篇：支原體和脲原體

下一篇：支原體污染的特點(diǎn)及檢驗