植物組培中花藥的培養方法

①材料的選擇與處理

a、花粉發(fā)育時(shí)期。

選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期，是提高花粉植株誘導成功率的重要因素。被子植物的花粉發(fā)育可分為四分體期、單核期（小孢子期）、二核期和三核期（雄配子期）4個(gè)時(shí)期。單核期和二核期又可分為前、中、晚期。對大多數植物來(lái)說(shuō)，花粉發(fā)育的適宜時(shí)期是單核期，尤其是單核中、晚期。此時(shí)，單核晚期花粉中形成的大液泡已將核擠向一側，又叫單核靠邊期。

b、花粉發(fā)育時(shí)期的檢測。

一般將植物的花藥置于載玻片上壓碎，加1-2滴醋酸洋紅染色，再進(jìn)行鏡檢，以確定花粉發(fā)育時(shí)期。水稻等植物的花粉，處于單核期時(shí)尚未積累淀粉，在進(jìn)入三核期后的花粉開(kāi)始積累淀粉，因此可用碘-碘化鉀染色鑒定。

此外，花粉發(fā)育時(shí)期與花蕾或幼穗大小、顏色等特征之間有一定的對應關(guān)系，可供田間采樣時(shí)參照。如白菜單核期的花蕾為0.3-0.4cm，茄子單核靠邊期的花蕾為1.2-1.5cm。

c、材料預處理。

將采集的花蕾或花序進(jìn)行適當的處理能提高花粉植株誘導頻率。主要處理方法有低溫、離心、低劑量輻射、化學(xué)試劑（如乙烯利）處理等。其中低溫處理是最常用的方法，將禾谷類(lèi)植物帶葉鞘的穗子或其他植物的花蕾用濕紗布包裹放入塑料袋中，置冰箱冷藏。例如煙草在7-9℃放置7-14d，小麥、大麥在7℃放置7-14d，水稻在10℃放置14-21d可大幅度提高誘導率。

②表面消毒

花藥培養時(shí)，一般消毒程序比較簡(jiǎn)便。由于花蕾未開(kāi)放時(shí)，花藥處于無(wú)菌狀態(tài)，常以70%酒精棉球擦試材料外表或浸潤片刻即可。也可用0.1%升汞浸泡3-5min，或漂白粉溶液浸5-10min，最后用無(wú)菌水沖洗材料3-5次備用。

③接種

在超凈工作臺上用鑷子剝去部分花冠，露出花藥，夾住花絲，取出花藥接種到培養基上。注意不要直接夾花藥，以免損傷。接種密度宜高，以促進(jìn)“集體效應”的發(fā)揮，有利于提高誘導率。對于花器很小的植物，可能需要借助解剖鏡夾取花藥。

④培養

將培養材料置于25-28℃，光照強度2000-10000lx，光照時(shí)間12-18h/d。

⑤植株形態(tài)發(fā)生

花粉植株的形成有兩條途徑：一是花藥中的花粉形成愈傷組織，愈傷組織經(jīng)再分化誘導成苗；二是花粉分化成胚狀體而直接成苗。