常用的抗菌藥物敏感試驗

臨床微生物學(xué)工作者應熟悉常用抗菌藥物的藥理學(xué)特征和臨床適應癥，并結合本醫院、本地區的常用抗菌藥物和常見(jiàn)病原菌的耐藥狀況進(jìn)行藥敏試驗的抗菌藥物選擇。應重點(diǎn)選擇預測藥物即此種藥物的藥敏結果可預測同類(lèi)藥物的敏感性。

2．K-B紙片瓊脂擴散法

（1）原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周?chē)鷶U散，形成遞減的濃度梯度。在紙片周?chē)�可抑菌濃度范圍內測定菌的生長(cháng)被抑制，從而形成無(wú)菌生長(cháng)的透明圈即抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感性。

(2) 抗菌藥物紙片：專(zhuān)用藥敏紙片，用加樣或浸泡的方法使每片的藥量達到一定的規定量，冷凍干燥后密封，-20°C保存備用。

（3）培養基：水解酪蛋白（Mueller-Hinton MH）瓊脂是對生長(cháng)較快的需氧和兼性厭氧菌進(jìn)行藥敏試驗的標準培養基，pH7.2-7.4，瓊脂厚度為4mm。對營(yíng)養要求較高的細菌進(jìn)行藥敏試驗時(shí)，應在MH瓊脂中加入相應的營(yíng)養添加劑。

（4）細菌接種：接種物的準備可采用生長(cháng)法或直接菌落懸液法。為使藥敏試驗的接種濃度標準化,應使用0.5麥氏比濁標準的菌液濃度，制備好的菌液應在15min內接種完畢。置35℃孵育16-18h后讀取結果，苛養菌應孵育在含CO2的環(huán)境中，葡萄球菌和腸球菌必須孵育24h，以檢測對苯唑西林和萬(wàn)古霉素的耐藥性。

（5） 結果解釋和報告：用游標卡尺或直尺量取抑菌圈直徑，參照NCCLS標準判斷結果。常分為以下三級：

敏感（susceptible）：表示測試菌可被測定藥物常規劑量給藥后的所達到的血藥濃度所抑制或殺滅。中介（intermediate）：指測試菌對常規劑量用藥后體液或組織中的藥物濃度的反應性低于敏感株，但在測定藥物濃集部位的體液（如尿液）或使用高于正常給藥量（如β-內酰胺類(lèi)）臨床上使用有效。

（6）耐藥（resistant）：指測試菌不能被在體內感染部位能達到的抗菌藥物濃度所抑制。

（7）紙片法藥敏結果的因素： 培養基的質(zhì)量對結果的準確性有直接影響，如PH、硬度、濕度和深度等；藥敏紙片的含藥量是影響抑菌圈大小的重要因素；接種菌量正確與否是影響結果的重要因素之一；試驗操作質(zhì)量；孵育條件和溫度、時(shí)間；抑菌圈測量工具的精確度；質(zhì)控菌株本身的藥敏特性是否合格，有無(wú)變異。

（8）質(zhì)量控制： 采用標準菌株是進(jìn)行藥敏試驗質(zhì)量控制的主要措施。常用的臨床藥敏質(zhì)控標準菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC25923，大腸桿菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853 等。

3．稀釋法

   稀釋法是定量測定抗菌藥物抑制細菌生長(cháng)作用的體外方法，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。稀釋法所測得的某抗菌藥物能抑制待測菌肉眼可見(jiàn)生長(cháng)的最低藥物濃度稱(chēng)為最小抑菌濃度（minimal　inhibitory concentration，MIC）。

（1） 肉湯稀釋法：常量稀釋法(macrodilution)和微量稀釋法(microdilution)。原理是  用MH肉湯將抗菌藥物作不同濃度的稀釋后,再接種待測菌，定量測定抗菌藥物抑制或殺滅待測細菌的最低抑菌濃度或最低殺菌濃度（minimal bactericidal concentration MBC）。 對于需氧菌、兼性厭氧菌推薦使用M-H肉湯；而對于流感嗜血桿菌、鏈球菌則需在該培養液中加入補充營(yíng)養成分。

（2） 脂稀釋法：瓊脂稀釋法是將不同濃度抗菌藥物分別混勻于瓊脂培養基中，配制出含各種濃度藥物的平板，使用微量多頭接種儀接種細菌，孵育后觀(guān)察細菌在含不同濃度藥物的平板上的生長(cháng)情況，以抑制細菌生長(cháng)的平板所含的藥物濃度測得最低抑菌濃度（MIC）。該法的特點(diǎn)時(shí)可同時(shí)做多株細菌的MIC測定，結果重復性?xún)?yōu)于肉湯稀釋法，且易于發(fā)現耐藥突變株或污染，是驗證新藥體外抗菌活性時(shí)常用的參照標準。

 4．E 試驗：E 試驗是一種結合了稀釋法和擴散法的原理和特點(diǎn)測定微生物對抗菌藥物的敏感度的定量技術(shù)。

 5．聯(lián)合藥物敏感試驗和殺菌試驗

抗菌藥物聯(lián)合用藥可以出現4種結果：①無(wú)關(guān)作用：兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨活性；②拮抗作用：兩種藥物聯(lián)合作用顯著(zhù)低于單獨抗菌活性；③累加作用：兩種藥物聯(lián)合作用時(shí)的活性等于兩種單獨抗菌活性之和；④協(xié)同作用：兩種藥物聯(lián)合作用顯著(zhù)大于其單獨作用的總和。

（1）    聯(lián)合抑菌試驗：棋盤(pán)稀釋法是目前臨床實(shí)驗室常用的聯(lián)合抑菌定量方法。計算部分抑菌濃度（fractional inhibitory concentration,FIC）指數。

FIC指數=MIC甲藥聯(lián)用/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)用/MIC乙藥單用            

判斷標準：FIC指數 ﹤0.5為協(xié)同作用；0.5-1為相加作用；1-2為無(wú)關(guān)作用

﹥2為拮抗作用。