常量肉湯稀釋法測定抗菌藥物最低抑菌濃度（MIC）

1.抗菌藥物貯存液制備 抗菌藥物貯存液濃度不應低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高測定濃度。溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度�？咕�藥物直接購自廠(chǎng)商或相關(guān)機構。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進(jìn)行計算。例如：需配制100 ml濃度為1280μg/ml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為750μg/mg。用分析天平精確稱(chēng)取抗生素粉劑的量為182.6 mg。根據公式計算所需稀釋劑用量為：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后將182.6 mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見(jiàn)表5。配制好的抗菌藥物貯存液應貯存于-60℃以下環(huán)境，保存期不超過(guò)6個(gè)月。

2.藥敏試驗用抗菌藥物濃度范圍 根據NCCLS抗菌藥物敏感性試驗操作標準，藥物濃度范圍應包含耐藥、中介和敏感分界點(diǎn)值，特殊情況例外。

3. 培養基 NCCLS推薦使用Mueller-Hinton（MH）肉湯，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養基中生長(cháng)良好。在測試葡萄球菌對苯唑西林的敏感性時(shí)，應在肉湯中加入2%（W/V）氯化鈉，按制造廠(chǎng)家的要求配制需要量的MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。

4.接種物的制備 有2種方法配制接種物，一是細菌生長(cháng)方法，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似待檢菌落3-5個(gè)，接種于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉湯中，35℃孵育2-6h。增菌后的對數生長(cháng)期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥氏比濁標準，約含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落懸液配制法，對某些苛養菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養18~24h的菌落調配成0.5麥氏比濁標準的菌懸液。用MH肉湯將上述菌懸液進(jìn)行1∶100稀釋后備用。注意應在15分鐘內接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養，以檢查接種物純度。

5.稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種 取無(wú)菌試管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉湯外，其余每管加入MH肉湯1ml，在第1管加入抗菌藥物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混勻，然后吸取1ml至第2管，混勻后再吸取1ml至第3管，如此連續倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含藥物的生長(cháng)對照。此時(shí)各管藥物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管內加入上述制備好的接種物各1ml，使每管最終菌液濃度約為5×105CFU/ml。第1管至第11管藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。

6.孵育 將接種好的稀釋管塞好塞子，置35℃普通空氣孵箱中孵育16~20h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育20~24h；對可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬(wàn)古霉素腸球菌應持續孵育滿(mǎn)24h。

7.結果判斷與解釋 在讀取和報告所測試菌株的MIC前，應檢查生長(cháng)對照管的細菌生長(cháng)情況是否良好，同時(shí)還應檢查接種物的傳代培養情況以確定其是否污染，質(zhì)控菌株的MIC值是否處于質(zhì)控范圍。以肉眼觀(guān)察，藥物最低濃度管無(wú)細菌生長(cháng)者，即為受試菌的MIC。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點(diǎn)判斷，與陽(yáng)性生長(cháng)對照管比較抑制80%細菌生長(cháng)管藥物濃度為受試菌MIC。
根據NCCLS推薦的分界點(diǎn)值標準，判斷耐藥（resistant, R）、敏感(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。S表示被測菌株所引起的感染可以用該抗菌藥物的常用劑量治療有效，禁忌癥除外。R指該菌不能被抗菌藥物的常用劑量在組織液內或血液中所達到的濃度所抑制，或屬于具有特定耐藥機理（如β-內酰胺酶），所以臨床治療效果不佳。I是指MIC接近藥物的血液或組織液濃度，療效低于敏感菌。還表示被測菌株可以通過(guò)提高劑量（如β-內酰胺類(lèi)藥物）被抑制，或在藥物生理性濃集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介還作為“緩沖域”，以防止由微小的技術(shù)因素失控，所導致較大的錯誤解釋。

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