仙人掌桿菌的檢測

一﹑簡(jiǎn)介與意義:

      仙人掌桿菌(又稱(chēng)臘腸桿菌)，此類(lèi)細菌分布極廣，常污染實(shí)驗室之檢體，且革蘭氏染色結果時(shí)有變異，故易與革蘭氏陰性桿菌混淆，幸好因為它有產(chǎn)孢現象，可藉此加以區分。此類(lèi)微生物在各類(lèi)食品皆可分離，當此菌在食品中達10 個(gè)菌數，即可能發(fā)生食物中毒現象，其所引發(fā)的中毒現象可分成兩種型式，一為嘔吐型，主要系B.cereus產(chǎn)生毒素所致，屬毒素型，潛伏期短，約1-5小時(shí)，癥狀似Staphylococcus aureus引起之腸胃道癥狀;另一是腹瀉型，與B.cereus產(chǎn)生腸毒素有關(guān)，這種案例在某些地區時(shí)常發(fā)生，潛伏期4-16小時(shí)。此菌為G(+)，好氣性，長(cháng)桿菌，主要存在土壤中，容易經(jīng)由土壤﹑水污染生菜﹑米，進(jìn)而交叉污染到其它食品，生食到上述污染食品時(shí)，即會(huì )發(fā)生食品中毒，因此菌產(chǎn)孢，較為耐熱，如果食品經(jīng)煮熟后，每每有少數孢子殘存，倘若又未迅速冷卻，致使孢子易萌芽，進(jìn)而造成食物中毒，過(guò)去曾有多起案件，所以預防此類(lèi)微生物引發(fā)的食物中毒，食物之保藏是相當的重要。

二﹑原理:

(一)分離與篩選:利用MYP與KG平板培養來(lái)分離菌落，并利用B.cereus在此兩種平板產(chǎn)生典型菌落，來(lái)完成計數與分離。

1.MYP agar(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar):篩選:利用多黏菌素Polymyxin抑制雜菌。分離:利用

   B.cereus分解蛋黃(egg yolk)，使菌落呈現混濁現象，并藉B.cereus不能發(fā)酵這種培養基唯一的糖類(lèi)

  (Mannitol)，因此這種菌菌落不會(huì )有黃色出現(酚紅在酸性下會(huì )變成黃色，原來(lái)為紅色)。

2.TSB agar:原理同MYP agar，但缺少Mannitol，因此少了一種可篩選的特征。

(二)生化試驗:

1.觸酶試驗(Catalase test):此菌具有Catalase，可分解3% H₂O₂產(chǎn)生氣泡現象。

2.嫌氣下利用葡萄糖:此菌可在嫌氣下發(fā)酵葡萄糖，可使覆蓋石蠟之酚紅葡陶糖培養基變成黃色

3.硝酸鹽還原性(Reduction of nitrate):此菌具有此還原性，可將硝酸鹽nitrate (NO₃)還原成亞硝酸鹽nitaite (NO₂)，當加入指示劑時(shí)，NO2可與指示劑反應產(chǎn)生紅色現象。

4.石蕊牛乳試驗(Litmus milk test):此菌具有蛋白質(zhì)分解酵素(Protease)，可將脫脂乳(Skim milk)中蛋白質(zhì)分解成蛋白凍peptone，而使培養基變成澄清現象。

5.明膠分解試驗(Hydrolysis of gelatin):此菌可分解明膠，可將培養此菌的明膠培養基放在4-10℃冰箱中，30分鐘后，明膠會(huì )有不凝固現象。

6.淀粉分解試驗(Hydrolysis of starch):此菌可水解淀粉，所以將碘試劑加入淀粉培養基(Starch agar)中，此菌菌落周?chē)鷷?huì )出現透明圈，系因該區淀粉已被水解。

7.V-P test:此菌V-P反應呈現(-)。

8.溶血試驗:此菌具有溶血作用，可使血液培養基(Blood agar)平板之菌落出現透明環(huán)。

9.酚紅糖類(lèi)試驗:此菌不利用甘露糖醇(D-Mannitol)，在含有此種糖類(lèi)之培養基不會(huì )變色(紅色)，而此菌可利用蔗糖(Sucrose)，水楊甘(Salicin)，甘油(Glycerol)，因此含有這三種糖類(lèi)的培養基會(huì )呈酸性(黃色)，但不產(chǎn)氣。

三﹑使用藥品﹑樣品與培養基

(一)培養基

1.甘露糖醇-蛋黃-多黏桿菌素(洋菜)培養基(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar，簡(jiǎn)稱(chēng)MYP agar)

牛肉抽出物(Beef extract) 1g 蛋白凍(Peptone)  10g

D-甘露糖醇(D-Mannitol) 10g  氯化鈉(NaCl) 10g

酚紅(Phenol red) 0.025g 洋菜(Agar) 15g

蒸餾水(Distilled water) 900ml  

加熱溶解后，以121℃滅菌15分鐘，最后pH值為6.8±0.2，冷卻至50℃，加入50ml無(wú)菌之蛋黃液(a)及每ml含1萬(wàn)單位的多黏桿菌素B硫酸鹽(Polymyxin B sulfate)溶液10ml(b)。培養基注入培養皿前，應搖動(dòng)混合，使絮狀沉淀物分散均勻，搖動(dòng)時(shí)應避免產(chǎn)生氣泡。

(a)蛋黃液之配制:雞蛋洗凈，浸入0.1%氯化汞溶液1小時(shí)，再浸入70%乙醇溶液中30分鐘，取出蛋黃加入等量

    之無(wú)菌生理食鹽水。

(b)每ml含1萬(wàn)單位多黏桿菌素B硫酸鹽溶液之配制:取50萬(wàn)單位多黏桿菌素B硫酸鹽，溶于33.3ml蒸餾水后，

    再以具有0.45um孔徑濾膜做無(wú)菌過(guò)濾。

      2.胰化酪蛋白-大豆-多黏桿菌素培養液(Trypticase-Soy-Polymyxin Broth，簡(jiǎn)稱(chēng)TSB):同葡萄狀球菌實(shí)驗

      3.營(yíng)養洋菜培養基(Nutrient agar):同E.coli實(shí)驗

      4.營(yíng)養培養基(Nutrient broth):同E.coli實(shí)驗

      5.酚紅葡萄糖培養液(Phenol red glucose broth):同金黃色葡萄狀球菌實(shí)驗

      6.硝酸鹽培養基(Nitrate broth)

(二)藥品:

     1.亞硝酸鹽試驗:

A solution:1g對-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125ml之 5N 醋酸(acetic acid)中。

      B solution:1g α-柰酚(α-naphthol)溶于200ml之5N 醋酸(acetic acid)中。

     2.碘試劑:1g KI溶于5ml蒸餾水;加0.5gI₂完全溶解后再加蒸餾水成100ml。

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